王海鳴， 李支薇， 田光超， 任祥祥

(廣州廣電計量檢測股份有限公司，廣東廣州 510656)

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從海綿Pseudoceratinapurpurea中分離的化合物及其結(jié)構(gòu)鑒定

王海鳴， 李支薇， 田光超， 任祥祥*

(廣州廣電計量檢測股份有限公司，廣東廣州 510656)

對海綿Pseudoceratinapurpurea的化學(xué)成分進行系統(tǒng)研究。采用多種分離手段對海綿Pseudoceratinapurpurea進行化學(xué)成分的分離，運用多種波譜分析手段和與文獻報道對比的方法，對分離得到的化合物進行結(jié)構(gòu)鑒定。從海綿Pseudoceratinapurpurea中共分離得到9個化合物，經(jīng)鑒定為hyrtiosin A (1)，5-羥基-1H-吲哚-3-羧酸 (2)，11-hydroxy-12-(5-hydroxy-1H-indole-3-yl)-ethanone (3)，Stevensine (4)，Spongiacidin A (5)，Oroidin (6)，2-bromoaldisine (7)，Aaptamine (8)，demethylaaptamine (9)。所有化合物均為首次從海綿Pseudoceratinapurpurea中分離得到。

海綿Pseudoceratinapurpurea；化合物；結(jié)構(gòu)鑒定

海洋中蘊藏著非常豐富的海洋天然生物資源，是一個巨大的天然產(chǎn)物寶庫。海綿是其中最原始的低等生物[1-2]。近年來，國內(nèi)外對海綿的研究非常活躍，已從不同海域不同海綿中分離出數(shù)百種結(jié)構(gòu)新穎的化學(xué)成分。目前為止，海洋生物中新化合物的最大來源仍是海綿[3]。我國南海環(huán)境特殊，憑借其低污染和物種豐富等優(yōu)勢，成為海洋生物研究者們競相前往尋求原料的首選[4]。據(jù)文獻報道，維隆格海綿目海綿Verongiida含有豐富的溴代衍生物，而目前關(guān)于該目海綿Pseudoceratinapurpurea的報道尚少。為尋求具有抗腫瘤、抗病毒等活性的化合物，筆者從南海采集海綿Pseudoceratinapurpurea進行系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，采用1H NMR、13C NMR、UV、ESI-MS等分析手段及與文獻報道對比方法，對從該海綿中獲得的單體化合物進行結(jié)構(gòu)鑒定。

1 材料與方法

1.1 試驗儀器和材料Waters 2695高效液相色譜儀(二極管陣列檢測器，分析柱：4.6 mm×150 mm，半制備柱：10 mm×250 mm，5 μm，Phenomenex，美國Waters公司)；Brucker Avance 600 型核磁共振波譜儀(德國Bruker公司)； Lambda 35紫外可見分光光度計(美國Perkin-Elmer公司)；N-1100V-W旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(日本東京理化株式會社)；LCQDecaXP ESI質(zhì)譜儀(美國Finnigan公司)；Sephadex LH-20(美國GE Healthcare公司)；柱層析硅膠(青島海洋化工有限公司生產(chǎn))；其他所用試劑均為分析純。

1.2 生物材料采樣于海南省文昌縣附近海域，濕重5 kg。經(jīng)荷蘭阿姆斯特丹大學(xué)動物學(xué)博物院Rob van Soest 博士鑒定為海綿Pseudoceratinapurpurea，標(biāo)本現(xiàn)存于廣州廣電計量檢測股份有限公司藻種室。

1.3 分離純化室溫下用乙醇-二氯甲烷(2∶1，V∶V)浸提3次，每次10 d，將所得的粗提物加1體積水混懸，依次采用有機溶劑乙酸乙酯和正丁醇萃取，減壓回收萃取溶劑，得到乙酸乙酯部萃取物28.11 g和正丁醇部萃取物13.15 g。對乙酸乙酯部萃取物和正丁醇部萃取物采用Sephadex LH-20、硅膠柱色譜和半制備高效液相色譜等方法進行分離、純化。

1.4 化合物1～9的結(jié)構(gòu)鑒定運用1H NMR、13C NMR、UV、ESI-MS等分析手段及與文獻報道對比方法，對獲得的單體化合物1～9進行結(jié)構(gòu)鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 化合物1～9的分離純化乙酸乙酯部萃取物(28.11 g) 采用正相硅膠層析 (Pet:=(10∶0)～(0∶10)，V∶V)分離，然后根據(jù)薄層色譜檢測結(jié)果合并近似流份，共得到9個分離部位(A～I)。部位C使用Sephadex LH-20(MeOH)再次分離，根據(jù)薄層色譜檢測結(jié)果合并近似流份，得到3個子分離部位C-1、C-2和C-3。C-2使用Sephadex LH-20(MeOH)再次分離，得到2個流份C-2-1和C-2-2，再用HPLC(MeOH∶H2O = 7∶93，V∶V)對C-2-1進行分離，得到化合物1(2.7 mg)和化合物2(3.6 mg)。E組分使用正相硅膠色譜 (CHCl3∶Me2CO=(1∶0)～(0∶1)，V/V)細化分離，得到4個子分離部位E-1～E-4。子部位E-4經(jīng)半制備HPLC (MeOH∶H2O=25∶75，V∶V)進行分離，得到化合物3 (6.7 mg)和化合物4 (1.8 mg)。F組分使用正相硅膠色譜 (CHCl3:Me2CO=(1∶0)～(0∶1)，V∶V)再次分離，得到5個子分離部位F-1～F-5。F-2用半制備HPLC (MeOH∶H2O=5∶95，V∶V)分離，得化合物5 (1.6 mg)和化合物6 (1.3 mg)。F-3直接采用半制備HPLC (流動相MeOH∶H2O=35∶65，V∶V)進行分離，得化合物7 (2 mg)。

正丁醇萃取物(13.15 g)采用正相硅膠層析，得到4個分離部位(J-1～J-4)。J-3用半制備HPLC (MeOH∶H2O=15∶85，V∶V)進行分離，得到化合物8 (2.6 mg)和化合物9 (3.1 mg)。

2.2 化合物1～9結(jié)構(gòu)鑒定化合物1～9的結(jié)構(gòu)見圖1?；衔?白色無定形粉末；ESI-MSm/z161 [M+H]+;1H NMR (600 MHz，DMSO)δH：11.90 (br，H-NH)，9.87 (s，H-10)，8.13(brd,J= 3.0 Hz，H-2)，7.40 (d，J= 2.5 Hz，H-4)，7.26 (d，J= 8.8 Hz，H-7)，6.74 (dd，J= 2.5，8.8 Hz，H-6);13C NMR (150 MHz，CD3OD)δC:184.2 (d，C-10)，152.1 (s，C-5)，138.1 (d，C-2)，133.2 (s，C-8)，125.3 (s，C-9)，117.3 (s，C-3)，113.2 (d，C-7)，113.1 (t，C-6)，104.4 (d，C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻[5]對照基本一致，因此將化合物1鑒定為hyrtiosin A。

化合物2白色無定形粉末；ESI-MSm/z177 [M+H]+;1H NMR (600 MHz，DMSO)δH:11.83 (brs，H-NH)，7.90(brd,J= 3.0 Hz，H-2)，7.55 (d，J= 2.5 Hz，H-4)，7.24 (d，J= 8.8 Hz，H-7)，6.75 (dd，J= 2.5，8.8 Hz，H-6);13C NMR (150 MHz，CD3OD)δC:193.6 (d，C-10)，152.0 (s，C-5)，138.1 (d，C-2)，130.0 (s，C-8)，125.5 (s，C-9)，128.2 (s，C-3)，111.4 (d，C-7)，113.0 (t，C-6)，104.4 (d，C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻[5]對照基本一致，因此將化合物2鑒定為5-羥基-1H-吲哚-3-羧酸。

化合物3白色無定形粉末；ESI-MSm/z191 [M+H]+;1H NMR (600 MHz，DMSO)δH:11.72 (brs，H-NH)，8.00 (brd，J= 3.0 Hz，H-2)，7.52 (d，J= 1.8 Hz，H-4)，7.33 (d，J= 8.8 Hz，H-7)，6.73 (dd，J= 2.5，8.8 Hz，H-6);13C NMR (150 MHz，CD3OD)δC:196.3 (d，C-10)，152.1 (s，C-5)，133.0 (s，C-8)，130.1 (d，C-2)，126.5 (s，C-9)，114.2 (s，C-3)，112.4 (d，C-7)，112.0 (t，C-6)，105.4 (d，C-4)。以上數(shù)據(jù)與文獻[5]對照基本一致，因此將化合物3鑒定為11-hydroxy-12-(5-hydroxy-1H-indole-3-yl)-ethanone。

化合物4橙色無定形固體；UV ёmax 224，235 nm; ESI-MSm/z386，388，390 [M+H]+;1H NMR (600 MHz，DMSO)δH:6.81 (s，H-12)，6.24 (t，J= 6.9 Hz，H-9)，3.56 (d,J= 7.0 Hz，H-8)；13C NMR (150 MHz，CD3OD)δC:161.2 (s，C-6)，126.1 (s，C-9)，120.8 (s，C-10)。以上數(shù)據(jù)與文獻[6]對照基本一致，因此將化合物4鑒定為Stevensine。

化合物5黃色無定形固體；UV ёmax 272，332 nm; ESI-MSm/z402，404，406 [M+H]+;1H NMR (600 MHz，DMSO)δH：3.40 (brs，H-8)，3.43 (brs，H-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻[7]對照基本一致，因此將化合物5鑒定為Spongiacidin A。

化合物6淺黃色油狀物；UVёmax 276，215 nm; ESI-MSm/z386，388，390 [M+H]+;1H NMR (600 MHz，DMSO)δH:12.70 (brs，H-NH)，10.43 ( brt，J= 5.6，5.5 Hz，H-NH)，8.53 (brt，J= 5.0，10.1 Hz，H-NH)，7.60 (brs，H-NH2)，7.06 (s，H-4)，6.81 (s，H-15)，6.21 (brd，J= 16.3 Hz，H-10)，6.12 (dd，J= 10.0，15.7，5.0 Hz，H-9)，3.93 (brt，J= 5.0，11.3 Hz，H-8);13C NMR (150 MHz，CD3OD)δC:158.4 (s，C-6)，148.2 (s，C-13)，128.3 (s，C-5)，128.1 (s，C-11)，128.0 (s，C-9)，117.2( d，C-10)，112.4 (s，C-4)，111.6 (s，C-15)，104.2 (s，C-3)，39.9 (t，C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻[8]對照基本一致，因此將化合物6鑒定為Oroidin。

化合物7白色粉末；ESI-MSm/z224，310 [M+H]+;1H NMR (600 MHz，DMSO)δH：6.60 (s，H-3)，3.52 (dd，J= 2.5，3.15 Hz，H-8)，2.80 (dd，J= 2.53，3.15 Hz，H-9);13C NMR (150 MHz，CD3OD)δC:194.0 (s，C-10)，161.1 (s，C-6)，129.3 (s，C-5)，124.4 (s，C-4)，110.6 (d，C-3)，105.2 (s，C-2)，43.1 (t，C-9)，36.01 (t，C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻[9]對照基本一致，因此將化合物7鑒定為2-bromoaldisine。

化合物8白色粉末；UV ёmax 240，254 nm; ESI-MSm/z229 [M+H]+;1H NMR (600 MHz，DMSO)δH:12.63 (brs，H-NH)，7.82 (t，J= 6.2，6.2 Hz，H-2)，7.41 (brt，J =6.9，4.1 Hz，H-5)，7.11 (s，H-7)，6.94 (d，J= 6.9 Hz，H-6)，6.34 (d，J= 6.2 Hz，H-3)，4.11 (s，H-OCH3)，3.80 (s，H-OCH3);13C NMR (150 MHz，CD3OD)δC:156.7 (s，C-9)，149.8 (s，C-3a)，142.1 (d，C-2)，133.9 (s，C-9a)，132.8 (s，C-6a)，131.1 (s，C-8)，129.7 (d，C-5)，116.5 (s，C-9b)，112.5 (d，C-6)，100.8 (d，C-7)，98.0 (d，C-3)，60.1 (q，C-OCH3)，56.3 (q，C-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[10]對照基本一致，因此將化合物8鑒定為Aaptamine。

化合物9ESI-MSm/z215 [M+H]+;1H NMR (600 MHz，DMSO)δH:12.62 (brs，H-NH)，10.11 (brs，H-OH)，7.83 (t，J= 6.6，6.7 Hz，H-2)，7.26 (brt，J= 5.1，7.2 Hz，H-5)，7.12 (s，H-7)，6.81 (d，J= 7.2 Hz，H-6)，6.34 (d，J= 7.1 Hz，H-3)，3.93 (s，H-OCH3);13C NMR (150 MHz，CD3OD)δC:152.1 (s，C-9)，151.6 (s，C-8)，149.6 (s，C-3a)，141.9 (d，C-2)，129.3 (d，C-5)，128.7 (s，C-9a)，127.9 (s，C-6a)，116.8 (s，C-9b)，112.8 (d，C-6)，97.1 (d，C-3)，56.2 (q，C-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[11]對照基本一致，因此將化合物9鑒定為demethylaaptamine。

3 結(jié)論

筆者對南海海綿Pseudoceratinapurpurea的化學(xué)成分進行了系統(tǒng)的研究，共從中分離得到9個化合物，分別為hyrtiosin A (1)，5-羥基-1H-吲哚-3-羧酸 (2)，11-hydroxy-12-(5-hydroxy-1H-indole-3-yl)-ethanone (3)，Stevensine (4)，Spongiacidin A (5)，Oroidin (6)，2-bromoaldisine (7)，Aaptamine(8)，demethylaaptamine (9)。這些化合物均為首次從海綿中分離得到。這些化合物是否有活性、有何種活性，還待進一步研究。

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Isolation and Identification of Compounds from the Marine SpongePseudoceratinapurpurea

WANG Hai-ming，LI Zhi-wei，TIAN Guang-chao，REN Xiang-xiang*

(Guangzhou GRG METROLOGY&TEST CO.，LTD，Guangzhou，Guangdong 510656)

The chemical constituents from the marine spongePseudoceratinapurpureawas studied. The compounds were isolated by a variety of techniques. The structures of these compounds were identified by spectrum analysis and comparing literatures. 9 compounds have been isolated from the marine spongePseudoceratinapurpurea, their structures were identified as follows:hyrtiosin A (1)，5- hydroxy -1H-indole-3-carboxylate (2)，11-hydroxy-12-(5-hydroxy-1H-indole-3-yl)-ethanone (3)，Stevensine (4)，Spongiacidin A (5)，Oroidin (6)，2-bromoaldisine (7)，Aaptamine (8)，demethylaaptamine (9). All the 9 compounds were isolated for the first time from the marine spongePseudoceratinapurpurea.

Marine spongePseudoceratinapurpurea;Compounds; Structure elucidation

王海鳴(1977- )，男，湖南邵陽人，工程師，從事分析化學(xué)方面的研究。*通訊作者，工程師，從事分析化學(xué)方面的研究。

2015-03-12

S 188；R 284.1

A

0517-6611(2015)11-005-03