忻蓉 顧春健 婁志武 沈?qū)W萍

湖州地區(qū)1 814例新生兒耳聾基因篩查及突變位點(diǎn)分析

忻蓉 顧春健 婁志武 沈?qū)W萍

目的鉬了解湖州地區(qū)新生兒耳聾基因的攜帶率及突變類型。 方法 應(yīng)用飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)，對(duì)1 814例新生兒進(jìn)行GJB2、SLC26A4、GJB3、線粒體12SrRNA 4個(gè)常見(jiàn)耳聾基因20個(gè)熱點(diǎn)突變位點(diǎn)的檢測(cè)。 結(jié)果 1 814例新生兒中檢測(cè)出GJB2基因突變54例（2.98%），SLC26A4基因突變24例（1.32%），GJB3基因突變12例（0.66%），線粒體12SrRNA基因突變2例（0.11%）。結(jié)論 在湖州地區(qū)無(wú)耳聾家族史的新生兒中，GJB2和SLC26A4基因突變率較高，GJB3基因和線粒體12SrRNA基因突變較為少見(jiàn)。

新生兒 耳聾基因 突變

聽(tīng)力障礙是常見(jiàn)的出生缺陷，位于五大殘疾之首。聽(tīng)力障礙病因?qū)W研究顯示，全球范圍內(nèi)大約60%的耳聾患者與遺傳因素有關(guān)，而遺傳因素導(dǎo)致的聽(tīng)力損失在兒童聽(tīng)力損失患者中高達(dá)50%甚至60%以上[1]。近年來(lái)我國(guó)大規(guī)模耳聾分子流行病學(xué)研究表明，大部分耳聾由為數(shù)不多的幾個(gè)基因突變引起，如GJB2、SLC26A4、GJB3及線粒體12SrRNA，這為臨床上規(guī)?；_(kāi)展耳聾基因診斷和遺傳咨詢奠定了重要的理論基礎(chǔ)[2]。本研究應(yīng)用耳聾基因檢測(cè)技術(shù)，對(duì)在我院出生的1 814例新生兒上述4個(gè)常見(jiàn)耳聾基因20個(gè)熱點(diǎn)突變位點(diǎn)進(jìn)行了檢測(cè)，并對(duì)其臨床應(yīng)用價(jià)值作一探討，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 2014年2月至2015年6月在湖州市婦幼保健院出生的活產(chǎn)新生兒1 814例，其中男989例，女825例。所有受檢新生兒均由監(jiān)護(hù)人簽署知情同意書。

1.2 方法 采集新生兒臍帶血于特殊濾紙卡，2～8℃條 件下保存并及時(shí)送檢。利用飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)對(duì)耳聾基因進(jìn)行檢測(cè)，包括GJB2、SLC26A4、GJB3、線粒體12SrRNA 4個(gè)耳聾基因的 20個(gè)熱點(diǎn)突變位點(diǎn)。突變位點(diǎn)為GJB2基因的235delC、299_300delAT、35delG、176_191del16、167delT突變，SLC26A4基因的 IVS7-2A＞G、c.2168A＞G、c.1174A＞T、c.1229C＞T、c.1226G＞A、c.2027T＞A、c.2162C＞T、c.281C＞T、c.589G＞A、c. 1975G＞C、IVS15+5G＞A突變，GJB3基因的538C＞T、547G＞A突變，線粒體12SrRNA基因的1494C＞T、1555A＞G突變。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料以構(gòu)成比表示，男女新生兒耳聾基因篩查陽(yáng)性率比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

本組新生兒中92例（5.07%）耳聾基因篩查陽(yáng)性，其中男新生兒50例（54.35%），女新生兒42例（45.65%），男女新生兒耳聾基因陽(yáng)性率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。本組新生兒耳聾基因突變位點(diǎn)分布情況見(jiàn)表1，其中幾種常見(jiàn)突變位點(diǎn)類型的基因檢測(cè)陽(yáng)性峰圖見(jiàn)圖1。

表1 1 814例新生兒耳聾基因突變位點(diǎn)分布情況[例（%）]

圖1 幾種常見(jiàn)新生兒耳聾基因突變位點(diǎn)類型的基因檢測(cè)陽(yáng)性峰圖

3 討論

耳聾嚴(yán)重影響人類的生活質(zhì)量，是造成終生殘疾的最主要問(wèn)題之一。遺傳性聾是繼發(fā)于基因或染色體異常等遺傳缺陷導(dǎo)致的聽(tīng)力障礙[3]。通過(guò)基因篩查不僅可以發(fā)現(xiàn)遺傳性聾患者，更重要的是發(fā)現(xiàn)藥物敏感性和遲發(fā)性聾基因攜帶者，從而早期對(duì)耳聾患者實(shí)施干預(yù)和康復(fù)，使其聾而不??；還可對(duì)耳聾基因攜帶者進(jìn)行預(yù)警及耳聾防治知識(shí)的宣教，有效預(yù)防和減少耳聾的發(fā)生；并且通過(guò)進(jìn)一步的耳聾遺傳咨詢，可以避免生育聾兒。目前，對(duì)新生兒進(jìn)行普遍的耳聾基因篩查理念正逐漸被人們接受，國(guó)內(nèi)針對(duì)新生兒進(jìn)行的耳聾基因篩查項(xiàng)目越來(lái)越多。2011年，王秋菊等[4]報(bào)道了針對(duì)14 913例中國(guó)新生兒耳聾基因檢測(cè)，共發(fā)現(xiàn)306例攜帶至少1條突變等位基因，突變率為2.05%，遠(yuǎn)高于經(jīng)聽(tīng)力篩查確認(rèn)的聽(tīng)力障礙率0.1%～0.3%。而本組新生兒耳聾基因突變率達(dá)5.07%，明顯高于文獻(xiàn)報(bào)道，可能與本研究篩查的耳聾基因位點(diǎn)較多有關(guān)。

GJB2基因突變是最常見(jiàn)的耳聾基因突變類型，為常染色體隱性遺傳；GJB2基因突變有地域性，在歐美地區(qū)突變率比較高的是35delG，地中海地區(qū)突變率比較高的是167delT，在我國(guó)突變率比較高的是235delC，其次為299_300delAT、176_191del16[5]。本組新生兒GJB2基因突變也集中在這3個(gè)位點(diǎn)，未檢測(cè)到 35delG、167delT突變。SLC26A4基因突變是引起遺傳性耳聾的第二大原因，為常染色體隱性遺傳；SLC26A4基因與大前庭水管綜合征（EVAS）有關(guān)，IVS7-2A＞G突變類型在國(guó)人EVAS患者中最常見(jiàn)[6]，本組新生兒該基因也是IVS7-2A＞G突變檢出率最高；及時(shí)檢測(cè)出SLC26A4基因突變可以指導(dǎo)家長(zhǎng)在日常生活中注意患兒的防護(hù)，避免一些過(guò)度運(yùn)動(dòng)、感冒、頭部外傷等因素導(dǎo)致耳聾發(fā)生。另外，GJB3和線粒體12SrRNA基因突變率雖然不高，分別為0.66%和0.11%，但它們的臨床意義重大。本組新生兒GJB3 547G＞A雜合突變8例、538C＞T雜合突變4例，這些患兒有發(fā)生遲發(fā)性聽(tīng)力損失的可能。因此，即使通過(guò)聽(tīng)力篩查患兒仍需長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)其聽(tīng)力情況，觀察聽(tīng)力變化，盡早發(fā)現(xiàn)異常。而線粒體12SrRNA1555A＞G同質(zhì)突變2例，為致病突變,此基因檢測(cè)結(jié)果的獲知對(duì)新生兒及其家系所有母系成員均起到預(yù)警作用，禁止使用氨基糖苷類藥物，避免“一針致聾”的悲劇發(fā)生。

值得注意的是，隨著耳聾分子遺傳學(xué)的研究進(jìn)展和越來(lái)越多的耳聾基因的發(fā)現(xiàn)，耳聾的分子診斷已經(jīng)應(yīng)用于臨床。分子檢測(cè)結(jié)果中存在眾多的不確定性和難以解釋的因素，如某個(gè)基因的多態(tài)和單一位點(diǎn)的雜合突變，僅有基因檢測(cè)的結(jié)果不能準(zhǔn)確說(shuō)明新生兒的聽(tīng)力狀況和預(yù)后[7]，需聯(lián)合聽(tīng)力篩查情況綜合分析。對(duì)于聽(tīng)力篩查通過(guò)而基因篩查未通過(guò)的新生兒要進(jìn)行進(jìn)一步的基因診斷、遺傳咨詢以及聽(tīng)力學(xué)監(jiān)控和隨訪；對(duì)于聽(tīng)力篩查未通過(guò)而基因篩查通過(guò)的則仍要行進(jìn)一步的聽(tīng)力學(xué)和基因診斷；對(duì)于聽(tīng)力和基因篩查均通過(guò)的進(jìn)入目前成熟

的聽(tīng)力篩查流程,但是不排除其它基因?qū)е碌倪t發(fā)性聽(tīng)力減退的情況。另一方面，不要過(guò)度夸大基因篩查的作用和意義，因技術(shù)限制和成本效益比的考慮，供篩查的目標(biāo)突變數(shù)量有限，能夠普遍開(kāi)展的是耳聾易感基因熱點(diǎn)突變位點(diǎn)的篩查,而不是基因診斷[8]。目前基因篩查的費(fèi)用仍較高，雖然臨床意義較大，但如聽(tīng)力篩查一樣全面鋪開(kāi)，仍有一定難度，尤其是在欠發(fā)達(dá)地區(qū)。隨著科學(xué)技術(shù)不斷進(jìn)步，筆者相信會(huì)有越來(lái)越多經(jīng)濟(jì)實(shí)用的基因檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用于臨床，服務(wù)于患者。

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Screening for neonatal deafness-related gene mutation sites

XIN Rong，GU Chunjian,LOU Zhiwu,et al.Department of Otolaryngology,Huzhou Maternal&Child Health Care Hospital,Huzhou 313000,China

【 Abstract】 Objective To screen neonatal deafness-related gene mutation sites. Methods Twenty mutation sites of 4 deafness susceptibility genes(GJB2,SLC26A4,GJB3 and mitochondria 12SrRNA)were examined with time-of-flight mass spectrometer in 1814 newborns from Huzhou area of Zhejiang Province. Results Among 1814 newborns，GJB2,SLC26A4, GJB3 and 12SrRNA mitochondrial gene mutations were detected in 54(2.98%),24(1.32%),12(0.66%)and 2(0.11%)newborns, respectively. Conclusion GJB2 and SLC26A4 gene mutation rates are in newborns without family history of hearing loss in Huzhou area.

Newborns Deafness gene Mutation

2015-07-21）

（本文編輯：李媚）

湖州市科學(xué)技術(shù)局公益性技術(shù)應(yīng)用研究項(xiàng)目（2014GYB16）

313000 湖州市婦幼保健院耳鼻咽喉科（忻蓉、婁志武），兒科（顧春?。a(chǎn)前診斷中心(沈?qū)W萍)

忻蓉，E-mail:xinrong200509@aliyun.com