丁 威，楊劍波，，趙 勇，陳 軍，吳井生，，張建生，邢 軍*

(1.江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院畜牧獸醫(yī)系，江蘇句容 212400；2.鎮(zhèn)江牧苑動物科技開發(fā)有限公司，江蘇句容 214200)

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中草藥添加劑對育肥豬免疫功能的影響

丁 威1，楊劍波1，2，趙 勇1，陳 軍1，吳井生1，2，張建生2，邢 軍1*

(1.江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院畜牧獸醫(yī)系，江蘇句容 212400；2.鎮(zhèn)江牧苑動物科技開發(fā)有限公司，江蘇句容 214200)

[目的]研究中草藥添加劑飼喂育肥豬(巴克夏×梅山豬)免疫功能的影響。[方法]選取48頭體重40 kg健康巴梅豬隨機(jī)分為對照組和3個試驗組。分別采集30、60和90 d血樣，檢測血清中總蛋白、白蛋白、免疫球蛋白IgG、IgM和補(bǔ)體C3水平。屠宰后對免疫器官進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，并進(jìn)行組織切片觀察。[結(jié)果]添加中草藥試驗組和對照組在總蛋白水平上差異不顯著；試驗Ⅰ組白蛋白水平在第30天顯著高于對照組(P<0.05)；試驗Ⅱ組血清中IgG水平在第30天顯著高于對照組(P<0.05)；Ⅱ組血清中IgM水平在第60天顯著低于對照組(P<0.05)，90 d極顯著低于對照組(P<0.01)；C3補(bǔ)體試驗組在第30天水平均顯著高于對照組(P<0.05)。屠宰組織器官觀察和組織學(xué)切片觀察均無明顯差異。[結(jié)論]中草藥飼料添加劑能夠促進(jìn)育肥豬的免疫功能。

中草藥；免疫功能；育肥豬

我國是養(yǎng)豬大國，生豬出欄量占世界半壁江山，而豬肉也是我國主要的肉食品之一[1]。隨著經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展和人民生活水平的提高，畜產(chǎn)品的質(zhì)量和安全越來越受到社會的關(guān)注。近年來，一些抗生素、激素以及其他化學(xué)合成藥物的濫用，致使畜產(chǎn)品藥物殘留和環(huán)境污染而危害到人類健康，甚至出現(xiàn)致死、致畸和致殘等相關(guān)報道[2]。因此，開發(fā)新的替代產(chǎn)品也隨之呼之欲出。中草藥添加劑依據(jù)中獸醫(yī)理論和動物不同生理需要，由一種或多種不同性味功能的中草藥配制而成的飼料添加劑[3]，并因其副作用小、天然性和無抗藥性等優(yōu)點現(xiàn)已成為飼料添加劑研究的熱點。中草藥醫(yī)學(xué)研究和實踐表明中草藥作為飼料添加劑能夠調(diào)節(jié)動物機(jī)體免疫力?；诖?，筆者通過設(shè)計3種中草藥添加劑組方，研究不同組方對育肥豬(巴克夏×梅山豬)免疫功能(總蛋白、白蛋白、IgG、IgM、C3)的影響，以期為生豬健康養(yǎng)殖提供一定的理論基礎(chǔ)和生產(chǎn)實踐依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1試驗豬。巴克夏×梅山豬雜交商品豬，由鎮(zhèn)江牧苑動物科技開發(fā)有限公司提供。

1.1.2中草藥添加劑。中草藥Ⅰ組方由白術(shù)、茯苓、陳皮、炒麥芽、炒山楂等組成；中草藥Ⅱ組方由黃芪、首烏藤、淫羊藿、穿心蓮、甘草等組成；中草藥Ⅲ組方由神曲、蒼術(shù)、當(dāng)歸、柏子仁、甘草等組成；按照一定比例混合粉碎過100目篩即可。

1.1.3飼料配方。豬營養(yǎng)需要參考美國NRC標(biāo)準(zhǔn)和地方養(yǎng)豬生產(chǎn)實際情況，確定試驗豬的基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平(表1～2)。

1.2 試驗方法

1.2.1飼養(yǎng)試驗。選擇體重40 kg左右的巴克夏×梅山豬雜交商品豬48頭，按“體重相近、公母各半”的方法隨機(jī)分成對照組、中草藥添加劑Ⅰ組、中草藥添加劑Ⅱ組、中草藥添加劑Ⅲ組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)4頭，重復(fù)組所喂日糧相同。預(yù)飼期7 d，待試驗豬體重達(dá)到100 kg左右時終止試驗時。飼喂采用群飼方法，每天定時飼喂2次，時間為7：30和15：00，自由飲水。

1.2.2血樣的采集。早晨空腹，耳緣靜脈醫(yī)用采血器靜脈采血，4 ℃冰箱靜置1 d，3 000 r/min離心10 min后分離血清，分裝于Eppendorf管中，于-80 ℃冰箱中冷凍保存，供分析測試用。

1.2.3血清生理免疫指標(biāo)的測定。按照試劑盒說明書測定總蛋白(TB)、白蛋白(ALB)、免疫球蛋白IgG、免疫球蛋白IgM和補(bǔ)體C3水平。

表1 基礎(chǔ)日糧的組成 %

表2 基礎(chǔ)日糧的營養(yǎng)水平

1.2.4病理組織學(xué)檢查。各組分別在試驗結(jié)束后，電擊后放血處死所有試驗用豬，檢查脾臟、腎臟、肝臟和腸系膜淋巴結(jié)，并采集1～2 cm2大小的組織樣，立即放入10倍于組織塊的4% 多聚甲醛溶液中固定并搖勻后，進(jìn)行常規(guī)石蠟組織切片。

1.3 數(shù)據(jù)處理所有數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，并進(jìn)行LSD多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 中草藥添加劑對豬血清總蛋白濃度的影響由表3可知，與對照組相比，各中草藥添加劑組血清中總蛋白水平在30、60和90 d差異不顯著，3個時間點檢測不同中草藥組方作為飼料添加劑均維持血清中總蛋白平衡水平，而中草藥Ⅲ組總白蛋白濃度低于對照組，分析認(rèn)為該組方的主要目的是促進(jìn)豬快速生長，改善胴體品質(zhì)。

表3 中草藥添加劑對豬血清中總蛋白濃度的影響

2.2 中草藥添加劑對豬血清白蛋白濃度的影響由表4可知，與對照組相比，各中草藥添加劑組血清中白蛋白水平在不同時間點均高于對照組，其中Ⅰ組中30 d與同期對照組相比差異顯著(P<0.05)，組間差異不顯著，說明中草藥添加劑能提高血清中白蛋白水平。

表4 中草藥添加劑對豬血清中白蛋白濃度的影響

注：同列不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

2.3 中草藥添加劑對豬免疫球蛋白IgG濃度的影響由表5可知，Ⅱ組血清中免疫球蛋白IgG濃度在30 d與對照組相比顯著高于對照組(P<0.05)，說明中草藥能夠提高機(jī)體IgG水平。但是，在90 d試驗組與對照組差異不顯著，而90 d對照組高于試驗組，究其原因可能是因為中草藥在試驗早期能提高IgG水平，但后期機(jī)體增加效果不顯著。

表5 中草藥添加劑對豬血清中免疫球蛋白IgG的影響

注：同列不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

2.4 中草藥添加劑對豬免疫球蛋白IgM濃度的影響由表6可知，試驗組Ⅲ組和對照組血清中免疫球蛋白IgM濃度在60 d顯著高于試驗Ⅱ組(P<0.05)，90 d與試驗Ⅱ組差異極顯著(P<0.01)；中草藥Ⅰ組IgM濃度在90 d顯著高于試驗Ⅱ組(P<0.05)，分析認(rèn)為試驗Ⅱ組可能起到抑制腸道有害物質(zhì)的入侵，保護(hù)機(jī)體。

表6 中草藥添加劑對豬血清中免疫球蛋白IgM濃度的影響

注：同列不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)。

2.5 中草藥添加劑對補(bǔ)體C3濃度的影響由表7可知，各中草藥試驗組在30 d補(bǔ)體C3水平均顯著高于對照組，分析認(rèn)為早期中草藥添加劑能增強(qiáng)機(jī)體的體液免疫力。

表7 中草藥添加劑對豬血清中補(bǔ)體C3的影響

注：同列不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。

2.6 豬內(nèi)臟器官病理組織學(xué)觀察對試驗組和對照組育肥豬脾臟、腎臟、肝臟和腸系膜淋巴結(jié)的觀察發(fā)現(xiàn)，外觀顏色和大小正常，未見明顯病變。病理切片檢查發(fā)現(xiàn)，試驗組與對照組脾臟、腎臟、肝臟和腸系膜淋巴結(jié)組織切片形態(tài)均在正常范圍內(nèi)，未見特征性病理變化。

3 討論

總蛋白由白蛋白和免疫球蛋白等組成。在機(jī)體內(nèi)，總蛋白與白蛋白具有維持血漿膠體滲透壓、維持血漿正常pH、催化、運(yùn)輸、營養(yǎng)等功能[4]。該試驗結(jié)果表明，試驗組總蛋白水平與對照組相比差異不顯著，但白蛋白水平在30 d點，試驗Ⅰ組與對照組差異顯著(P<0.05)，且試驗Ⅰ組與Ⅱ組白蛋白3個時間點均高于對照組，中草藥Ⅰ組與Ⅱ組育肥豬機(jī)體免疫力提高，增強(qiáng)了機(jī)體自身營養(yǎng)水平，從而提高了育肥豬的抗病能力。

血清免疫球蛋白(Immunoglobulin，Ig)指標(biāo)的測定是衡量動物機(jī)體體液免疫功能最常用的方法[5]。體液免疫動物機(jī)體產(chǎn)生抗體的能力，對動物抵抗疾病具有重要防御功能。通常在抗原刺激下機(jī)體B淋巴細(xì)胞激活分化成記憶細(xì)胞和漿細(xì)胞，漿細(xì)胞產(chǎn)活性的球蛋白，即抗體與抗原發(fā)生特異性結(jié)合。免疫球蛋白按其理化特性和抗原性可分為IgA、IgD、IgE、IgG 和IgM。這些免疫球蛋白在機(jī)體防御系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的作用，也是機(jī)體免疫狀況的重要指標(biāo)。IgG是由脾臟和淋巴結(jié)中的漿細(xì)胞產(chǎn)生的一種免疫球蛋白，是人類和動物血清中含量最高的免疫球蛋白，是介導(dǎo)體液免疫的主要抗體，能抵抗多種細(xì)菌與毒素的侵襲，能夠有效保護(hù)機(jī)體免受感染，在機(jī)體免疫功能中具有重要作用。IgM是初次體液免疫應(yīng)答中最早出現(xiàn)的抗體，是近期感染的標(biāo)志，主要通過與補(bǔ)體結(jié)合，溶解病原體。補(bǔ)體是存在于正常人類和動物血清與組織液中的一組經(jīng)活化后具有酶活性的蛋白質(zhì)，不僅與動物機(jī)體的免疫系統(tǒng)存在密切關(guān)系，而且與血漿中其他酶系互相影響，既是動物機(jī)體中重要的生理性防衛(wèi)系統(tǒng)，又是炎癥反應(yīng)等病理損害的重要介質(zhì)，為多生物效應(yīng)的復(fù)雜系統(tǒng)。C3是補(bǔ)體系統(tǒng)中含量最多、最重要的一個組分，在補(bǔ)體系統(tǒng)發(fā)揮效應(yīng)功能的關(guān)鍵成分。該研究表明育肥豬飼料中添加中草藥能夠起到改善血清中免疫球蛋白和補(bǔ)體水平，血清中免疫球蛋白IgG與對照組差異顯著；C3補(bǔ)體水平基本維持在正常水平狀態(tài)，但在30 d試驗組顯著高于對照組。IgM水平在與對照組相比發(fā)現(xiàn)差異極顯著，分析可能飼料中中草藥添加劑能夠顯著抑制腸道有害物質(zhì)對機(jī)體的入侵。這些結(jié)果表明飼料中添加中草藥能夠起到改善機(jī)體的體液免疫功能。何正義等[6]研究表明中草藥添加劑能顯著提高杜長大育肥豬血清中免疫球蛋白IgG的水平。謝紅兵等[7]在杜長大斷奶仔豬基礎(chǔ)日糧中添加精制中草藥制劑，結(jié)果表明與對照組相比總蛋白、白蛋白、球蛋白、免疫球蛋白(IgG)和補(bǔ)體(C3)在血清中均有顯著提高[8]。杜改海等[9]育肥期梅山豬飼料中添加中草藥添加劑可顯著提高豬血清中免疫球蛋白IgG 含量和補(bǔ)體C3 含量，這與該研究結(jié)果相一致。該研究在飼料中添加中草藥添加劑的育肥豬IgM水平低于對照組，可能是因為該組方中一些中草藥飼料添加劑具有抗菌驅(qū)蟲的作用，尤其是清熱解毒類中草藥能有效抑制和殺滅細(xì)菌、病毒、寄生蟲等病原菌，保護(hù)機(jī)體免受病原微生物的侵害，防止傳染性疾病的發(fā)生。

中草藥添加劑是依據(jù)中獸醫(yī)理論和動物不同生理需要、由1種或多種不同性味功能的中草藥配制而成的飼料添加劑[3]，但中草藥是含有特殊活性物質(zhì)的動、植物組織，作為飼料添加劑取代抗生素而大量或不當(dāng)使用時，對飼養(yǎng)動物或人類健康也可能會有不利作用[3]。筆者觀察發(fā)現(xiàn)試驗組和對照組脾臟、腎臟、肝臟和腸系膜淋巴結(jié)外觀顏色和大小正常，未見明顯病變。病理切片檢查發(fā)現(xiàn)，試驗組與對照組脾臟、腎臟、肝臟和腸系膜淋巴結(jié)組織切片形態(tài)均在正常范圍內(nèi)，未見特征性病理變化，與杜改海等[9]的研究結(jié)果相一致。

該研究中草藥飼料添加劑對豬血清免疫球蛋白和補(bǔ)體水平結(jié)果表明，3種組方的中草藥復(fù)方制劑作為飼料添加劑能夠起到改善機(jī)體的體液免疫功能，由于試驗間隔時間點較長，對于其具體作用機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

[1] 李俊柱.中國養(yǎng)豬業(yè)未來10年發(fā)展趨勢[J].豬業(yè)科學(xué)，2012(2)：114-115.

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Effect of Chinese Herb Feed Additives on Immune Function in Fattening Pigs

DING Wei1, YANG Jian-bo1,2, ZHAO Yong1, XING Jun1*et al

(1.Jiangsu Polytechnic College of Agriculture and Forestry, Jurong, Jiangsu 212400; 2. Muyuan Development of Animal Science & Technology Co. Ltd in Zhenjiang City, Jurong, Jiangsu 212400)

[Objective] To study the effects of Chinese herbal medicine additive on immune function in fattening pigs (Berkshire ×Meishan pig). [Method] 48 fattening pigs with 40 kg were randomized into control group and 3 experimental groups. Serums were collected on 30, 60 and 90 d, respectively for total protein, albumin, IgG, IgM and complements C3 levels. Immune organs and tissue section were investigated. [Result] The results showed that total protein level were not significantly difference between the test groups and the control group; Albumin level in group I was significantly higher than that of the control group on 30 d; Serum IgG level in group Ⅱ was significantly higher than that in the control group(P<0.05); serum IgM level in group Ⅱ was significantly lower than the control group on 60 d(P<0.05), and was extremely significantly lower than that of the control group (P<0.01); The level of Complement C3 in experimental group were significantly higher than that in the control group (P<0.05). Immune organ and histological observation were not significantly difference among experimental groups and the control group. [Conclusion] Chinese herb feed additives do promote the immune functions in fattening pigs.

Chinese herbal medicine; Immune function; Fattening pig

江蘇省農(nóng)業(yè)三新工程項目(SXGC[2013]381)；江蘇省農(nóng)業(yè)三新工程項目(SXGC[2014]274)；江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新項目(CX(12)2037)；江蘇省科技支撐計劃項目(BE20123 32)；鎮(zhèn)江市科技支撐項目(NY2012027)；省級重點實驗室開發(fā)課題(K13036)。

丁威(1979- )，男，黑龍江巴彥人，副教授，博士，從事地方豬的遺傳繁育研究。*通訊作者，教授，博士，從事地方豬的保種和繁育研究。

2015-03-12

S 828

A

0517-6611(2015)11-136-03