張 毅，方永軍，周 鋒，胡亞莉，柯尊華，周振國(guó)，羅 衛(wèi)，暢 濤

·論著·

丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液對(duì)腦出血大鼠灶周內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的影響研究

張 毅，方永軍，周 鋒，胡亞莉，柯尊華，周振國(guó)，羅 衛(wèi)，暢 濤

目的 觀察丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液對(duì)腦出血大鼠灶周內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的影響。方法 將78只Sprague Dawley大鼠隨機(jī)分為正常組6只，假手術(shù)組24只，對(duì)照組24只及治療組24只。治療組、對(duì)照組、假手術(shù)組大鼠采用立體定向儀自體血注入法制備腦出血模型(假手術(shù)組大鼠只做刺入動(dòng)作，不向腦內(nèi)注血)，治療組大鼠造模后1 d開(kāi)始腹腔注射丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液，對(duì)照組及假手術(shù)組大鼠造模后1 d開(kāi)始腹腔注射0.9%氯化鈉溶液，正常組大鼠常規(guī)飼養(yǎng)，采用免疫組化染色觀察4組大鼠造模后第3天、7天、14天、28天灶周5-溴-2′-脫氧尿苷酸(BrdU)、神經(jīng)元特異烯醇化酶(NSE)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。結(jié)果 造模后第3天、14天及28天治療組大鼠灶周BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多于假手術(shù)組和對(duì)照組(P<0.05)；造模后第7天治療組大鼠灶周BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多于正常組、假手術(shù)組及對(duì)照組，假手術(shù)組和對(duì)照組大鼠灶周BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多于正常組(P<0.05)。治療組大鼠灶周BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在造模后第3天開(kāi)始增多，到第7天時(shí)達(dá)峰值，此后逐漸下降。造模后第3天治療組大鼠灶周NSE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多于假手術(shù)組，造模后第14天及28天治療組大鼠灶NSE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多于假手術(shù)組和對(duì)照組(P<0.05)；造模后第7天治療組大鼠灶周NSE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多于正常組、假手術(shù)組及對(duì)照組，假手術(shù)組和對(duì)照組大鼠灶周NSE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多于正常組(P<0.05)。假手術(shù)組、對(duì)照組和治療組大鼠灶周NSE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在造模后呈進(jìn)行性增多，并于造模后第28天達(dá)峰值。結(jié)論 丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液可促進(jìn)腦出血大鼠灶周內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)其向神經(jīng)元分化。

丹參酮；腦出血；大鼠；神經(jīng)干細(xì)胞

張毅，方永軍，周鋒，等.丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液對(duì)腦出血大鼠灶周內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的影響研究[J].實(shí)用心腦肺血管病雜志，2015，23(10)：45-49.[www.syxnf.net]

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腦出血(intracerebral hemorrhage)的致死、致殘率較高，存活患者多遺留不同程度的功能殘疾。臨床研究顯示，內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells)的激活、增殖及分化為腦出血提供了治療思路。丹參用于治療腦出血的歷史悠久，其主要成分丹參酮ⅡA具有良好的治療效果，能明顯促進(jìn)腦出血患者神經(jīng)功能的康復(fù)[1-2]。目前，有關(guān)丹參酮ⅡA的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究多集中在缺血性腦血管疾病方面，有研究結(jié)果顯示，大鼠缺血前后應(yīng)用丹參酮能促進(jìn)雙側(cè)腦室管膜下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖，并改善大鼠學(xué)習(xí)能力[3]。但有關(guān)丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液用于治療腦出血的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究較少，為此，本研究建立了腦出血大鼠模型，旨在觀察丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液對(duì)腦出血大鼠灶周內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取SPF級(jí)成年健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠78只，年齡3～4個(gè)月，體質(zhì)量250～300 g，由西安交通大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 主要儀器和試劑 腦立體定位儀(日本NARISHIGE SN-3型)，小型牙科鉆(韓國(guó)世新STRONG 204型)，光學(xué)顯微鏡(日本OLYMPUS公司)，丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液(上海第一生化藥業(yè)有限公司)，小鼠抗大鼠5-溴-2′-脫氧尿苷酸(BrdU)單克隆抗體(武漢博士德生物工程有限公司)，兔多克隆抗神經(jīng)元特異烯醇化酶(NSE)(武漢博士德生物工程有限公司)。

1.3 動(dòng)物分組及給藥 將78只SD大鼠隨機(jī)分為正常組(6只)、假手術(shù)組(24只)、對(duì)照組(24只)和治療組(24只)。治療組大鼠造模后1 d開(kāi)始腹腔注射5 μg/ml的丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液2 ml，1次/d，直至處死；假手術(shù)組及對(duì)照組大鼠造模后1 d開(kāi)始腹腔注射0.9%氯化鈉溶液2 ml，1次/d，直至處死。治療組、對(duì)照組及假手術(shù)組大鼠處死前1 d腹腔注射BrdU，50 mg·kg-1·次-1，1次/4 h，共3次。正常組大鼠常規(guī)飼養(yǎng)，并于第7天全部處死，其余3組大鼠分別在造模后第3天、7天、14天、28天各處死6只后取腦。

1.4 模型制備 采用立體定向儀自體血注入法[4]制備大鼠腦出血模型：治療組、對(duì)照組、假手術(shù)組大鼠稱(chēng)重后用10%水合氯醛(0.3 ml/100 g)腹腔注射麻醉，俯臥位固定于立體定位儀上，調(diào)節(jié)門(mén)齒托高度，使大鼠前后囟處于同一水平；碘伏消毒后沿頭皮正中切一長(zhǎng)約10 mm的切口，無(wú)菌操作下暴露前囟，參照大鼠立體定位圖譜定位前囟前0.2 mm，中線右旁開(kāi)3 mm，垂直進(jìn)針5.5 mm，進(jìn)入大鼠右側(cè)尾殼核區(qū)，用小型牙科鉆鉆透顱骨至硬腦膜處，停止鉆孔；穿刺股動(dòng)脈，抽取非肝素抗凝自體動(dòng)脈血進(jìn)針至尾狀核，緩慢注入50 μl，2 min內(nèi)勻速注入，緩慢將注射器完全退出，局部醫(yī)用骨蠟封閉，皮膚縫合，尾部切口加壓包扎。假手術(shù)組只做刺入動(dòng)作，不向腦內(nèi)注血，其余操作相同。術(shù)后將大鼠在 20 ℃～25 ℃恒溫條件下飼養(yǎng)，每3 d換墊料1次，自由活動(dòng)及進(jìn)食水。

1.5 神經(jīng)功能測(cè)定 造模后參照 Bederson 評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[5]對(duì)大鼠進(jìn)行評(píng)分。以大鼠完全清醒后的行為學(xué)改變來(lái)判斷模型制作是否成功。每組動(dòng)物分別于造模后及處死之前進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，主要觀察其運(yùn)動(dòng)、感覺(jué)功能、平衡能力及生理反射能力，總分為4分，正常為0分，分值越高其神經(jīng)損害越嚴(yán)重。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，0分：無(wú)神經(jīng)功能缺損體征；1分：提尾時(shí)損傷對(duì)側(cè)前肢屈曲；2分：前肢屈曲及損傷對(duì)側(cè)抵抗推力下降；3分：向損傷對(duì)側(cè)轉(zhuǎn)圈；4分：向損傷對(duì)側(cè)轉(zhuǎn)圈及意識(shí)模糊，低的生存率。1～4分為造模成功，造模不成功時(shí)補(bǔ)充大鼠。

1.6 標(biāo)本采集 10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠后，開(kāi)胸經(jīng)左心室插管進(jìn)行灌注，先用37 ℃ 0.9%氯化鈉溶液100 ml沖凈血液后，再用4%多聚甲醛灌注處死大鼠，待肝臟及肢體變硬后解剖取腦。

1.7 切片制作、免疫組化檢測(cè) 鼠腦標(biāo)本用4%多聚甲醛浸泡4～6 h，在30%蔗糖溶液中過(guò)夜(4 ℃)至沉底，腦組織石蠟包埋切片，將大鼠腦組織以進(jìn)針處為中心，冠狀位連續(xù)切片，厚約6 μm/片，每隔5張片取2張片，用防脫玻片直接貼附，室溫下晾干，-20 ℃下保存?zhèn)溆?。免疫組化檢測(cè)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明操作。BrdU陽(yáng)性細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞核陽(yáng)性，免疫組化染色呈紅色，卵圓形或圓形，標(biāo)記具有增殖活性的細(xì)胞主要集中在側(cè)腦室外側(cè)壁上部、上角和海馬齒狀回，可以在側(cè)腦室外上角形成遷移流。NSE陽(yáng)性細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性，免疫組化染色呈黃褐色，在側(cè)腦室下區(qū)和海馬齒狀回區(qū)表現(xiàn)為梭形或卵圓形。BrdU/NSE雙重免疫組化標(biāo)記細(xì)胞，細(xì)胞核呈紅色，細(xì)胞質(zhì)呈黃褐色。光鏡下采集圖像,用南京捷達(dá)JD-801圖像分析系統(tǒng)統(tǒng)計(jì)BrdU、NSE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 4組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)灶周BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比較 各組大鼠造模后第3天、7天、14天及28天灶周BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中造模后第3天、14天及28天治療組大鼠灶周BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多于假手術(shù)組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；造模后第7天治療組大鼠灶周BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多于正常組、假手術(shù)組及對(duì)照組，假手術(shù)組和對(duì)照組大鼠灶周BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表1)。治療組大鼠灶周BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在造模后第3天開(kāi)始增多，到第7天時(shí)達(dá)峰值，此后逐漸下降，見(jiàn)圖1～4。

Table 1 Comparison of peripheral BrdU-positive cell counts among the four groups at different time points

組別只數(shù)造模后第3天造模后第7天造模后第14天造模后第28天正常組6-49.33±10.15a--假手術(shù)組680.83±6.85a89.50±3.62ab79.33±2.66a72.00±2.45a對(duì)照組683.50±6.09a88.17±4.79ab78.67±3.61a71.83±3.25a治療組6110.83±6.43137.67±4.8998.17±10.5989.50±3.08F值39.58192.6416.6971.23P值0.000.000.000.00

注：與治療組比較，aP<0.05；與正常組比較，bP<0.05；-表示未測(cè)量

圖1 正常組大鼠灶周BrdU陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)情況

注：A為造模后第3天(免疫組化染色，×100)，B為造模后第7天(免疫組化染色，×400)，C為造模后第14天(免疫組化染色，×400)，D為造模后第28天(免疫組化染色，×100)

圖2 對(duì)照組大鼠灶周BrdU陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)情況

Figure 2 Expression of BrdU-positive cells of B group

注：A為造模后第3天，B為造模后第7天，C為造模后第14天，D為造模后第28天

圖3 假手術(shù)組大鼠灶周BrdU陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)情況

(免疫組化染色，×100)

Figure 3 Expression of BrdU-positive cells of C group

2.2 4組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)灶周NSE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比較 各組大鼠造模后第3天、7天、14天及28天灶周NSE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；其中造模后第3天治療組大鼠灶周NSE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多于假手術(shù)組，造模后第14天及28天治療組大鼠灶周NSE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多于假手術(shù)組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；造模后第7天治療組大鼠灶周NSE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多于正常組、假手術(shù)組及對(duì)照組，假手術(shù)組和對(duì)照組大鼠灶周NSE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表2)。假手術(shù)組、對(duì)照組和治療組大鼠灶周NSE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在造模后呈進(jìn)行性增多，并于造模后第28天達(dá)峰值，見(jiàn)圖5～8。

注：A為造模后第3天(免疫組化染色，×400)，B為造模后第7天(免疫組化染色，×100)，C為造模后第14天(免疫組化染色，×400)，D為造模后第28天(免疫組化染色，×400)

圖4 治療組大鼠灶周BrdU陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)情況

Figure 4 Expression of BrdU-positive cells of D group

Table 2 Comparison of peripheral NSE-positive cell counts among the four groups at different time points

組別只數(shù)造模后第3天造模后第7天造模后第14天造模后第28天正常組6-0a--假手術(shù)組640.61±2.94a42.56±3.28ab45.38±2.89a50.06±2.39a對(duì)照組645.28±3.5747.31±3.53ab52.69±4.31a61.53±2.57a治療組647.46±4.6253.26±4.6063.84±3.4780.25±4.34F值5.1611.6639.92134.19P值0.020.000.000.00

注：與治療組比較，aP<0.05；與正常組比較，bP<0.05；-表示未測(cè)量

圖5 正常組大鼠灶周NSE陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)情況

注：A為造模后第3天(免疫組化染色，×100)，B為造模后第7天(免疫組化染色，×100)，C為造模后第14天(免疫組化染色，×400)，D為造模后第28天(免疫組化染色，×400)

圖6 對(duì)照組大鼠灶周NSE陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)情況

Figure 6 Expression of NSE-positive cells of B group

注：A為造模后第3天，B為造模后第7天，C為造模后第14天，D為造模后第28天

圖7 假手術(shù)組大鼠灶周NSE陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)情況

(免疫組化染色，×100)

Figure 7 Expression of NSE-positive cells of C group

3 討論

神經(jīng)干細(xì)胞是指具有分化為神經(jīng)元細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞的能力，能自我更新并足以提供大量腦組織細(xì)胞的細(xì)胞。以往認(rèn)為神經(jīng)干細(xì)胞只存在于胚胎中，近年來(lái)大量研究發(fā)現(xiàn)，成年腦腦室下區(qū)、海馬齒狀回、室管膜區(qū)等區(qū)域存在具有自我更新和多種分化潛能的神經(jīng)干細(xì)胞[6]。疾病和創(chuàng)傷可誘導(dǎo)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、分化，但在未經(jīng)干預(yù)的情況下，其自身誘導(dǎo)的修復(fù)能力有限，不足以完全恢復(fù)受損的神經(jīng)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明，基底核腦出血大鼠病灶周?chē)沙霈F(xiàn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖[7]，但這種狀態(tài)下內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的增殖能力及對(duì)腦出血后神經(jīng)功能缺損的修復(fù)作用均有限[8]。原位誘導(dǎo)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞既能促進(jìn)神經(jīng)功能修復(fù)，又能克服外源性神經(jīng)干細(xì)胞移植的缺點(diǎn)，是治療腦出血理想的方法。有研究表明，中藥及其有效成分對(duì)腦出血后內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的增殖有誘導(dǎo)作用。施建生等[9]對(duì)中等量腦出血大鼠應(yīng)用人參總皂甙治療，在5個(gè)時(shí)間點(diǎn)與單純腦出血組灶周神經(jīng)干細(xì)胞增殖情況進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)治療14、28、60 d治療組大鼠神經(jīng)干細(xì)胞均多于單純腦出血組，提示腦出血后神經(jīng)干細(xì)胞被激活增殖，人參總皂甙對(duì)腦出血后神經(jīng)干細(xì)胞的增殖有促進(jìn)作用，進(jìn)而改善運(yùn)動(dòng)功能。

注：A為造模后第3天(免疫組化染色，×100)，B為造模后第7天(免疫組化染色，×100)，C為造模后第14天(免疫組化染色，×400)，D為造模后第28天(免疫組化染色，×100)

圖8 治療組大鼠灶周NSE陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)情況

Figure 8 Expression of NSE-positive cells of D group

丹參及其有效成分丹參酮是治療腦卒中的常用藥物，臨床治療效果較好。丹參藥理作用廣泛，能保護(hù)心肌、擴(kuò)張血管、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗血栓、改善微循環(huán)、調(diào)節(jié)組織修復(fù)和再生、抗菌消炎[10]。丹參及其有效成分丹參酮在誘導(dǎo)干細(xì)胞增殖和分化方面也顯示出了巨大的潛力[11-12]。丹參酮ⅡA是從丹參中提取的脂溶性有效成分，為丹參的主要有效成分，可誘導(dǎo)干細(xì)胞分化。丹參酮ⅡA對(duì)多種細(xì)胞有生物學(xué)效應(yīng)，包括誘導(dǎo)成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，抑制瘢痕成纖維細(xì)胞的增殖等，并作為生物反應(yīng)的輔酶對(duì)某些生化反應(yīng)具有促進(jìn)或干擾作用[13]。陳巖等[3]采用丹參酮治療腦缺血大鼠，結(jié)果顯示，丹參酮預(yù)處理能顯著增加去卵巢大鼠及腦缺血模型大鼠室管膜下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的數(shù)量，大鼠造腦缺血模型后應(yīng)用丹參酮也能增加其室管膜下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞的數(shù)量，并顯著改善其學(xué)習(xí)能力。臨床上，丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液也用于治療腦出血，并有較好的臨床療效。

目前，鑒定神經(jīng)干細(xì)胞主要有以下3個(gè)方面：特異性神經(jīng)抗原的表達(dá)、自我更新能力及多向分化潛能，而鑒定神經(jīng)干細(xì)胞的方法主要是細(xì)胞標(biāo)志物。對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行BrdU摻入實(shí)驗(yàn)，可幫助證實(shí)細(xì)胞是否具有自我更新能力。BrdU是胸腺嘧啶的同源替代物，可以在細(xì)胞周期的S期摻入到細(xì)胞核DNA內(nèi)，如果神經(jīng)干細(xì)胞在絲裂原的刺激下能夠進(jìn)行增殖，就會(huì)將BrdU整合入細(xì)胞DNA。DNA鏈中只要有0.5%的胸腺嘧啶被其取代，就可以利用BrdU單抗標(biāo)記技術(shù)檢測(cè)出來(lái)，該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，無(wú)論是研究體內(nèi)、體外神經(jīng)干細(xì)胞的增殖和自我更新，還是進(jìn)行移植前的標(biāo)記，BrdU均被廣泛應(yīng)用。而NSE、神經(jīng)元特異性核蛋白(NeuN)是神經(jīng)元表達(dá)的特異性標(biāo)志抗原[14]。

本研究將丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液用于治療腦出血大鼠模型，結(jié)果顯示，治療組大鼠灶周BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在造模后第3天開(kāi)始增多，多于假手術(shù)組和對(duì)照組，到第7天時(shí)達(dá)峰值，此后逐漸下降，至第28天仍多于假手術(shù)組和對(duì)照組。假手術(shù)組、對(duì)照組和治療組大鼠灶周NSE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在造模后呈進(jìn)行性增多，并于造模后第28天達(dá)峰值，造模后第7天、14天及28天治療組大鼠灶周NSE陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多于假手術(shù)組和對(duì)照組。提示丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液可促進(jìn)腦出血大鼠灶周內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)其向神經(jīng)元分化。

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(本文編輯：謝武英)

Impact of Tanshinone ⅡA Sulfonate Sodium Injection on Peripheral Endogenous Neural Stem Cells of Rats with Cerebral Hemorrhage

ZHANGYi，F(xiàn)ANGYong-jun，ZHOUFeng，etal.DepartmentofCerebralSurgery，theAffiliatedHospitalofShaanxiTraditionalChineseMedicineUniversity，Xianyang712000，China

Objective To observe the impact of tanshinone ⅡA sulfonate sodium injection on peripheral endogenous neural stem cells of rats with cerebral hemorrhage.Methods A total of 78 Sprague Dawley rats were randomly divided into groups A(n=6)，B(n=24)，C(n=24)and D(n=24)，stereotactic instrument and autologous blood injection method were used to prepare for cerebral hemorrhage model(rats of C group received puncture without intracerebral injection of autologous blood)，rats of A group were conventionally feed，rats of B group and C group received intraperitoneal injection of 0.9% sodium chloride injection after 1 day of preparation，while rats of D group received intraperitoneal injection of tanshinone ⅡA sulfonate sodium injection after 1 day of preparation.Immumohistochemical staining method was used to observe the peripheral BrdU-positive cell counts and peripheral NSE-positive cell counts after 3 days，7 days，14 days and 28 days of preparation.Results After 3 days，14 days and 28 days of preparation，peripheral BrdU-positive cell counts of D group were statistically significantly more than those of B group and C group(P<0.05)；after 7 days of preparation，peripheral BrdU-positive cell counts of D group were more than those of A group，B group and C group，and those of B group and C group were statistically significantly more than those of A group(P<0.05).Peripheral BrdU-positive cell counts of D group obviously increased at the third of preparation，and increased to the peak at the seventh day，and then gradually decreased.After 3 days of preparation，peripheral NSE-positive cell counts of D group were statistically significantly more than those of C group(P<0.05)；after 14 and 28 days of preparation，peripheral NSE-positive cell counts of D group were more than those of B group and C group(P<0.05)；after 7 days of preparation，peripheral NSE-positive cell counts of D group were more than those of A group，B group and C group，and those of B group and C group were statistically significantly more than those of A group(P<0.05).Peripheral NSE-positive cell counts of B group，C group and D group obviously increased after preparation，and increased to the peak at the 28th day.Conclusion Tanshinone ⅡA sulfonate sodium injection can promote the proliferation and induce the differentiation of peripheral endogenous neural stem cells of rats with cerebral hemorrhage.

Tanshinone；Cerebral hemorrhage；Rat；Neural stem cells

陜西省教育廳科學(xué)研究計(jì)劃項(xiàng)目(自然科學(xué)專(zhuān)項(xiàng))(11JK0697)；陜西省科技廳科學(xué)技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(自然基金)(2012JM4004)

712000陜西省咸陽(yáng)市，陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院腦外科(張毅，方永軍，周鋒，柯尊華，周振國(guó)，羅衛(wèi)，暢濤)；陜西中醫(yī)藥大學(xué)(胡亞莉)

R 743.34

A

10.3969/j.issn.1008-5971.2015.10.011

2015-07-12；

2015-09-13)