閔濟富 高 建

HPLC法測定續(xù)斷接骨膠囊中川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量

閔濟富 高 建

目的采用高效液相色譜法測定續(xù)斷接骨膠囊中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量。方法色譜柱:Amethyst C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相:乙腈－水(28∶72)，檢測波長:212 nm，流速:1.0 mL/min。結(jié)果川續(xù)斷皂苷Ⅵ的質(zhì)量濃度線性范圍為0.019～0.612 mg/mL(r=0.999 9)，平均加樣回收率為100.89%，RSD=1.10%。結(jié)論該方法簡便快捷，結(jié)果準確可靠，可作為續(xù)斷接骨膠囊的質(zhì)量控制手段。

續(xù)斷接骨膠囊;高效液相色譜法;川續(xù)斷皂苷Ⅵ

續(xù)斷接骨膠囊是天長市中醫(yī)院骨傷科的協(xié)定方，經(jīng)現(xiàn)代提取技術(shù)、制備工藝加工制成的醫(yī)院制劑，由酒續(xù)斷、炙黃芪、當歸等中藥組成，具有續(xù)筋接骨、補益肝腎的功效，用于骨折中后期的治療，經(jīng)過我院老中醫(yī)十多年的臨床驗證，療效可靠。本處方中酒續(xù)斷為君藥，具有補肝腎、強筋骨、續(xù)折傷、止崩漏、安胎等功效［1］。續(xù)斷接骨膠囊的化學成分主要為三萜皂苷類、環(huán)烯醚萜苷類、黃酮類、生物堿類、揮發(fā)油類等，其中主要的有效成分為川續(xù)斷皂苷Ⅵ［2］。本文采用HPLC法對續(xù)斷接骨膠囊中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量進行測定，結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥 日本島津LC-10AT高效液相色譜系統(tǒng);N2000色譜工作站;Mettler Toledo公司ABS135-S型電子天平。

續(xù)斷接骨膠囊(天長市中醫(yī)院制劑室，批號:101001、101002、101003);川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品(南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司，標定純度:97.60%)。

1.2 對照品溶液制備 精密稱取川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品(純度:97.60%)6.27 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇1 mL溶解，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL含川續(xù)斷皂苷Ⅵ0.612 0 mg的溶液。

1.3 供試品溶液制備 取本品研細的粉末1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，置水浴加熱回流1.5 h，冷卻，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.4 陰性對照品溶液制備 按處方比例制備不含酒續(xù)斷的陰性樣品，同供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2 結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱:Amethyst C18柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);以乙腈 －水(28 ∶72)為流動相;檢測波長:212 nm;柱溫:25℃;流速:1.0 mL/min;進樣量:20 μL。理論塔板數(shù)按川續(xù)斷皂苷Ⅵ峰計算應不低于3 000，色譜圖見圖1～圖3。

2.2 線性關(guān)系考察 取“1.2”項下的對照品溶液，分別用流動相稀釋 0、2、4、8、16、32 倍，精密吸取上述溶液各20 μL注入液相色譜儀，測定峰面積積分值，以對照品濃度為橫坐標(X)，峰面積積分值為縱坐標(Y)，繪制標準曲線，回歸方程為Y=7 534 952 X+3 508，r=0.999 9。川續(xù)斷皂苷Ⅵ在0.019～0.612 mg/mL范圍內(nèi)，峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.3 精密度試驗 取同一濃度對照品溶液，連續(xù)進樣6次，結(jié)果得川續(xù)斷皂苷Ⅵ峰面積的RSD為2.04%(n=6)，表明進樣精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液20 μL，于0、2、4、6、8、10 h進樣測定，結(jié)果川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量的RSD為2.28%(n=6)，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 重復性試驗 取同一批樣品6份，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測定川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量，RSD為1.25%(n=6)，表明重復性良好。

2.6 加樣回收率試驗 精密稱取已知川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量的樣品9份(含量:6.67 mg/g)，分別精密加入1.5、2.5和3.5 mL濃度為1.33 mg/mL的川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品，按供試品溶液的制備方法制備溶液，測定含量并計算回收率得平均回收率為100.89%，RSD=1.10%(n=9)。見表1。

表1 川續(xù)斷皂苷Ⅵ加樣回收率實驗結(jié)果(n=9)

2.7 樣品含量測定 取不同批號樣品(批號為101001、101002、101003)，按“1.3”制備供試品溶液，按“2.1”項色譜條件進行HPLC分析，測定其中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量，見表2。

表2 不同批號樣品含量測定(n=3)

3 討論

本文采用HPLC對續(xù)斷接骨膠囊中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量進行測定，續(xù)斷皂苷Ⅵ的質(zhì)量濃度線性范圍為0.019～0.612 mg/mL(r=0.999 9)，平均加樣回收率為100.89%，RSD=1.10%，3批樣品中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的平均含量分別為 2.684 mg/粒、2.610 mg/粒和2.677 mg/粒。實驗中通過紫外分光光度法掃描，川續(xù)斷皂苷Ⅵ在212 nm處有最大吸收，以及參考相關(guān)研究［3，4］，本實驗采用 212 nm 作為檢測波長。

本文供試品溶液的制備方法在參照文獻［1，3］的基礎(chǔ)上進行優(yōu)化，依次對提取溶劑(甲醇∶乙醇∶水飽和正丁醇)、提取方法和時間(加熱回流1.5、3 h和超聲處理 30、60 min)、溶劑用量(50、100、200 mL)進行考察，結(jié)果顯示以甲醇50 mL加熱回流1.5 h時所測川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量最高，最終確定了供試品溶液的制備方法。

文獻報道的HPLC法測定川續(xù)斷皂苷Ⅵ的方法中，使用的流動相主要有乙腈 －水(31∶69)［5］，乙腈－水(30 ∶70)［3］，乙腈 －水(28 ∶72)［4］，甲醇 － 水(梯度洗脫)［6］，實驗中比較了不同比例的乙腈－水系統(tǒng)和甲醇－水系統(tǒng)，其中以乙腈－水(28∶72)為流動相，基線較平，分離度好。

HPLC對續(xù)斷接骨膠囊中川續(xù)斷皂苷Ⅵ進行定量分析，具有較好的準確度和靈敏度，實驗的重復性高。本方法可用于續(xù)斷接骨膠囊中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的定性及定量研究，為續(xù)斷接骨膠囊的質(zhì)量控制提供參考。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:309.

［2］劉二偉，吳帥，樊官偉.川續(xù)斷化學成分及藥理作用研究進展［J］.中華中醫(yī)藥學刊，2010，7(12):1421 － 1423.

［3］譚洪根，林生，張啟偉，等.高效液相色譜法測定續(xù)斷藥材中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量［J］.中國中藥雜志，2006，31(9):726－727.

［4］李大慶，王曼寧，梁曉麗，等.祛風止痛膠囊中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量測定［J］.醫(yī)藥導報，2012，31(6):791 － 792.

［5］董文桑，瞿發(fā)林，蔣燕.HPLC法測定舒筋活絡酒中川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量［J］.中國藥師，2008，11(3):284 －286.

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Determination of asperosaponinⅥin Xuduanjiegu capsule by HPLC

Min Jifu，Gao Jian
School of Pharmacy，Anhui University of Chinese Medicine，Hefei 230038，China

ObjectiveTo determine asperosaponinⅥ in Xuduanjegu capsule by HPLC.MethodsThe chromatography procedure was carried out using Amethyst C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)as an analytic column and acetonitrile－ water(28 ∶72，v/v)as a mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min.The detection wavelength was set at 212 nm.ResultsThe linear range of asperosaponinⅥ was between 0.019 mg/mL and 0.612 mg/mL(r=0.999 9).The average recovery rate of asperosaponin Ⅵ was 100.89%，with the RSD of 1.10%.ConclusionThe method is simple，accurate and reliable and can be used for the quality control of Xuduanjiegu capsule.

Xuduanjiegu capsule;HPLC;AsperosaponinⅥ

10.3969/j.issn.1000 －0399.2015.03.001

2013年安徽省高等教育振興計劃人才項目，安徽省學術(shù)和技術(shù)帶頭人后備人選培養(yǎng)資助

230038 合肥 安徽中醫(yī)藥大學藥學院(閔濟富，高建)

230022 合肥 安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院藥劑科(高建)

高建，gaojianayfy@163.com

(2014－10－23收稿 2014－12－27修回)