管遠(yuǎn)紅+王海燕+傅宏慶+王健程漢+曹斌+王濤

摘要：2011年7月至2013年6月間按照流行病學(xué)抽樣的方法對(duì)江蘇省某規(guī)模豬場(chǎng)進(jìn)行PRRS血清監(jiān)測(cè)。每月14日或15日分別采集空懷母豬、保育豬、育肥豬的血清樣品，共2089份，應(yīng)用商品化IDEXX公司的ELISA試劑盒對(duì)PRRS抗體進(jìn)行血清學(xué)監(jiān)測(cè)。結(jié)果表明，無(wú)論是空懷母豬、育肥豬還是保育豬，抗體陽(yáng)性率均較高，其中空懷母豬比保育豬和育肥豬的抗體水平更高。血清學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果表明，該豬場(chǎng)免疫程序合理，疫苗免疫效果好，免疫后抗體水平較高，且補(bǔ)免及時(shí)。

關(guān)鍵詞：豬繁殖與呼吸綜合征；血清學(xué)調(diào)查；抗體檢測(cè)；ELISA

中圖分類號(hào)：S852.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）11-0237-02

豬繁殖與呼吸綜合征（porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS）主要引起懷孕母豬后期流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎，仔豬呼吸道癥狀和斷奶前死亡率升高等。該病最早于1987年在美國(guó)被發(fā)現(xiàn)，隨后迅速蔓延全球各養(yǎng)豬業(yè)發(fā)達(dá)的國(guó)家和地區(qū)（北美洲，1987年；歐洲，1990年；亞洲，1991年）。該病毒于1991年由荷蘭Lelystad中央獸醫(yī)研究所在豬肺泡巨噬細(xì)胞中首次分離得到，并命名為L(zhǎng)elystad病毒（PRRSV歐洲型代表株），1992年美國(guó)研究人員在CL2621細(xì)胞上也分離到PRRSV（美洲型代表株VR2332）。我國(guó)于1996年由郭寶清首次分離報(bào)道該病毒，并證明為美洲型PRRSV感染所致[1-2]。為明確使用PRRS疫苗的種豬場(chǎng)血清抗體消除規(guī)律，以便更好地免疫控制PRRS的感染，本試驗(yàn)用商品化的ELISA試劑盒對(duì)江蘇某規(guī)模豬場(chǎng)不同日齡豬群進(jìn)行了PRRS疫苗免疫后的血清學(xué)監(jiān)測(cè)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1材料

被檢血清樣品采自江蘇省某自繁自養(yǎng)規(guī)模豬場(chǎng)不同生長(zhǎng)階段的免疫豬群；豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自IDEXX公司（lot：40959-W531）；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?/p>

1.2確定樣本采集數(shù)量

收集該規(guī)模豬場(chǎng)的資料，尤其是不同生長(zhǎng)期豬群體的大小和群體的變動(dòng)情況。為準(zhǔn)確了解豬群中PRRS抗體水平，根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)、流行病學(xué)確定試驗(yàn)樣本抽樣數(shù)為30份，在抽樣的過(guò)程中考慮實(shí)際操作的可行性，對(duì)部分樣本量進(jìn)行了調(diào)整。

1.3免疫程序

商品豬在4周齡時(shí)注射高致病性豬藍(lán)耳弱毒苗1頭份，母豬每年免疫3次。

1.4血清的分離

前腔靜脈無(wú)菌采集豬血2mL，分離血清-70℃保存。

1.5血清中PRRS特異性抗體的檢測(cè)

使用IDEXX公司ELISA檢測(cè)試劑盒測(cè)定PRRS抗體水平，具體操作按照說(shuō)明書進(jìn)行，測(cè)定650nm處吸光度D650nm。

結(jié)果統(tǒng)計(jì)和判斷：陽(yáng)性對(duì)照平均值減去陰性對(duì)照平均值≥0.015，且陰性對(duì)照平均值<0.015，試驗(yàn)數(shù)據(jù)有效。陰陽(yáng)性判斷：計(jì)算樣本D值與陽(yáng)性對(duì)照平均值之比（S/P），S/P≥0.4判為陽(yáng)性，S/P<0.4判為陰性。

2結(jié)果與分析

2.1樣本數(shù)量的確定

按照統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法計(jì)算出的樣本數(shù)進(jìn)行采集，共采集血樣2089份（表1），制備血清，-70℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2樣品檢測(cè)

使用IDEXX公司ELISA檢測(cè)試劑盒對(duì)2089份不同時(shí)期、不同階段豬群中血清樣品的PRRS抗體水平進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果（圖1、圖2、圖3）發(fā)現(xiàn)，總的陽(yáng)性率很高，平均達(dá)90%以上。保育豬的PRRS抗體陽(yáng)性率在85.7%～100%之間，育肥豬的PRRS抗體陽(yáng)性率在76.7%～96.4%之間、空懷母豬的PRRS抗體陽(yáng)性率96.3%～100%。其中，育肥豬PRRS抗體陽(yáng)性率相對(duì)較低，且整齊度也較差；空懷母豬的PRRS抗體陽(yáng)性率較高，陽(yáng)性值也較高，整齊度好（數(shù)據(jù)未顯示）。

3小結(jié)和討論

自從PRRS出現(xiàn)以來(lái)，國(guó)內(nèi)外建立了許多PRRS抗體檢測(cè)方法和檢測(cè)試劑盒[3-8]，并對(duì)其進(jìn)行了評(píng)價(jià)，其中IDEXX公司生產(chǎn)的PRRS抗體檢測(cè)試劑盒應(yīng)用最廣泛，因此筆者選

擇了可信度相對(duì)較高的IDEXX公司生產(chǎn)的試劑盒。大量的研究結(jié)果表明，PRRS自傳入我國(guó)后在國(guó)內(nèi)的蔓延范圍非常廣泛，包括國(guó)內(nèi)的土種豬感染率都很高[9-12]。在我國(guó)自繁自養(yǎng)的種豬群中類似調(diào)查還比較少，也沒(méi)有連續(xù)的監(jiān)測(cè)。

本研究共采集了江蘇省某規(guī)模豬場(chǎng)不同類型的豬血清2089份，應(yīng)用ELISA法檢測(cè)PRRS抗體，結(jié)果發(fā)現(xiàn)抗體陽(yáng)性率很高，在90%以上，不同種類豬群之間沒(méi)有明顯差異，不同時(shí)間差異也不明顯，偶爾出現(xiàn)抗體水平稍低的月份。其中空懷母豬的抗體水平比保育豬和育肥豬更高。結(jié)果表明，該豬場(chǎng)免疫程序合理，免疫后抗體水平較高，且補(bǔ)免及時(shí)。

在采樣過(guò)程中，樣本數(shù)量雖然可以通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)、流行病學(xué)方法，按照一定的置信度和群體大小來(lái)確定，然而在實(shí)際操作過(guò)程中非常困難，一些不可預(yù)測(cè)因素影響，如動(dòng)物在生產(chǎn)環(huán)節(jié)中的不同階段、采樣隨機(jī)性和可實(shí)現(xiàn)性、動(dòng)物捕捉的難度等都會(huì)有一定的影響。例如，本試驗(yàn)最初設(shè)計(jì)對(duì)種公豬進(jìn)行血清采樣，但是由于種公豬的種用特征、性情暴躁、獠牙對(duì)操作者的危險(xiǎn)性等評(píng)價(jià)，最終決定放棄，而僅對(duì)部分精液進(jìn)行了采集和檢測(cè)（數(shù)據(jù)未發(fā)表）。流行病學(xué)調(diào)查在實(shí)際操作中會(huì)有很多因素影響采樣量和置信度，應(yīng)予以校正或者評(píng)價(jià)。

在養(yǎng)豬生產(chǎn)實(shí)踐中，PRRS疫苗免疫后的效果評(píng)價(jià)非常重要，以此作為參考進(jìn)行免疫程序的制定和修訂，能更好地控制PRRS的感染。但是，由于IDEXX公司的商品化試劑盒成本非常高，很多養(yǎng)殖戶和養(yǎng)殖企業(yè)無(wú)法負(fù)擔(dān)高昂的檢測(cè)和監(jiān)測(cè)成本，因此加強(qiáng)國(guó)產(chǎn)試劑盒的研發(fā)和應(yīng)用勢(shì)在必行。

參考文獻(xiàn)：

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