王長(zhǎng)宏，劉明暉*，王 璞，竇逾常

(1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 中醫(yī)科，長(zhǎng)春130031;2.吉林大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院2013級(jí)，長(zhǎng)春130021)

研究［1-2］表明，表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-α)在消化性潰瘍修復(fù)愈合過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用，已成為近年來(lái)消化性潰瘍研究的熱點(diǎn)［3］。本文以 EGF、TGF-α 作為觀察指標(biāo)探討六君子湯治療胃潰瘍的作用機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康成年Wistar大鼠40只，雌雄各半，SPF級(jí)，體質(zhì)量(200±20)g，由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào):SCXK(吉)20110004，通風(fēng)、光照良好，自由進(jìn)食與飲水。

1.2 藥物與試劑 六君子湯(人參9 g，白術(shù)9 g，茯苓9 g，甘草6 g，陳皮3 g，半夏4.5 g，由吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院中藥房提供，經(jīng)我院執(zhí)業(yè)中藥師鑒定均為地道藥材);奧美拉唑腸溶片(洛賽克，阿斯利康制藥有限公司，20 mg/片，批號(hào):1304139);表皮生長(zhǎng)因子(EGF)ELISA試劑盒、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-α)ELISA試劑盒(美國(guó)R＆D公司，批號(hào):20081217)。

1.3 儀器與設(shè)備 K15低溫離心機(jī)(美國(guó)Sigma公司);AEU-210電子分析天平(長(zhǎng)沙湘儀天平儀器廠);HH-S恒溫水浴鍋(江蘇醫(yī)療儀器廠);PW-960多功能全自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)，MB酶標(biāo)儀(深圳匯松科技有限公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 藥物制備 將六君子湯水煎分別濃縮成含量為1.60 g生藥/mL(高劑量組)和0.80 g生藥/mL(低劑量組)的藥液，4℃冰箱保存?zhèn)溆?奧美拉唑腸溶片用生理鹽水稀釋成30%的藥液，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 動(dòng)物模型復(fù)制 將Wistar大鼠40只隨機(jī)分成假手術(shù)組、模型組、中藥高劑量組、中藥低劑量組、奧美拉唑組5組，每組8只，雌雄各半，按照Takagi A［4］等方法，大鼠麻醉腹部，將冰乙酸注入胃黏膜下層處，生理鹽水清洗局部，縫合腹壁;假手術(shù)組造模時(shí)于胃黏膜下層處注射相同劑量的生理鹽水。術(shù)后3 d開(kāi)始給藥，中藥高劑量組16.0 g/kg體質(zhì)量1次/d灌胃(相當(dāng)于成人劑量的10倍);中藥低劑量組8.0 g/kg體質(zhì)量1次/d灌胃(相當(dāng)于成人劑量的5倍);奧美拉唑組4 mg/kg體質(zhì)量1次/d灌胃;假手術(shù)組及模型組給予低劑量等容積的生理鹽水，以上各組治療天數(shù)均為14 d。

2.3 標(biāo)本采集與檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，麻醉大鼠，打開(kāi)腹腔，摘取全胃，沿胃大彎剪開(kāi)胃。測(cè)量并計(jì)算:潰瘍指數(shù)=潰瘍最大長(zhǎng)徑×垂直于最大長(zhǎng)徑的最大寬徑，潰瘍抑制率=(1－實(shí)驗(yàn)各組潰瘍指數(shù)均值/模型組潰瘍指數(shù)均值)×100%［5］。電子天平秤取0.3～0.4 g胃組織，加入冰生理鹽水，制成組織勻漿液，離心，冷凍保存待測(cè)EGF及TGF-α，檢測(cè)方法均采用ELISA法，檢測(cè)過(guò)程嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠潰瘍面積及潰瘍抑制率比較 見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠潰瘍面積和潰瘍抑制率比較(±s，n=8)

表1 各組大鼠潰瘍面積和潰瘍抑制率比較(±s，n=8)

注:與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01;與奧美拉唑組比較，△P＜0.05;與中藥高劑量組比較，▲P＜0.05

/%假手術(shù)組組 別 潰瘍面積/mm2 潰瘍抑制率——34.8模型組 26.9±9.98 —中藥高劑量組 10.1±4.63##△ 62.8中藥低劑量組 19.6±6.03##▲ 27.3奧美拉唑組 17.6±6.17#

3.2 對(duì)各組大鼠胃黏膜組織中EGF、TGF-α的影響見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠胃黏膜組織中EGF、TGF-α含量的比較(±s，n=8)pg/mL

表2 各組大鼠胃黏膜組織中EGF、TGF-α含量的比較(±s，n=8)pg/mL

注:與模型組比較，##P＜0.01;與奧美拉唑組比較，△△P＜0.01

組 別 EGF TGF-α假手術(shù)組 39.43±5.35 56.48±7.55模型組 21.44±4.33 27.86±4.34中藥高劑量組 36.54±5.29##△△ 45.26±5.73##△△中藥低劑量組 33.58±4.85## 42.55±5.64##奧美拉唑組 31.72±5.64## 39.36±6.26##

4 小結(jié)

EGF是一種具有抑制胃酸分泌、促進(jìn)上皮細(xì)胞增殖、組織修復(fù)和細(xì)胞保護(hù)作用的內(nèi)源性物質(zhì)，通過(guò)作用于靶細(xì)胞膜上的特異性受體EGFR激活調(diào)節(jié)蛋白并通過(guò)酶促反應(yīng)而發(fā)揮其生物效應(yīng)［6］。TGF-α是EGF家族中另一參與胃黏膜損傷后修復(fù)的調(diào)節(jié)肽，由黏膜細(xì)胞自身合成，是維持胃黏膜完整性的主要介質(zhì)，被稱為“黏膜完整肽”，通過(guò)結(jié)合并激活EGFR，并作為自分泌或旁分泌生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)EGFR磷酸化，從而將持續(xù)分裂信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)到細(xì)胞內(nèi)，引起細(xì)胞增值、分化［7-8］。研究［9］發(fā)現(xiàn)，一旦潰瘍形成，無(wú)論何種原因，均有著相似的修復(fù)及愈合過(guò)程。目前，在潰瘍愈合方面有學(xué)者提出了潰瘍愈合質(zhì)量(QOUH)的概念，包括缺失黏膜的修復(fù)及其黏膜下組織結(jié)構(gòu)與功能的重建［10-11］。EGF、TGF-α 是一組能直接影響 QOUH 的表皮生長(zhǎng)因子相關(guān)蛋白，通過(guò)作用于共同的受體EGFR，發(fā)揮其黏膜修復(fù)與重建的功能。

本研究發(fā)現(xiàn)六君子湯［12］高、低劑量組與模型組、假手術(shù)組比較能縮小潰瘍面積，提高潰瘍抑制率，提高胃黏膜組織中EGF、TGF-α含量，說(shuō)明六君子湯可激發(fā)體內(nèi)合成和釋放內(nèi)源性EGF、TGF-α，促進(jìn)胃黏膜的修復(fù)與重建，保持胃黏膜的完整性，從而對(duì)損傷的大鼠胃黏膜起到了保護(hù)和修復(fù)的作用。

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