劉華雷，鄭東霞，呂 燕，王靜靜，趙云玲，戈勝?gòu)?qiáng)，王曉亮，李知新，張學(xué)軍，王福江，門(mén)生寶，王志亮

（1. 中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東青島 266032；2. 寧夏動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，寧夏銀川 750002；3. 中衛(wèi)市動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心，寧夏中衛(wèi) 755000；4. 沙坡頭區(qū)動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心，寧夏中衛(wèi) 755000）

寧夏地區(qū)雞群新城疫流行率橫斷面調(diào)查

劉華雷1，鄭東霞1，呂 燕1，王靜靜1，趙云玲1，戈勝?gòu)?qiáng)1，王曉亮2，李知新2，張學(xué)軍2，王福江3，門(mén)生寶4，王志亮1

（1. 中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東青島 266032；2. 寧夏動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，寧夏銀川 750002；3. 中衛(wèi)市動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心，寧夏中衛(wèi) 755000；4. 沙坡頭區(qū)動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心，寧夏中衛(wèi) 755000）

新城疫在國(guó)內(nèi)很多地區(qū)已經(jīng)成為一種地方流行性疫病。為了解新城疫在寧夏地區(qū)的流行情況，采用橫斷面研究方法對(duì)該地區(qū)的新城疫場(chǎng)間流行率進(jìn)行了測(cè)定?；陔S機(jī)抽樣的策略選擇120個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)進(jìn)行抽樣和問(wèn)卷調(diào)查，并采用病毒分離結(jié)合序列測(cè)定的方式對(duì)采集的樣品進(jìn)行檢測(cè)分析。結(jié)果表明該地區(qū)新城疫的流行率為5.83%（95% CI 1.64%～10.03%）。遺傳進(jìn)化分析表明，所有分離到的病毒均屬于基因VII型，與2006年該地區(qū)流行的新城疫病毒相比，病毒已發(fā)生明顯的變異。

新城疫；流行率；橫斷面調(diào)查；基因VII型；調(diào)查；分離與鑒定

新城疫是由新城疫病毒強(qiáng)毒株引起的、可嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的一種烈性傳染病。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為法定報(bào)告疫病，我國(guó)農(nóng)業(yè)部將新城疫列為一類(lèi)動(dòng)物疫病。在《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）》中，新城疫被列為優(yōu)先防控的重大動(dòng)物疫病之一[1]。自20世紀(jì)80年代以來(lái)，我國(guó)對(duì)新城疫采取了全面免疫的防控策略，成效顯著，全國(guó)報(bào)告新城疫疫情發(fā)生次數(shù)逐年下降，國(guó)家新城疫參考實(shí)驗(yàn)室主動(dòng)監(jiān)測(cè)的數(shù)據(jù)也表明新城疫強(qiáng)毒感染場(chǎng)點(diǎn)陽(yáng)性率呈下降趨勢(shì)[2]。在中長(zhǎng)期規(guī)劃中，確定了到2020年全國(guó)新城疫要達(dá)到控制標(biāo)準(zhǔn)。近年來(lái)隨著疫苗質(zhì)量的不斷提高、養(yǎng)殖從業(yè)人員素質(zhì)的不斷提高和規(guī)?；B(yǎng)禽場(chǎng)生物安全水平的不斷提高，使得中長(zhǎng)期規(guī)劃中確定的全國(guó)新城疫階段性防控目標(biāo)成為可能。但不能忽視的是，新城疫仍然是危害我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)的重要疫病，在某些地區(qū)仍然持續(xù)存在，個(gè)別地區(qū)呈地方性流行，在臨床上還出現(xiàn)了宿主范圍擴(kuò)大、免疫帶毒現(xiàn)象普遍等新的流行特征。此外，國(guó)內(nèi)開(kāi)展的基于風(fēng)險(xiǎn)的主動(dòng)監(jiān)測(cè)表明，基因VI型和基因VIId型新城疫病毒是導(dǎo)致我國(guó)目前新城疫流行的主要優(yōu)勢(shì)基因型，但在個(gè)別地區(qū)也出現(xiàn)了一些新的基因型，如基因XII型和基因VIIh亞型等[3-4]。因此，新城疫防控形勢(shì)依然不容樂(lè)觀。

寧夏中衛(wèi)市沙坡頭區(qū)位于寧夏回族自治區(qū)西南部、黃河前套，是我國(guó)北方蛋雞的主產(chǎn)區(qū)之一，是寧夏的養(yǎng)禽密集地，存欄量占全省1/3以上。家禽飼養(yǎng)以蛋雞為主，以農(nóng)戶適度規(guī)模化和園區(qū)集約化養(yǎng)殖為特征，局部地區(qū)養(yǎng)殖密度極高，加上生物安全管理水平低，疫病流行較為復(fù)雜，疫病防控難度大。該地區(qū)曾在1999年首次發(fā)生H9N2亞型禽流感，2005年暴發(fā)過(guò)新城疫[5]，2006年和2012年曾先后暴發(fā)H5N1亞型高致病性禽流感[6]。因此，在該地區(qū)開(kāi)展流行學(xué)研究具有重要意義，一方面可以開(kāi)展早期預(yù)警、避免疫情擴(kuò)散，另一方面也可以摸清該地區(qū)疫病流行現(xiàn)狀，為防控決策提供依據(jù)。為此，我們?cè)趯幭闹行l(wèi)市沙坡頭區(qū)開(kāi)展了新城疫流行率的橫斷面調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 調(diào)查范圍和抽樣框

中衛(wèi)市沙坡頭區(qū)養(yǎng)禽區(qū)主要分布在東園、柔遠(yuǎn)、文昌、宣和、永康、鎮(zhèn)羅、濱河、常樂(lè)和迎水橋9個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)。本次調(diào)查以該地區(qū)2013年春防時(shí)免疫檔案記錄的615戶雞養(yǎng)殖戶作為抽樣框進(jìn)行調(diào)查，養(yǎng)殖戶分布情況見(jiàn)表1。

表1 本研究中抽樣框及其分布

1.2 研究設(shè)計(jì)和樣本量大小

為了估計(jì)該地區(qū)新城疫群間流行率，我們于2013年5月開(kāi)展了一次橫斷面調(diào)查。由于該地區(qū)不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)養(yǎng)殖場(chǎng)的數(shù)量存在較大差異，因此我們采取了按比例進(jìn)行隨機(jī)抽樣的策略。在確定抽樣場(chǎng)點(diǎn)數(shù)時(shí)，設(shè)定置信水平為95%，預(yù)期群間流行率為10%，可接受誤差為5%，采用Win Episcope2.0計(jì)算需要抽取的群體數(shù)量。對(duì)于群內(nèi)抽取的樣本數(shù)量，則以發(fā)現(xiàn)病原為調(diào)查目的，采取的是基于風(fēng)險(xiǎn)的抽樣策略，優(yōu)先將臨床發(fā)病或者體質(zhì)較弱的雞作為抽樣對(duì)象。

1.3 病例定義

采用病毒分離與鑒定方法，至少檢出1個(gè)新城疫病毒強(qiáng)毒陽(yáng)性個(gè)體的養(yǎng)雞場(chǎng)定義為新城疫強(qiáng)毒感染陽(yáng)性場(chǎng)，未檢出新城疫強(qiáng)毒的養(yǎng)雞場(chǎng)定義為陰性場(chǎng)。

1.4 樣品采集和調(diào)查問(wèn)卷

在養(yǎng)殖場(chǎng)采集雞的呼吸道和泄殖腔雙拭子，在抽樣的同時(shí)進(jìn)行問(wèn)卷調(diào)查。問(wèn)卷內(nèi)容包括養(yǎng)殖情況、飼養(yǎng)管理情況和免疫情況等。調(diào)查問(wèn)卷由培訓(xùn)后的當(dāng)?shù)孬F醫(yī)部門(mén)工作人員負(fù)責(zé)訪談和填寫(xiě)。

1.5 樣品檢測(cè)方法

采用接種10日齡SPF雞胚進(jìn)行病毒分離的方法對(duì)每個(gè)樣品進(jìn)行單獨(dú)檢測(cè)。病毒分離系檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)方法，其特異性和敏感性均為100%。對(duì)于分離到的新城疫病毒，則采用建立的復(fù)合RT-PCR方法進(jìn)行序列測(cè)定，通過(guò)分析其裂解位點(diǎn)的氨基酸組成來(lái)分析其致病性，通過(guò)構(gòu)建其F基因片段遺傳進(jìn)化樹(shù)來(lái)分析其分類(lèi)地位和遺傳進(jìn)化關(guān)系[7]。

2 結(jié)果

2.1 樣本量大小計(jì)算

群體樣品量計(jì)算：以測(cè)定流行率為目的，在置信水平為95%，預(yù)期群間流行率為10%，可接受誤差為5%，抽樣框總數(shù)為615的情況下，需要抽取的群體數(shù)量為113戶，為了防止在抽樣過(guò)程中出現(xiàn)戶主外出等意外情況，計(jì)劃按各鄉(xiāng)鎮(zhèn)養(yǎng)殖比例隨機(jī)抽取120戶，樣品分布情況詳見(jiàn)表1。

群內(nèi)樣本量計(jì)算：在養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)以發(fā)現(xiàn)病原為目的，優(yōu)先采用基于風(fēng)險(xiǎn)的抽樣策略，即優(yōu)先采集發(fā)病禽的樣品，群內(nèi)預(yù)期流行率設(shè)定為10%，在置信水平為95%，病毒分離方法的敏感性為100%，每戶雞飼養(yǎng)量在300～12 000之間，故需要采集的樣本量約為28～29個(gè)/群，因此每群設(shè)計(jì)的采樣量確定為30個(gè)。

2.2 新城疫病毒分離與鑒定

對(duì)從120個(gè)場(chǎng)采集的3 600份棉拭子樣品進(jìn)行了病毒分離與鑒定，結(jié)果共分離到19株新城疫病毒。通過(guò)對(duì)所有分離到的新城疫病毒F基因主要功能區(qū)片段進(jìn)行測(cè)序和分析，結(jié)果表明所有的毒株在F蛋白裂解位點(diǎn)的氨基酸組成均為112RRQKRF117，表明所有分離到的新城疫病毒均為強(qiáng)毒株。通過(guò)構(gòu)建新城疫病毒F基因的遺傳進(jìn)化樹(shù)，結(jié)果表明所有的分離株均屬于基因VII型，不同養(yǎng)殖場(chǎng)分離到的病毒高度同源，表明其可能具有同一來(lái)源。與2006年該地區(qū)分離到的新城疫病毒相比，盡管同屬于基因VII型，但新城疫病毒已發(fā)生明顯變異。病毒遺傳進(jìn)化樹(shù)見(jiàn)圖1。

圖1 新城疫病毒寧夏分離株F基因遺傳進(jìn)化樹(shù)

2.3 新城疫群間流行率

結(jié)果顯示，所分離到的19株新城疫病毒分別來(lái)源于7個(gè)不同的養(yǎng)殖場(chǎng)，故該地區(qū)新城疫群間流行率為5.83%（95% CI 1.64%～10.03%）。

2.4 養(yǎng)殖情況調(diào)查

該地區(qū)養(yǎng)殖主要以蛋雞為主，在調(diào)查中未發(fā)現(xiàn)水禽混養(yǎng)的現(xiàn)象。養(yǎng)殖戶大多具有多年的養(yǎng)殖經(jīng)驗(yàn)，但生物安全管理水平普遍較低，基本沒(méi)有消毒設(shè)施。在個(gè)別地區(qū)蛋雞飼養(yǎng)密度極高，養(yǎng)殖小區(qū)內(nèi)管理水平多樣，因此疫病流行比較復(fù)雜。該地區(qū)另外一個(gè)典型的特點(diǎn)就是新城疫免疫比較頻繁，尤其是活疫苗，新城疫活疫苗的使用頻率基本上都在每月一次以上。在調(diào)查過(guò)程中還發(fā)現(xiàn)，自2012年底至2013年3月在調(diào)查的120戶中有49戶養(yǎng)殖的雞群先后出現(xiàn)精神沉郁、產(chǎn)蛋下降、急性死亡等臨床癥狀，目前有57戶存在表現(xiàn)為扭頸等神經(jīng)癥狀的感染后期的雞，表明該地區(qū)疫病流行已經(jīng)有一段時(shí)間，疫病流行形式較為復(fù)雜，短期內(nèi)達(dá)到控制的難度較大。我們?cè)谘芯恐幸舶l(fā)現(xiàn)該地區(qū)有H9亞型禽流感等其他疫病的存在和流行。

3 討論

新城疫是長(zhǎng)期嚴(yán)重危害我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)的一種重要疫病。自20世紀(jì)80年代以來(lái)，我國(guó)采取了全面免疫的防控策略，特別是近年來(lái)，隨著疫苗質(zhì)量的持續(xù)提高，免疫工作越來(lái)越受到普遍重視，新城疫在全國(guó)的流行呈下降趨勢(shì)，一方面全國(guó)報(bào)告新城疫疫情發(fā)生次數(shù)呈下逐年降趨勢(shì)，另外一方面，新城疫強(qiáng)毒感染的帶毒率也呈下降趨勢(shì)。但在部分地區(qū)，新城疫仍然持續(xù)存在，已經(jīng)成為一種地方流行性疫病，且表現(xiàn)出新的流行特點(diǎn)，如宿主范圍擴(kuò)大、免疫失敗現(xiàn)象普遍、免疫帶毒持續(xù)存在、病原流行多樣化等[2]。

在《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）》中，明確提出了我國(guó)新城疫的階段性控制目標(biāo)，到2020年全國(guó)新城疫達(dá)到控制標(biāo)準(zhǔn)，一方面全國(guó)新城疫的流行率要下降到一定水平，另外一方面則不能發(fā)生區(qū)域性新城疫暴發(fā)或流行。要達(dá)到這一階段性控制目標(biāo)，除了要繼續(xù)重視免疫工作之外，還要注意以下幾個(gè)方面的問(wèn)題：一是要繼續(xù)開(kāi)展基于風(fēng)險(xiǎn)的病原學(xué)監(jiān)測(cè)，在養(yǎng)殖密集地區(qū)、候鳥(niǎo)棲息地周邊養(yǎng)殖場(chǎng)、邊境地區(qū)等開(kāi)展主動(dòng)監(jiān)測(cè)，掌握病原分布特征、判斷流行趨勢(shì)、提高預(yù)警水平。二是要加大被動(dòng)監(jiān)測(cè)力度，對(duì)報(bào)告發(fā)生疫情的病死禽都要開(kāi)展實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)和診斷，對(duì)波及范圍大、死亡率高的疫情要進(jìn)行病毒分子特征研究，開(kāi)展免疫效果評(píng)估，評(píng)價(jià)當(dāng)前商品化疫苗對(duì)流行毒株的免疫保護(hù)效果。三是要科學(xué)合理的使用疫苗。由于新城疫活疫苗使用方便、價(jià)格低廉，大多養(yǎng)殖戶采用活疫苗進(jìn)行密集免疫，每月免疫一次，高頻率采用活疫苗帶來(lái)的副作用除了可能造成免疫麻痹之外，對(duì)中和抗體也有一個(gè)中和作用，反而會(huì)降低免疫效果。建議禁止使用I系苗，研究表明I系苗的毒力較強(qiáng)（ICPI在1.2以上），按照OIE定義屬于強(qiáng)毒，不宜用來(lái)免疫家禽，存在散毒風(fēng)險(xiǎn)。此外，最近國(guó)內(nèi)成功研制了與主要流行基因型抗原性和基因型匹配性較好的重組新城疫病毒（A-VII株）滅活疫苗，有望降低免疫帶毒和免疫失敗的現(xiàn)象。四是要正確評(píng)價(jià)免疫的作用?，F(xiàn)階段對(duì)易感禽群進(jìn)行新城疫免疫是必不可少的，但不能完全依賴疫苗。對(duì)于傳染病控制的三個(gè)環(huán)節(jié)，即傳染源、傳播途徑和易感動(dòng)物，疫苗免疫僅僅針對(duì)的是提高易感動(dòng)物抵抗力，是動(dòng)物疫病控制的最后一個(gè)環(huán)節(jié)，應(yīng)該在消滅傳染源、切斷傳播途徑和免疫易感動(dòng)物三個(gè)方面形成合力才能起到最佳的防控效果。五是要建立科學(xué)合理的預(yù)警監(jiān)測(cè)體系。由于現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法不能區(qū)分疫苗免疫和野毒感染所產(chǎn)生的抗體，故建議在規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)可以科學(xué)設(shè)置哨兵雞，以有效區(qū)分疫苗免疫和野毒感染（DIVA），滿足早期預(yù)警的目的。

本研究表明，新城疫在該地區(qū)群間流行率為5.83%（95% CI 1.64%～10.03%），表明在該地區(qū)新城疫仍然是流行的重要?jiǎng)游镆卟。鲁且咴谠摰貐^(qū)可能已經(jīng)成為地方流行性疫病，病原持續(xù)存在，在遇到免疫狀況不好的雞群時(shí)造成大規(guī)模發(fā)病和迅速擴(kuò)散的風(fēng)險(xiǎn)仍然存在。通過(guò)對(duì)該地區(qū)的現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該地區(qū)為新城疫的老疫區(qū)，環(huán)境當(dāng)中新城疫野毒污染嚴(yán)重，新城疫已經(jīng)成為一種地方流行性疫病，造成這種情況的主要原因包括：（1）局部地區(qū)家禽飼養(yǎng)密度過(guò)高，疫病發(fā)生和傳播風(fēng)險(xiǎn)大。該地區(qū)曾先后建立了多個(gè)蛋雞養(yǎng)殖小區(qū)，小區(qū)內(nèi)部沒(méi)有實(shí)現(xiàn)統(tǒng)一的飼養(yǎng)管理，生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)方式多樣，給疫病控制帶來(lái)巨大風(fēng)險(xiǎn)；（2）該地區(qū)盡管散養(yǎng)的比例較低，但規(guī)?；潭群蜕锇踩芾硭讲桓撸陴B(yǎng)殖小區(qū)存在病死禽隨意丟棄、糞便未進(jìn)行無(wú)害化處理隨意堆放等現(xiàn)象，給疫病傳播帶來(lái)巨大風(fēng)險(xiǎn)；（3）該地區(qū)新城疫活疫苗使用過(guò)于頻繁?；钜呙缑庖叽螖?shù)過(guò)多，不但會(huì)中和免疫抗體，還有可能導(dǎo)致免疫麻痹。

本研究的局限性：（1）檢測(cè)方法方面。由于我國(guó)對(duì)新城疫采取了普遍免疫的防控策略，在高抗體水平情況下病毒分離比核酸檢測(cè)的難度要大，故病毒分離的方法測(cè)定的流行率可能比真實(shí)的流行率要低。（2）抽樣框方面。本研究以該地區(qū)2013年春季集中免疫檔案作為抽樣框，可能少數(shù)散養(yǎng)的養(yǎng)殖戶會(huì)有遺漏，盡管該地區(qū)家庭小規(guī)模散養(yǎng)的比例極少，但對(duì)結(jié)果仍有一定的偏倚。（3）抽樣策略方面。在群內(nèi)抽樣時(shí)優(yōu)先采集發(fā)病禽，但發(fā)病禽有可能是由其他病原體引起的，因此采用這種抽樣策略可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)果發(fā)生偏倚。（4）預(yù)期流行率方面。由于本研究中預(yù)期設(shè)定的群內(nèi)流行率為10%，但在免疫條件下新城疫的場(chǎng)內(nèi)流行率可能會(huì)低于這個(gè)水平，故在場(chǎng)內(nèi)實(shí)際需要采集的樣本量比不能真實(shí)地反映實(shí)際情況。（5）研究設(shè)計(jì)方面。由于橫斷面研究方法本身就是在一個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)上疫病的流行現(xiàn)狀，對(duì)于尚在潛伏期以及感染恢復(fù)期的病原可能檢測(cè)不到，最終導(dǎo)致假陰性的產(chǎn)生。（6）風(fēng)險(xiǎn)因素分析方面。在調(diào)查過(guò)程中，盡管搜集了很多關(guān)于飼養(yǎng)管理等相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)因素信息，但由于陽(yáng)性病例太少，無(wú)法進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)因素分析。在未來(lái)的類(lèi)似研究中，要根據(jù)具體實(shí)際合理設(shè)置預(yù)期流行率，確保一定的陽(yáng)性病例，探索可能的風(fēng)險(xiǎn)因素，為科學(xué)指導(dǎo)疫病防控提供參考。

致謝：

本研究在實(shí)施過(guò)程中得到了寧夏回族自治區(qū)動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心、中衛(wèi)市動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心和沙坡頭區(qū)動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心的大力支持，在此特別感謝！

A Cross-sectional Survey of the Prevalence of Newcastle Disease in Chicken Flocks in Ningxia

Liu Hualei1，Zheng Dongxia1，Lv Yan1，Wang Jingjing1，Zhao Yunling1，Ge Shengqiang1，Wang Xiaoliang2，Li Zhixin2，Zhang Xuejun2，Wang Fujiang3，Men Shengbao4，Wang Zhiliang1
（1. China Animal Health and Epidemiology Center，Qingdao，Shandong 266032；2. Ningxia Animal Disease Prevention and Control Center，Yinchuan，Ningxia 750002；3. Zhongwei Animal Disease Prevention and Control Center，Zhongwei，Ningxia 755000；4. Shapetou District Animal Disease Prevention and Control Center；Zhongwei，Ningxia 755000）

Newcastle disease is considered endemic in many regions of China. To determine the prevalence of Newcastle disease in Ningxia，a cross-sectional study was conducted. Chicken flocks（n=120）were randomly selected，and the disease status was ascertained by testing individual swab samples using virus isolation and sequencing. The estimated true prevalence was 5.83%（95% CI 1.64%-10.03%）. Phylogenetic analysis revealed that all isolates belonged to genotype VII. Obvious evolution were identified in Newcastle disease viruses compared with the strains responsible for the Newcastle disease outbreaks in 2006.

newcastle disease；prevalence；cross-sectional survey；genotype VII

S858.3

B

1005-944X（2015）10-0001-05

公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專(zhuān)項(xiàng)（201303033）

王志亮

注：劉華雷、鄭東霞對(duì)本文有相同的貢獻(xiàn)

[1]王志亮，劉華雷. 新城疫[M]. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2012：1-3.

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王偉濤）