王苗鋒，熊茂明，李火友，龍騰云

(安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院普外科，安徽合肥 230032)

大腸癌組織中VEGF、MIF的表達及臨床意義

王苗鋒，熊茂明△，李火友，龍騰云

(安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院普外科，安徽合肥 230032)

目的 探討大腸癌組織中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)及人巨噬細(xì)胞游走抑制因子(MIF)的表達及臨床意義。方法選取80份經(jīng)手術(shù)切除并經(jīng)病理證實為大腸癌的組織蠟塊(觀察組)及80份距癌腫邊緣5 cm以上經(jīng)病理證實無癌細(xì)胞殘存的正常大腸組織(對照組)，SP法檢測VEGF、MIF在大腸癌及正常大腸組織中的表達。結(jié)果VEGF，MIF 在觀察組中陽性率為77.50%、82.50%，在對照組陽性率為22.50%、27.50%，觀察組陽性率明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。VEGF、MIF在大腸癌組織中的表達與腫瘤的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期相關(guān)，與性別、年齡、組織學(xué)分化無關(guān)。結(jié)論VEGF、MIF在大腸癌組織中高表達。

結(jié)直腸腫瘤；血管內(nèi)皮生長因子類；巨噬細(xì)胞游走抑制因子；免疫組織化學(xué)

大腸癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率逐年上升，目前是位居中國第四的惡性腫瘤，與飲食習(xí)慣改變及缺乏運動有一定關(guān)系，發(fā)病高峰年齡為40～50歲，且有年輕化趨勢。手術(shù)切除腫瘤及術(shù)后化療是目前治療大腸癌的主要方法，但大腸癌具有易復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的特點，嚴(yán)重影響術(shù)后遠(yuǎn)期效果。有研究表明，新生血管的形成在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移中具有重要的作用；血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)，早期亦稱作血管通透因子(vascular permeability factor，VPF)，可在體內(nèi)誘導(dǎo)血管新生，參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，是惡性腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移的重要原因；人巨噬細(xì)胞游走抑制因子(macrophage migration-inhibitory factors，MIF) 是一種多生物學(xué)功能的細(xì)胞因子，可以促進腫瘤血管的增生、腫瘤的擴散。本實驗通過檢測大腸癌組織和正常大腸組織中VEGF、MIF的表達，并分析二者與大腸癌臨床病理特征之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2007～2008年病理科存檔的80份大腸癌組織蠟塊(觀察組)，其中男48例，女32例，年齡35～85歲，平均58.61歲；患者術(shù)前均未行化療、放療，術(shù)后均行規(guī)范的化療或化療加放療；80份正常大腸組織(對照組)取自距離癌腫邊緣5 cm以上，且經(jīng)病理證實無癌細(xì)胞殘存。其中行右半結(jié)腸切除術(shù)17例，左半結(jié)腸切除術(shù)11例，橫結(jié)腸切除術(shù)9例，Dixon術(shù)25例，Miles術(shù)15例，Hartmann術(shù)3例；術(shù)后病理證實伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者45例，其中遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移9例；低分化者30例，中分化者19例，高分化者31例；TNM 臨床分期按國際抗癌聯(lián)盟(UICC) 2002 年制定的標(biāo)準(zhǔn)進行：Ⅰ期9例，Ⅱ期17例，Ⅲ期35例，Ⅳ期19例。

1.2方法

1.2.1檢測方法 存檔石蠟標(biāo)本4 μm 厚連續(xù)切片，采用免疫組化SP法染色，其步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行。用已知陽性結(jié)果作為陽性對照，PBS液代替一抗作為陰性對照。主要試劑：單克隆抗體和免疫組化試劑盒自北京中山金橋生物科技有限公司購買。

1.2.2結(jié)果評價標(biāo)準(zhǔn) 所有切片均隨機選取5 個高倍視野進行結(jié)果判定。按照染色強度、陽性細(xì)胞數(shù)占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的百分比計分。染色強度：無色為0分，淡黃色為1分,棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細(xì)胞數(shù)：小于總數(shù)的10%為0分，10%～25%為1分，>25%～50%為2分，>50%～75%為3分，>75%為4分。將染色強度得分與陽性細(xì)胞數(shù)得分相乘計算，<4分為陰性，≥4分為陽性。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析,計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，分類變量間相關(guān)性檢驗采用Pearson等級相關(guān)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1兩組VEGF和MIF表達比較 VEGF和MIF的表達主要定位于細(xì)胞質(zhì)(圖1)。觀察組中VEGF、MIF的陽性表達率顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

2.2大腸癌中VEGF、MIF的表達與臨床病理參數(shù)間的相關(guān)性 VEGF、MIF與大腸癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期呈顯著正相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；而與性別、年齡、分化程度無關(guān)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

A：VEGF；B：MIF。

圖1 VEGF及MIF在大腸癌組織中的表達(SP×400)

表1 兩組VEGF、MIF陽性表達率比較[n(%)，n=80]

a:P<0.05，與對照組比較。

表2 VEGF、MIF在大腸癌中表達與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性[n(%)]

2.3大腸癌組織中VEGF與MIF表達的相關(guān)性 經(jīng)Pearson相關(guān)分析，結(jié)直腸癌組織中VEGF與MIF表達呈顯著正相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(r=0.889，P<0.05)，見表3。

表3 大腸癌組織中VEGF與MIF表達的相關(guān)性

2.4VEGF、MIF表達與大腸癌患者生存期的關(guān)系 80例患者成功隨訪69例，生存5年以上患者42例，生存率60.87%(42/69)，其中8例復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率19.05%(8/42)；8例復(fù)發(fā)患者VEGF陽性率為87.50%(7/8)，MIF陽性率為100.00%(8/8)；大腸癌組織中VEGF與MIF陽性患者與陰性患者比較，生存率顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表4。

表4 VEGF及MIF陽性與陰性表達患者生存率比較(%)

a:P<0.05,與VEGF陰性比較；b:P<0.05,與MIF陰性比較。

3 討 論

惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜過程涉及多個因素，其中新生血管形成是關(guān)鍵步驟。有研究表明，新血管的產(chǎn)生對腫瘤的發(fā)生至關(guān)重要[1-2]，抑制腫瘤血管可以抑制腫瘤的生長。VEGF是一種多功能細(xì)胞因子，正常情況下，人體的血管代謝會保持在某種動態(tài)平衡狀態(tài)，因此VEGF在人體血管內(nèi)的水平是相對恒定的；而腫瘤血管期時，血液中VEGF水平會升高，并通過受體的介導(dǎo)發(fā)揮作用，促進腫瘤內(nèi)皮細(xì)胞增殖，并阻止內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，VEGF的抗細(xì)胞凋亡活性部分是通過磷脂酰肌醇-3羥基酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)途徑的活化所介導(dǎo)，同時VEGF也可抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)凋亡調(diào)節(jié)蛋白如B淋巴細(xì)胞瘤-2基因相關(guān)蛋白(Bcl-2A1)的存活和表達[3]。VEGF還能增加腫瘤血管的通透性，從而促進腫瘤細(xì)胞進入血液而發(fā)生轉(zhuǎn)移。當(dāng)腫瘤的生長受到抑制或者腫瘤病灶縮小，則相應(yīng)地會出現(xiàn)VEGF在血液中的濃度下降。VGEF在腫瘤血管生成中具有重要的調(diào)控作用，是現(xiàn)階段已知的作用最強的促血管形成因子之一，VEGF及其受體過度表達與腫瘤的生長、侵襲、 轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。大量研究證明抑制VEGF可抑制腫瘤血管形成，從而進一步抑制腫瘤生長[4-5]。VEGF及其受體靶向治療癌癥的藥物是目前一個熱門的研究，其重要性越來越受到重視。本結(jié)果顯示，大腸癌組織中VEGF陽性率顯著高于大腸正常組織，T1/2的陽性率為32.26%，T3/4的陽性率為67.74%；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的陽性率為64.52%，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的陽性率為35.48%；Ⅲ/Ⅳ期患者陽性率為79.03%，Ⅰ/Ⅱ期患者陽性率為28.97%；由此看出大腸癌患者浸潤程度越深、伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期越晚的患者其VEGF的陽性率越高，故VEGF表達水平可作為反映大腸癌生物學(xué)行為的參考指標(biāo)之一。

MIF由活化的T淋巴細(xì)胞分泌，早期被認(rèn)為主要在機體炎性反應(yīng)中發(fā)揮作用，近年來發(fā)現(xiàn)MIF在癌癥的發(fā)生、發(fā)展中亦是一個關(guān)鍵因素，它通過促進腫瘤血管生成、細(xì)胞分裂增殖發(fā)揮作用，并抑制細(xì)胞凋亡。有研究顯示，MIF在大腸癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌等多種惡性腫瘤中有過度表達[6-8]。本結(jié)果顯示，MIF在大腸癌組織中高表達，且伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽性率高于無轉(zhuǎn)移者，提示MIF可能在大腸癌肝轉(zhuǎn)移中發(fā)揮一定的作用，何興祥等[9]研究顯示，MIF在大腸癌肝轉(zhuǎn)移中有重要作用。相關(guān)研究還表明，MIF可促進VEGF表達上調(diào)[10-11]，本研究結(jié)果顯示，二者的表達有相關(guān)性，說明MIF和其他促腫瘤因子間存在一定的協(xié)同作用。MIF除促進腫瘤的血管生成和細(xì)胞增殖外，還通過多種途徑促進腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移。有研究發(fā)現(xiàn)，MIF對P53有一定的抑制作用，進一步從分子水平闡明了MIF有促進腫瘤發(fā)生、發(fā)展的機制[12]。MIF作為一種腫瘤標(biāo)記物，不管是在大腸癌還是胃癌等其他惡性腫瘤，其重要性越來越受到重視[13-15]。隨著對MIF研究的深入，把MIF作為分子標(biāo)記物用于對惡性腫瘤的早期診斷及腫瘤的靶向性治療將成為治療腫瘤的一條新途徑。

綜上所述，大腸癌組織中VEGF、MIF的表達陽性率顯著高于大腸正常組織。VEGF、MIF主要通過促進腫瘤血管生成，導(dǎo)致腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移，且VEGF、MIF間可能存在某種協(xié)同關(guān)系，共同促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。所以在診斷和治療大腸癌患者時，應(yīng)密切關(guān)注VEGF、MIF的表達情況，這對指導(dǎo)制訂手術(shù)后的治療方案有重要指導(dǎo)作用。

[1]Hsu AW,Sodhi A,Eberhart C,et al.Regression of choroidal neovascularization in response to systemic chemotherapy for cancer [J].Canadian J Ophthalmol,2013,48(4):e80-82.

[2]Nunez-Cruz S,Gimotty PA,Guerra MW,et al.Genetic and pharmacologic inhibition of complement impairs endothelial cell function and ablates ovarian cancer neovascularization[J].Neoplasia,2012,14 (11):994-1004.[3]Gerber HP,Dixit V,Ferrara N.Vascular endothelial growth factor induces expression of the antiapoptotic proteins Bcl-2 and A1 in vascular endothelial cells[J].J Biol Chem,1998,273(21):13313-13316.

[4]Hicklin DJ,Ellis LM.Role of the vascular endothelial growth factor pathway in tumor growth and angiogenesis [J].J Clin Oncol,2005,23(5):1011-1027．

[5]Ferrara N,Kerbel RS.Angiogenesis as a therapeutic target [J].Nature,2005,438(7070):967-974．

[6]He XX,Yang J,Ding YW,et al.Increased epithelial and serum expression of macrophage migration inhibitory factor(MIF) in gastric cancer:potential role of MIF in gastric carcinogenesis[J].Gut,2006,55(6):797-802.

[7]Agarwal R,Whang DH,Alvero AB,et al.Macrophage migration inhibitory factor expression in ovarian cancer [J].Am J Obstet Gyneco,2007,196(4):348.e1-5.

[8]Krockenberger M,Dombrowski Y,Weidler C,et al.Macrophage migration inhibitory factor contributes to the immune escape of ovarian cancer by down-regulating NKG2D[J].J Immunol,2008,180(11):7338-7348.

[9]何興祥,李曉宇,郝元濤,等.巨噬細(xì)胞移動抑制因子與大腸癌肝轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J].中華普通外科雜志,2007,22(11):855-858.

[10]蔡施霞,余細(xì)勇,林秋雄,等.MIF促進新生微血管生成及其相關(guān)基因表達的研究[J].中國心血管雜志,2007,12(3):169-171.

[11]Zernecke A,Bernhagen J,Weber C.Macrophage migration inhibitory factor in cardiovascular disease[J].Circulation,2008,117(12):1594-602.[12]Fingerle-Rowson G,Petrenko O.The p53-dependent effects of macrophage migration inhibitory factor revealed by gene targeting[J].Proc Natl Acad Sci USA,2003,100 (16):9354-9359.

[13]Gerrit G,Melanie M,Bernhagen J,et al.Macrophage migration inhibitory factor：a promising biomarker [J].Drug News Persp,2010,23(4):257-264

[14]Camlica H,Duranyildiz D,Oguz H,et al.The diagnostic value of macrophage migration inhibitory factor (MIF) in gastric cancer [J].Pathol Oncol Res,2008,14(1):79-83

[15]Mohri Y,Mohri T,Wei W,et al.Identification of macrophage migration inhibitory factor and human neutrophil peptides 1-3 as potential biomarkers for gastric cancer[J].Br J Cancer,2009,101(2):295-302.

Expression and significance of VEGF,MIF in colorectal cancer*

WangMiaofeng,XiongMaoming△,LiHuoyou,LongTengyun

(DepartmentofGeneralSurgery,FirstAffiliatedHospitalofAnhuiMedicalUniversity,Hefei,Anhui230032,China)

Objective To detect the expression of vascular endothelial growth factor(VEGF) and migration inhibitory factor(MIF) in colorectal cancer.Methods The immunohistochemical staining (SP method) was used to measure the expression of VEGF and MIF in 80 samples of colorectal cancer and 80 samples of normal colorectal tissues at 5 cm apart from the tumor edge.The relationship between VEGF and MIF with the clinical pathologic characteristics of colorectal cancer was anlyzed.Results The positive rates of VEGF and MIF in the colorectal cancer tissues were 77.50% and 82.50% respectively,but which in the normal colorectal tissues were 22.50% and 27.50% respectively,the positive rate of VEGF and MIF expression in the colorectal cancer tissues were higher than that in the normal colorectal tissue with statistical difference(P<0.05).The expression of VEGF and MIF had correlation with the tumor infiltration depth,lymph node metastasis,and clinical stage,but no correlation with gender,age and histodifferentiation.Conclusion VEGF and MIF are highly expressed in the colorectal cancer tissues.

colorectal neoplasms;vascular endothelial growth factors;macrophage migration-inhibitory factors;immunohistochemistry

·臨床研究

10.3969/j.issn.1671-8348.2015.11.012

安徽省高等學(xué)校省級自然科學(xué)研究重點項目(KJ2011A155)；安徽省衛(wèi)生廳醫(yī)學(xué)科學(xué)研究基金(2010B007)。

王苗鋒(1988-)，醫(yī)師，在讀碩士研究生，主要從事消化道惡性腫瘤研究。

△通訊作者，Tel：(0551)62922813；E-mail：xiongmd@aliyun.com。

R735.3+4

A

1671-8348(2015)11-1478-03

2014-10-08

2015-01-15)