王望寶 包喜軍 劉文春 葉俊華

氟啶蜱脲口服與透皮給藥對小鼠的急性毒性試驗

王望寶 包喜軍 劉文春 葉俊華

為闡明氟啶蜱脲的毒性，指導(dǎo)臨床用藥，本試驗用昆明小鼠作為試驗動物，對氟啶蜱脲原料藥和透皮劑進行毒性研究。預(yù)實驗中小鼠一次性口服不同劑量的原料藥和透皮劑，測定LD0和LD100，再根據(jù)最大給藥試驗和簡化寇氏法分組正式試驗，測定LD50和95%的可信限。結(jié)果測出小鼠口服氟啶蜱脲原料藥的LD50大于16.0 g/kg，小鼠口服透皮劑的LD50和95%的可信限分別為5.8594g/kg和5.2732～6.5276g/kg，由于LD50值均大于5000m g/kg，故氟啶蜱脲原料藥和透皮劑判定為實際無毒或無毒。小鼠透皮給予高劑量透皮劑10.0g/kg，小鼠未出現(xiàn)死亡，表明透皮劑臨床用藥安全。

氟啶蜱脲是由汽巴——嘉基公司最先研發(fā)的一種苯甲酰脲類昆蟲生長調(diào)節(jié)劑，并由諾華公司實現(xiàn)商品化，諾華公司開發(fā)的用于控制動物體表寄生的硬蜱。本課題組在參考國內(nèi)外文獻的基礎(chǔ)上研制出氟啶蜱脲透皮劑，臨床試驗表明，透皮劑對犬體表寄生的血紅扇頭蜱有很好的控制效果。本研究以《化學(xué)藥物急性毒性試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》為指導(dǎo)，按照簡化寇氏法對氟啶蜱脲原料藥及透皮劑進行了急性毒性試驗，為該藥的的毒性研究和臨床安全用藥提供依據(jù)。

一、材料與方法

（一）供試藥品

氟啶蜱脲原料藥，白色粉末狀，水中溶解度小于0.02m g/l，純度99.2%，批號：121101，常州佳靈藥業(yè)有限公司提供。氟啶蜱脲透皮劑，淡黃色，透皮油狀液體，規(guī)格：100m l，10.0g氟啶蜱脲，本課題組研制。吐溫80、羧甲基纖維素均購于天津市大茂化學(xué)試劑廠。

（二）試驗動物

昆明小鼠（普通級）134只，雌雄各半，體重18~22g，購于江西中醫(yī)學(xué)院實驗動物中心，許可證號：SCXK(贛)2011-0001。

（三）試驗方法

1.藥物配置

氟啶蜱脲原料藥用含有0.5%羧甲基纖維素、0.1%吐溫80的蒸餾水配置成不同質(zhì)量濃度的懸浮液；透皮劑用食用大豆油配成不同質(zhì)量濃度。

2.預(yù)試驗

將8只試驗小鼠，雌雄各半，每組4只，禁食12h后，高、低劑量組分別按40m l/kg和20m l/kg體重容積，以最大質(zhì)量濃度（0.4g/m l）一次性灌服氟啶蜱脲原料藥懸浮液，灌胃后觀察7天。

每組4只試驗小鼠，雌雄各半，禁食12h后，按20m l/kg體重容積灌服不同濃度的氟啶蜱脲制劑，測定LD0和LD100。

將10只試驗小鼠，雌雄各半，禁食12h后透皮給予高劑量氟啶蜱脲透皮劑10.0g/kg，觀察動物的毒副反應(yīng)。

3.正式試驗

最大給藥量試驗：將40只小鼠分為2組（實驗組和對照組），雌雄各半，禁食12h后，小鼠給予最大質(zhì)量濃度（0.4g/m l）及最大給藥容積40m l/kg，一次性灌服氟啶蜱脲原料藥懸浮液，對照組灌服給予等量的溶媒。透皮劑組根據(jù)預(yù)試驗的最高致死量和最低致死量的比值對正式試驗分組，每組10只試驗動物，雌雄各半。透皮給藥的小鼠數(shù)量增至20只，雌雄各半。給藥后觀察小鼠的死亡情況、出現(xiàn)的癥狀、癥狀起始時間、嚴重程度、持續(xù)時間，給藥后連續(xù)觀察14天。對試驗中死亡的動物以及試驗結(jié)束時處死的動物進行解剖，對組織出現(xiàn)的體積、顏色等的改變進行詳細的記錄。

（四）數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用SPSS14.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。

二、結(jié)果

（一）預(yù)實驗

小鼠口服氟啶蜱脲原料藥，高劑量組和低劑量組小鼠全部存活，未能測出氟啶蜱脲原料藥的LD50，說明原料藥的毒性很低，故進行最大給藥試驗。小鼠口服氟啶蜱脲制劑的LD0及LD100分別為3.59g/kg、8.77g/kg。小鼠按照10.0g/kg的劑量透皮給予氟啶蜱脲制劑，部分小鼠表現(xiàn)為瞇眼、弓背、活動減少、呼吸加快、飲食正常，給藥8小時后小鼠恢復(fù)正常，未見小鼠死亡。

（二）正式試驗

1.口服原藥試驗

試驗組給藥后2h大部分小鼠活動減少，反應(yīng)遲鈍，小部分小鼠瞇眼，給藥后8h小鼠活動恢復(fù)正常，未見瞇眼，給藥后第1天小鼠食欲降低，第2天至14天小鼠飲食正常。對照組小鼠口服溶媒后，未見明顯變化。給藥后觀察14天，試驗組和對照組小鼠都未出現(xiàn)死亡。試驗結(jié)束后，處死小鼠，并剖檢，試驗組和對照組都未見明顯的眼觀病變。表明氟啶蜱脲原藥口服給藥對小鼠的LD50大于16.0g/kg，說明氟啶蜱脲對昆明小鼠無毒。

2.口服制劑試驗

測出的LD50=5.8594g/kg，LD50的95%可信限為5.2732～6.5276g/kg。由于LD50值在5000~15000m g/kg之間，因此氟啶蜱脲制劑對昆明小鼠是實際無毒的。

在小鼠口服透皮劑急性毒力試驗中，給藥后5分鐘內(nèi)大部分小鼠表現(xiàn)為反應(yīng)遲鈍、四肢發(fā)紫；給藥1h后，大部分小鼠精神沉郁、弓背不動、豎毛、呼吸急促、食欲降低。試驗中未死亡的小鼠36小時后能正常運動，死亡時間出現(xiàn)在給藥后的1.5~40h。尸體剖檢大部分小鼠可見皮下、腹膜、腸系膜、胸膈肌、心被膜、睪丸、子宮輕微充血，胃鼓氣，胃壁變薄，十二指腸、空腸壞死液化呈雞蛋黃色，腸壁變薄，腸粘膜易剝離，肝、脾、腎呈鮮紅色，有的小鼠腎和脾腫大，膀胱充盈，肝呈暗紅色，肺充血呈鮮紅色。試驗第14天，未死亡的小鼠處死剖檢，未觀察到明顯的眼觀病變。

小鼠口服透皮劑正式試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計

雄性小鼠和雌性小鼠的死亡率無顯著差異（P＞0.05）。小鼠的給藥、死亡情況詳見上表。

3.制劑透皮給藥試驗

小鼠透皮給予制劑10.0g/kg，給藥后0.5h大部分小鼠瞇眼，3h后表現(xiàn)為瞇眼、弓背、活動減少、呼吸加快、飲食正常，在給藥后8h小鼠恢復(fù)正常，給藥后觀察14天，小鼠未出現(xiàn)死亡。試驗結(jié)束后，處死小鼠，并剖檢觀察，未見明顯的眼觀病變。

三、分析與討論

氟啶蜱脲是一種親脂性物質(zhì)(正辛醇水分配系數(shù)logP=5.1)，在水中的溶解度小于0.02m g/l，因此選擇含有0.5%羧甲基纖維素、0.1%吐溫80的蒸餾水把氟啶蜱脲原料藥配置成懸浮液便于灌胃給藥。本課題組研制的透皮劑也是個油性體系，用含有羧甲基纖維素和吐溫80的蒸餾水配置時，會析出乳白色的果凍狀物，會造成給藥不準確，而大豆油能很好地稀釋透皮劑，因此采用大豆油作為稀釋劑。

氟啶蜱脲原料藥和透皮劑口服給藥時，不同給藥體積會影響藥物的吸收，從而影響到動物的死亡率，因此分別按照40m l/kg、20m l/kg的劑量給小鼠氟啶蜱脲原料藥和透皮劑灌胃。此外胃內(nèi)容物的量會影響到受試物的給藥容量；嚙齒類動物禁食時間長短會影響藥物代謝酶的活性和受試物在腸道的吸收，故小鼠在給藥前禁食12h。

試驗中，氟啶蜱脲原料藥按16.0g*kg-1給昆明小鼠灌胃，未發(fā)現(xiàn)小鼠死亡，說明氟啶蜱脲對小鼠實際無毒，這和苯甲酰脲的作用機理有著密切的關(guān)系。苯甲酰脲類幾丁質(zhì)合成抑制劑主要通過影響昆蟲幾丁質(zhì)的合成而起效，不同于作用于神經(jīng)系統(tǒng)的傳統(tǒng)農(nóng)藥，因此苯甲酰脲類幾丁質(zhì)合成抑制劑對靶標(biāo)動生物有較高的選擇性。此外，透皮劑口服給藥對昆明小鼠的LD50為5.86 g/kg、經(jīng)皮給藥對昆明小鼠的LD50大于10.0g/kg，表明了透皮劑對小鼠也是實際無毒的。兩種不同給藥方式測量的半數(shù)致死量有著明顯的差別，這可能是因為透皮劑經(jīng)皮給藥的生物利用度有限導(dǎo)致的。

（作者單位：王望寶，修水縣畜牧水產(chǎn)局，332400；
包喜軍，公安部南京警犬研究所，210012；
劉文春、葉俊華，公安部南昌警犬基地，330100）

（編輯：李 冰）

項目編號：公安部應(yīng)用創(chuàng)新科研項目（2010YYCXNCJQ154）