王文豐，王艷樹(shù)，馬 濤，王 琴，湯新金，2

(1.湖北省孝感市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢測(cè)中心，湖北孝感 432000；2.湖北省孝感市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣總站，湖北孝感 432000)

影響酶抑制率法檢測(cè)蔬菜中農(nóng)藥殘留準(zhǔn)確性因素的研究

王文豐1，王艷樹(shù)1，馬 濤1，王 琴1，湯新金1，2

(1.湖北省孝感市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢測(cè)中心，湖北孝感 432000；2.湖北省孝感市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣總站，湖北孝感 432000)

[目的]了解酶抑制率法檢測(cè)蔬菜中農(nóng)藥殘留的影響因素，為提高準(zhǔn)確度提供參考。[方法]采用酶抑制率法測(cè)定蔬菜中有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥，研究測(cè)定過(guò)程中提取溫度、提取時(shí)間、提取方法等對(duì)蔬菜上殘留農(nóng)藥提取效率的影響。[結(jié)果]測(cè)定過(guò)程中提取溫度、提取時(shí)間、提取方法等對(duì)蔬菜上殘留農(nóng)藥提取效率的影響有很大差別，25 ℃時(shí)15 min左右提取較充分，超聲波能夠提高提取效率。酶活性和酶反應(yīng)速率受溫度影響較大，37 ℃左右測(cè)定結(jié)果較好。[結(jié)論]為蔬菜中農(nóng)藥殘留檢測(cè)提供了新思路。

農(nóng)藥殘留；快速檢測(cè)；條件；準(zhǔn)確性

有機(jī)磷、氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥是目前使用廣泛的農(nóng)藥，傳統(tǒng)的GC/MS等能夠準(zhǔn)確、定量、定性地分析出具體的藥物殘留成分[1]，但是設(shè)備昂貴，另外，理化分析法的樣品前處理操作繁雜，費(fèi)時(shí)費(fèi)工，需要受過(guò)專(zhuān)門(mén)訓(xùn)練的技術(shù)人員，使其也難以在基層推廣應(yīng)用[2]，從而給農(nóng)產(chǎn)品安全監(jiān)管部門(mén)對(duì)農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)前、產(chǎn)中、產(chǎn)后的監(jiān)督工作帶來(lái)許多不便，由此也催生出大量的快速農(nóng)藥殘留的檢測(cè)技術(shù)。以乙酰膽堿酯酶抑制法為原理的酶抑制率法測(cè)定農(nóng)藥殘留具有快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，作為一種蔬菜農(nóng)藥初篩手段深受廣大基層食品監(jiān)督部門(mén)、生產(chǎn)基地及流通市場(chǎng)的歡迎[3]。但使用該方法檢測(cè)蔬菜農(nóng)藥殘留時(shí)受環(huán)境、提取條件、反應(yīng)溫度等因素影響嚴(yán)重，存在檢測(cè)結(jié)果重現(xiàn)性差等問(wèn)題。鑒于此，筆者對(duì)采用酶抑制率法檢測(cè)蔬菜中農(nóng)藥殘留準(zhǔn)確性的影響因素(提取溫度、提取時(shí)間、提取方式和反應(yīng)溫度)進(jìn)行了研究，以期為農(nóng)產(chǎn)品安全監(jiān)管提供借鑒。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1試劑與藥劑。乙腈、乙酸乙酯為色譜純；氯化鈉為分析純；農(nóng)殘快速檢測(cè)試劑盒由廣東深圳安鑫寶科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)；敵敵畏標(biāo)樣由農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心(天津)提供；添加農(nóng)藥為有效成分77.5%的敵敵畏，由湖北沙隆達(dá)股份有限公司生產(chǎn)。

1.1.2供試樣品。黃瓜和菠菜取自蔬菜集貿(mào)市場(chǎng)。

1.1.3儀器。6890n氣相色譜儀為安捷倫科技(中國(guó))有限公司產(chǎn)品；LDSJ-RM10農(nóng)殘速測(cè)儀為湖南利德集團(tuán)產(chǎn)品。

1.2 試驗(yàn)方法用50 μl/L 77.5%的敵敵畏溶液浸泡菠菜和黃瓜樣品1 min后取出，自然風(fēng)干。將風(fēng)干后的黃瓜和菠菜樣品分別分為兩部分，其中一部分參照《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》(NY/T761—2008)的方法使用安捷倫6890n氣相色譜儀對(duì)樣品中敵敵畏含量進(jìn)行定量檢測(cè)，另一部分參考《蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留量的快速檢測(cè)》(GB/T5009.199—2003)采用酶抑制率檢測(cè)農(nóng)藥殘留。

2 結(jié)果與分析

2.1 定量檢測(cè)結(jié)果根據(jù)《食品中農(nóng)藥殘留最大限量GB2763-2014》進(jìn)行判定，未添加敵敵畏的黃瓜和菠菜樣品均未檢出敵敵畏殘留；添加敵敵畏的黃瓜樣品中敵敵畏殘留量(0.09 mg/kg)未超過(guò)限量標(biāo)準(zhǔn)(0.20 mg/kg)，添加敵敵畏的菠菜樣品中敵敵畏殘留量(1.69 mg/kg)超過(guò)了限量標(biāo)準(zhǔn)(0.20 mg/kg)。

2.2 提取溫度對(duì)蔬菜中農(nóng)藥殘留量快速檢測(cè)的影響由圖1可知，低溫條件下提取液對(duì)殘留在蔬菜上的農(nóng)藥提取不充分，對(duì)測(cè)定結(jié)果影響較大，25 ℃時(shí)提取效率較高，測(cè)定的抑制率達(dá)到最大。

2.3 提取時(shí)間對(duì)蔬菜中農(nóng)藥殘留量快速檢測(cè)的影響由圖2可知，隨著提取時(shí)間延長(zhǎng)，殘留在蔬菜上的農(nóng)藥逐漸溶解到提取液中，抑制率升高，提取時(shí)間為15 min左右時(shí)抑制率基本達(dá)到最大。

2.4 提取方式對(duì)蔬菜中農(nóng)藥殘留量快速檢測(cè)的影響由圖3可知，不同的提取方法對(duì)黃瓜和菠菜上殘留的農(nóng)藥提取效果存在很大差別，超聲波提取效果最好，振蕩提取效果稍差，靜置的提取效果較差。

2.5 反應(yīng)溫度對(duì)蔬菜中農(nóng)藥殘留量快速檢測(cè)的影響由圖4可知，酶的活性大多是隨著溫度的升高而先升高后降低，反應(yīng)溫度對(duì)乙酰膽堿酯酶活性影響較大，37 ℃左右時(shí)乙酰膽堿酯酶的活性達(dá)到最高，此時(shí)測(cè)定的抑制率也最高。

3 討論

用酶抑制法測(cè)定有機(jī)磷類(lèi)農(nóng)藥最直接、最專(zhuān)一，且方法靈敏，對(duì)前處理步驟要求相對(duì)較低[4]，但是測(cè)定的環(huán)境溫度、提取條件等因素對(duì)殘留在蔬菜上的農(nóng)藥提取效果影響較大，通過(guò)試驗(yàn)結(jié)果分析，提取環(huán)境溫度為25 ℃時(shí)，經(jīng)過(guò)15 min提取液對(duì)殘留在蔬菜上的農(nóng)藥提取效果較好，但隨著溫度的升高、時(shí)間的延長(zhǎng)蔬菜組織液滲出過(guò)多，對(duì)測(cè)定結(jié)果影響較大，超聲波可提高提取效率。乙酰膽堿酯酶是由動(dòng)物體中提取得到的，其活性受溫度等環(huán)境條件影響較大，酶反應(yīng)速率隨溫度變化先升高后降低，反應(yīng)溫度為37 ℃時(shí)測(cè)定結(jié)果較好。

[1] 鐘峰，楊曉云，李小璽，等.農(nóng)藥殘留檢測(cè)的技術(shù)研究進(jìn)展[J].世界農(nóng)藥，2008，30(6)：40-44.

[2] 楊東鵬，張春榮，董民，等.用于檢測(cè)蔬菜有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留的酶抑制分光光度法研究進(jìn)展[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2004，20(2)：37-39.

[3] 彭少杰，吳衛(wèi)平，趙宇翔，等.基于重組乙酰膽堿酯酶的有機(jī)磷和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法的應(yīng)用驗(yàn)證[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2012，20(7)：1636-1638.

[4] 王小紅.酶抑制法檢測(cè)蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法研究[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2006.

Research on Influencing Accuracy Factors of the Enzyme Inhibition Rate Method Detecting Pesticide Residues in Vegetables

WANG Wen-feng, WANG Yan-shu, MA Tao et al

(Agricultural Products Quality-safety Supervision and Inspection Center of Xiaogan City, Xiaogan, Hubei 432000)

[Objective] Influencing factors of the enzyme inhibition rate method detecting pesticide residues in vegetables were studied to improve accuracy. [Method] Organophosphorus pesticides in vegetables were detected by the enzyme inhibition rate method, and effects of some influencing factors on extraction efficiency of pesticide residues in vegetables were studied, such as extraction time, extraction temperature and extraction method. [Result] During the process of detection, the factors like extraction temperature, extraction time and extraction methods had much difference in the extraction efficiency of pesticide residues in vegetables, and pesticide residues could be extracted more fully at 25 ℃ for 15 minutes or so. Ultrasound could improve the extraction efficiency. Enzyme activity and enzyme reaction rate were much affected by temperature, and the detection result was better at about 37 ℃. [Conclusion] The results provide new idea for the detection of pesticide residues in vegetables.

Pesticide residues; Rapid detection; Conditions; Accuracy

王文豐(1966- )，男，湖北孝感人，高級(jí)農(nóng)藝師，從事土壤肥料和農(nóng)產(chǎn)品安全研究。

2015-03-17

S 188+.3

A

0517-6611(2015)12-121-02