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        豬α+γ共表達(dá)干擾素在不同家蠶品種中的表達(dá)

        2015-01-03 08:33:32張玉玉張金衛(wèi)易詠竹李江濤徐森華馮世明魚南洋鐘伯雄
        蠶桑通報(bào) 2015年2期
        關(guān)鍵詞:桿狀病毒蠶蛹共表達(dá)

        張玉玉,張金衛(wèi),易詠竹,李江濤,徐森華,馮世明,魚南洋,鐘伯雄,丁 農(nóng)

        (1.浙江大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,浙江 杭州 310058; 2.湖州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院,浙江 湖州 313000;3.中國農(nóng)科院蠶業(yè)研究所,江蘇 鎮(zhèn)江 212018)

        我國的豬肉位居我國各種肉產(chǎn)品消費(fèi)的首位,約占67%[1],養(yǎng)豬業(yè)已成為推動(dòng)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的支柱產(chǎn)業(yè)。但隨著生豬養(yǎng)殖的規(guī)?;图s化,生豬重大疫病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)在不斷加大,豬瘟、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征、口蹄疫等重大疫病在部分養(yǎng)殖戶和規(guī)模養(yǎng)殖場中有所發(fā)生。豬的各類傳染病,尤其是病毒性疾病不僅嚴(yán)重危害著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展,造成重大經(jīng)濟(jì)損失,還會(huì)危害人類的健康。因此病毒病的預(yù)防和治療成為養(yǎng)殖業(yè)的重中之重,研制出高效經(jīng)濟(jì)的抗病毒和免疫增強(qiáng)藥物成為解決問題的關(guān)鍵。

        干擾素(Interferon,IFN)最早發(fā)現(xiàn)于1957年,Isaccs和Lindenmann利用雞胚絨毛尿囊膜研究流感病毒的干擾現(xiàn)象時(shí),發(fā)現(xiàn)被病毒感染的細(xì)胞所產(chǎn)生的一種因子[2]。干擾素是人和動(dòng)物細(xì)胞受到特定干擾素誘生劑刺激后,由巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等產(chǎn)生的一種具有多種生物學(xué)活性的糖蛋白。干擾素具有廣譜抗病毒、抗腫瘤和免疫增強(qiáng)等多種生物活性,具備無休藥期、無藥殘、無毒副作用、不產(chǎn)生耐藥性、可反復(fù)使用的優(yōu)點(diǎn),迄今為止一種最理想的抗病毒生物制劑。大量體內(nèi)和體外試驗(yàn)表明,豬干擾素對生豬生產(chǎn)具有重大威脅的病毒均具有抑制作用。Chin?sangaram等報(bào)道豬IFN-α/β能抑制口蹄疫病毒在PK細(xì)胞上增殖[3],后續(xù)又報(bào)道顯示用腺病毒表達(dá)載體表達(dá)的豬α干擾素能完全使豬免受口蹄疫病毒的感染[4]。家蠶桿狀病毒表達(dá)體系表達(dá)的外源蛋白幾乎都是可溶性的,其免疫原性和生物活性非常接近天然來源的分離物,且家蠶具有可大規(guī)模飼養(yǎng)、安全性好、生長周期短等優(yōu)點(diǎn)。豬干擾素α和干擾素γ在抗病毒活性方面具有協(xié)同增強(qiáng)作用,能夠提高重組干擾素產(chǎn)物的效價(jià)及穩(wěn)定性[5,6]。由此可見,利用家蠶生物反應(yīng)器共表達(dá)生產(chǎn)含有豬α+γ的復(fù)合型干擾素,應(yīng)用于豬病毒性疾病防治豬干擾素對生豬生產(chǎn)健康發(fā)展具有重要作用。

        豐富的家蠶種質(zhì)資源是品種改良和有效基因利用開發(fā)的物質(zhì)基礎(chǔ)[7,8],因而家蠶品種的選育、篩選便成為利用家蠶生物反應(yīng)器表達(dá)外源蛋白中必不可少的重要環(huán)節(jié)。本文采用豬α干擾素(IFN-α)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒,通過對豬α干擾素在不同家蠶品種中表達(dá)的檢測,為篩選適合高效共表達(dá)豬α+γ的復(fù)合型干擾素的家蠶品種提供依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        IFN-α ELISA檢測試劑盒由德國IBL公司生產(chǎn)(上海將來實(shí)業(yè)有限公司提供);重組桿狀病毒rBmN?PV(Bm-α+γ)由中國農(nóng)科院蠶業(yè)研究所提供;24個(gè)家蠶原種、7對雜交種組合蠶蛹由湖州農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼養(yǎng)提供。

        1.2 方法

        1.2.1 重組病毒rBmNPV(Bm-α+γ)的接種

        以常規(guī)方法飼養(yǎng)及蛹期保護(hù)的各品種6~7 d蛹齡蠶蛹為材料,將重組桿狀病毒rBmNPV(Bm-α+γ)按105pfu/頭接種蠶蛹,然后置于25℃下表達(dá)4.5 d,收集發(fā)病蠶蛹,-20℃凍存。

        1.2.2 IFN-α表達(dá)量的檢測

        按雌雄1∶1的比例隨機(jī)抽取20頭蠶蛹,研缽徹底研磨,轉(zhuǎn)移至離心管中,8000 rpm離心10 min,取中間層,參照試劑盒說明書進(jìn)行表達(dá)量檢測。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 不同家蠶原種對IFN-α的表達(dá)

        對24個(gè)家蠶原種進(jìn)行ELISA檢測,IFN-α表達(dá)結(jié)果見表1。由表1可見,所選的24個(gè)家蠶品種對豬IFN-α的表達(dá)能力差異很大,白玉品種對IFN-α表達(dá)最好,表達(dá)量可達(dá)867.12 ng/L,而表達(dá)水平最低的TQ78僅是660.87 ng/L。中系與中系品種之間、日系與日系品種之間的差異也很大,12個(gè)日系原種的表達(dá)量平均為822.63 ng/L,12個(gè)中系原種的表達(dá)量平均為759.85 ng/L,初步可以認(rèn)為日系品種的表達(dá)量高于中系品種。

        表1 不同家蠶原種對豬α干擾素基因的表達(dá)Table 1 The expression of IFN-α in different parental silkworm varieties

        2.2 不同家蠶雜交組合對豬α干擾素基因的表達(dá)

        以表1中不同表達(dá)量的原種,組配了7對14個(gè)正反交組合采用雙抗夾心ELISA法進(jìn)行IFN-α表達(dá)檢測,由表2可知,日系×中系組合平均表達(dá)量明顯高于中系×日系。但在IFN-α表達(dá)量上這些雜交組合并沒有明顯表現(xiàn)出雜種優(yōu)勢,原種與其相對應(yīng)的雜交種之間似乎沒有直觀的相關(guān)關(guān)系,即表達(dá)量高的原種雜交組合不一定高,反之亦然。TL3東×98晨和98晨×TL3東、秋豐×白玉和白玉×秋豐這兩對雜交品種的表達(dá)量較低,推測是由于該品種對該型重組病毒的抵抗力較強(qiáng),表現(xiàn)為對外源基因的表達(dá)能力較低。

        表2 不同家蠶雜交組合對豬α干擾素基因的表達(dá)Table 2 The expression of IFN-α in different hybrid silkworm varieties

        值得一提的是中國系統(tǒng)與日本系統(tǒng)在蛹體重指標(biāo)的雜交優(yōu)勢明顯,一般來說,蛹體大,血淋巴多,表達(dá)產(chǎn)物就多。因此,應(yīng)用家蠶作為生物反應(yīng)器表達(dá)豬干擾素的研究和產(chǎn)品開發(fā)中,在組配篩選出雜交優(yōu)勢明顯蛹體大的家蠶品種的同時(shí)兼顧表達(dá)效率的篩選,是重要的攻關(guān)方向。本實(shí)驗(yàn)中結(jié)合蛹體重量和品種表達(dá)量的比較,以春628B×華213C正反交表達(dá)效率較高,或者日×中組合的金玉×秋黃、紫氣秋實(shí)×春花綠池、皓月×菁松也比較好,可作為表達(dá)豬干擾素表達(dá)的專用品種。

        3 討論

        當(dāng)前獸醫(yī)臨床上大多是用大腸桿菌表達(dá)的豬干擾素,其表達(dá)的產(chǎn)物是以包涵體的形式存在的,表達(dá)出的產(chǎn)物不具有生物學(xué)活性,無法直接應(yīng)用,必須經(jīng)變性復(fù)性過程,但復(fù)性后效果往往不理想。利用酵母表達(dá)的干擾素,不均一性出現(xiàn)頻率高,對產(chǎn)物的純化非常不利[9]。迄今為止,已用大腸桿菌、酵母、哺乳動(dòng)物細(xì)胞、桿狀病毒等表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)過豬干擾素[10~15],但從表達(dá)產(chǎn)物的抗病毒活性來看,真核生物表達(dá)的產(chǎn)物要好于原核表達(dá)。

        家蠶桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)是利用家蠶桿狀病毒BmNPV作為表達(dá)載體,在家蠶細(xì)胞系或蟲體中表達(dá)外源蛋白的真核表達(dá)系統(tǒng),具有安全性高、表達(dá)量高、容量大等特點(diǎn)。據(jù)了解,家蠶是目前唯一能大規(guī)模人工飼養(yǎng)的經(jīng)濟(jì)昆蟲,生物學(xué)背景清楚,因此利用家蠶來表達(dá)和生產(chǎn)豬干擾素具有明顯的優(yōu)勢。本實(shí)驗(yàn)中由于豬IFN-α和豬IFN-γ是聯(lián)合共表達(dá)的關(guān)系,因此以豬IFN-α表達(dá)量的檢測結(jié)果可以間接證明IFN-α+γ的表達(dá)量結(jié)果,這與鐘魯龍的研究結(jié)果一致[16]。從本文試驗(yàn)結(jié)論可知,不同品種、品系的家蠶對豬IFN-α的表達(dá)有較大差異,篩選適合豬干擾素表達(dá)的家蠶品種對產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用具有重要的意義。

        [1]李清宏.改革開放以來中國養(yǎng)豬生產(chǎn)回顧分析與展望[J].中國畜牧志.2007,(18):42~46.

        [2]侯文德.分子病毒學(xué).北京:學(xué)苑出版社,1990.

        [3]CHINSANGARAM J,PICCONE M E,GRUBMAN M J.Ability of foot-and-mouth disease virus to form plaques in cell culture is associated with suppression of alpha/be?ta interferon[J].J Virol,1999,73:9891~9898.

        [4]CHINSANGARAM J,MORAES M P,KOSTER M,et al.Novel viral disease control strategy:adenovirus express?ing alpha interferon rapidly protects swine from foot-andmouth disease[J].J Virol,2003,77:1621~1625.

        [5]王彥彬,孫向麗,魏戰(zhàn)勇,等.豬干擾素α和γ在桿狀病毒中共表達(dá)及對PRRSV抑制作用[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)2011,44(9):1931~1938.

        [6]張志芳,李軼女,李金祥,等.動(dòng)物α干擾素和γ干擾素的表達(dá)方法:中國,2012101105336[P].2014-11-19.

        [7]黃德輝,李圣,孫家羿,等.淺談家蠶品種的引進(jìn)及利用[J].中國蠶業(yè),2005,26(2):89~90.

        [8]顏新培,姚德球.家蠶種質(zhì)資源的開發(fā)和育種展望[J].廣東蠶業(yè),2007,41(2):36~38.

        [9]王洪海,高卜渝,陳佩麗,等.酵母表達(dá)基因工程產(chǎn)物不均一性分析及其對策[J].中國科學(xué),1994,24(12):1270~1274.

        [10]趙偉鴿.豬α、γ干擾素的原核表達(dá)、純化及抗病毒活性初步檢測[M].上海交通大學(xué),2010.

        [11]鄭鳴,邊傳周,王老七,等.豬干擾素α、β和γ的融合表達(dá)及活性[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2012:1840~1847.

        [12]姚清俠.豬α干擾素、豬β干擾素與豬γ干擾素的抗病毒活性及其免疫佐劑的研究[M].華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2007.

        [13]周國棟.豬α干擾素在畢赤酵母中的分泌表達(dá)及其免疫佐劑功能研究[M].南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2006.

        [14]呂平.豬干擾素α、β、γ在293T細(xì)胞中的表達(dá)研究[M].華中農(nóng)業(yè)大學(xué),2008.

        [15]王彥彬.豬干擾素a和γ在桿狀病毒/昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)中表達(dá)及重組蛋白初步應(yīng)用[M].河南農(nóng)業(yè)大學(xué),2008.

        [16]鐘魯龍.豬干擾素α和γ在家蠶中的共表達(dá)[D].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2013.

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