朱菁鋒，張健生，黎志鏘，李天寶，張家濟，薛光華

（廣東省佛山市南海區(qū)第九人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，廣東 佛山 528203）

目前認為，氧化應(yīng)激在腦梗死后神經(jīng)細胞的損傷發(fā)揮了重要的作用［1－3］。本文通過觀察急性腦梗死不同時間段NOX2以及SOD 的變化水平，探討其與急性腦梗死的關(guān)系，結(jié)果如下。

1 對象和方法

1.1 研 究 對 象 觀 察 組98 例 患 者2013 年1 月～2013年12于我科住院的急性腦梗死患者，其中男性58例，女性40 例，平均年齡38～78 歲，平均年齡（62.61±10.27）歲；診斷符合1996年第4屆全國腦血管病學(xué)術(shù)會議修訂的診斷標準［4］，并經(jīng)頭部影像學(xué)明確診斷（CT 或MRI）。根據(jù)患者NIHSS評分將觀察組進一步分為輕度（NIHSS評分＜5分）、中度（NIHSS評分5～15分）及重度腦梗死組（NIHSS評分＞15分）。本次研究輕度患者30例，男18例，女12例，年齡39～76歲，平均年齡（61.23±10.11）歲；中度患者41例，男23 例，女18 例，年齡38～77 歲，平均年齡（62.45±10.14）歲；重度患者27 例，男17 例，女10例，年齡39～78歲，平均年齡（63.02±10.56）歲。入組標準：①初次發(fā)病，明確診斷為腦梗死，發(fā)病距離治療24h內(nèi)；②患者年齡在18～80歲之間。排除標準：①CT 證實為出血性梗死如顱內(nèi)出血、蛛網(wǎng)膜下腔出血、外傷性出血；②出血傾向、凝血功能障礙、精神疾患及嚴重心肝腎疾??；③惡性腫瘤及免疫性疾病；④患者本人或者家屬不同意簽署知情同意書。同時選擇同期我院健康體檢者91例為對照組，其中男55例，女36例，年齡40～77歲，平均（61.01±8.63）歲。兩組患者在年齡、性別構(gòu)成方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05）。腦梗死組中腦梗死危險因素高血壓、高脂血癥、吸煙、飲酒等比例與對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05），見表1。

表1 兩組的一般臨床資料對比

1.2 方法 分別在患者發(fā)病后24h、3d、7d及14d采集所有患者空腹靜脈血兩管，一管離心后取血清。對照組在體檢當(dāng)天抽取空腹靜脈血，離心后取血清。所有樣本經(jīng)由－20 ℃保存，避免反復(fù)凍融。待標本收集完畢后由本院檢驗中心同一名檢驗科醫(yī)師測血清SOD 的水平。SOD 的水平采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA 法），測定的具體步驟根據(jù)試劑盒提供。應(yīng)用Muhiskan ex酶標儀在波長492nm 處讀取OD值。靈敏度：最小可測人SOD 水平達8ng／ml。另一管血采用WST－1還原法測定NOX2的活性。密度梯度法對血樣中的單核淋巴細胞進行分離后制備成勻漿液，離心，取上層清液，測定450nm 波長處的吸光度值（A450Ⅰ），然后加入NOX2試劑（6 momol／L），再次測定吸光度值為A450Ⅱ。NOX2 活性等于（A450Ⅱ－A450Ⅰ）／蛋白含量（RLU／mg蛋白）。試劑盒均購自江蘇碧海云天生物試劑公司。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 15.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析，組間計量資料比較采用t檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，以P ＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 外周血NOX2和SOD 的水平 腦梗死組外周血SOD 值表達于發(fā)病后24h內(nèi)即降低顯著低于對照組（P ＜0.01），至3～7d達到高峰（P ＜0.01），然后在發(fā)病后14d逐漸升高，水平仍低于對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05）；腦梗死組NOX2在發(fā)病后24h即升高（P ＜0.01），而至3～7d達到最高值（P＜0.01），之后又緩慢降低，至發(fā)病后14d增加至接近正常，見表2。

2.2 發(fā)病7dNOX2和SOD 的水平 將腦梗死組分為重度、中度和輕度三組后，發(fā)現(xiàn)重度組、中度組發(fā)病7d時NOX2水平均高于輕度腦梗死組和對照組（P＜0.05），然而輕度腦梗死組與對照組比較，重度與中度組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05）；重度組、中度組SOD 水平均低于輕度腦梗死組和對照組（P ＜0.05）；而輕度腦梗死組與對照組比較，重度組與中度組相比，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05），見表3。

表2 兩組NOX2和SOD 的動態(tài)變化

表3 觀察組各亞組之間發(fā)病7d時NOX2和SOD 的水平

3 討論

氧化應(yīng)激在腦梗死的發(fā)生機發(fā)展機制中起著重要的作用，ROS涉及到動脈粥樣斑塊的形成、管腔狹窄以及心源性卒中［5］。腦梗死后，局部的缺血誘發(fā)局部的炎癥反應(yīng)，而再灌注可能通過自由基的產(chǎn)生而進一步損害神經(jīng)細胞。而這些ROS在缺血的邊緣地帶也就是我們臨床所指的“缺血半暗帶”尤為明顯［6］。研究也證實在急性期，由于線粒體趨向于無氧酵解，神經(jīng)元內(nèi)NAD＋與NOX2 的電子傳遞減少，從而氧自由基增加。

動物實驗研究發(fā)現(xiàn)在腦梗死后，在腦中NOX2的顯著升高（由小膠質(zhì)細胞以及巨噬細胞合成）［7］，NOX2降低NOX 和縮小的梗死面積相關(guān)［8］。而在對NOX2敲除鼠的研究中發(fā)現(xiàn)，NOX2敲除鼠血腦屏障的通透性和卒中后的腦水腫都較對照組大鼠明顯改善［9－10］。然后對于NOX2的腦損傷機制尚不完全清楚，可能通過對血管內(nèi)皮生長因子受體－2的磷酸化而 促 進 細 胞 凋 亡（通 過PI3K／Akt 和ERK 1／2 通路）［11］，另外通過脂質(zhì)過氧化、蛋白變性以及DNA 的修飾也是NOX2的腦損傷機制［12］。本組資料證明，腦梗死后NOX2水平升高，在3～7d達到高峰，之后至14d仍有輕度增高。氧化應(yīng)激的損傷一方面與NOX2誘導(dǎo)的ROS增加有關(guān)，也與體內(nèi)清除自由基的抗氧化系統(tǒng)SOD 的耗竭有關(guān)，尤其是SOD 的降低。我們的研究發(fā)現(xiàn)患者外周血中SOD 降低明顯且以低水平維持約1d，之后又慢慢上升直至14d仍還低于正常水平。另外隨著腦梗死病情的加重，SOD 值降低明顯。因此提高急性期腦梗死患者的SOD 水平以及降低NOX2水平，對恢復(fù)患者體內(nèi)的氧化－抗氧化動態(tài)平衡，促進患者康復(fù)或許有作用。

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