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        GC-MS結(jié)合保留指數(shù)分析玉樹野生藏茴香和人工種植藏茴香揮發(fā)成分

        2014-12-28 03:02:44曾擎屹林鵬程
        安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年25期
        關(guān)鍵詞:右旋茴香頂空

        曾擎屹,林鵬程*,姚 晶

        (青海民族大學(xué)化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,青藏高原植物化學(xué)重點實驗室,青海西寧810007)

        藏茴香(Caraway),藏名郭鳥,為雙子葉植物藥傘形科植物葛縷子的干燥果實[1],性溫,味微辛,入腎、胃經(jīng)[2],常用于治療胃脘疼痛、腹脹、消化不良及疝氣等癥狀[3]。研究揮發(fā)性成分對于開發(fā)新藥、指導(dǎo)臨床指導(dǎo)用藥、闡明和深化中醫(yī)藥理論以及推動中醫(yī)藥現(xiàn)代化具有重要意義。該試驗采用頂空進(jìn)樣技術(shù)分別對野生藏茴香和人工種植藏茴香揮發(fā)成分進(jìn)行GC-MS分析[4],并結(jié)合Kovats保留指數(shù)對其主要成分進(jìn)行分析[5],通過總揮發(fā)油含量,找出兩者間異同點,以期為制定藏茴香的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)的數(shù)據(jù)資料。

        1 材料與方法

        1.1 材料野生藏茴香,采自青海,人工種植藏茴香由青海省藥材公司購得,由林鵬程教授鑒定均為藏茴香。將2種藏茴香的樣品除去雜質(zhì),陰干粉碎至中粉備用。

        1.2 儀器與試劑美國Agilent公司7890/5975C-GC/MSD氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀;G1888頂空進(jìn)樣器,色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)(MSD Chemstation D.03.00.611)(美國安捷倫公司);質(zhì)譜檢索數(shù)據(jù)庫,NIST MS search 2.0;所用試劑為分析純正構(gòu)烷烴混合對照品(C7~C30),購自上海安譜科學(xué)儀器有限公司;其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

        1.3 頂空進(jìn)樣條件分析取新鮮粉碎的藏茴香粉末(過40目篩)0.5 g,稱定,平行5份,分別置于10 ml頂空瓶中密封,置頂空進(jìn)樣器中按頂空進(jìn)樣條件進(jìn)樣。頂空進(jìn)樣條件分別為樣品瓶加熱溫度100℃、樣品環(huán)溫度120℃、傳輸線溫度140℃、樣品瓶加熱時間25 min、樣品環(huán)平衡時間0.05 min、進(jìn)樣時間1 min。

        1.4GC-MS 分析條件

        1.4.1 色譜條件。色譜柱色譜柱為HP-5彈性石英毛細(xì)管柱(30 m ×250 μm,0.25 μm);進(jìn)樣口溫度250 ℃;載氣為 He氣,柱流量0.8 ml/min。用于頂空直接進(jìn)樣的程序升溫條件:初始溫度45℃,以1℃/min升至60℃,保持1 min,再以1℃/min升至100℃,保持1 min;以2℃/min升至130℃,保持0 min,以10℃/min升至260℃。

        1.4.2 質(zhì)譜條件。標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜調(diào)諧;電離方式EI,電子能量70 eV;離子源溫度230℃,四級桿溫度150℃,輔助區(qū)溫度295℃;數(shù)據(jù)采集掃描模式為全掃描;溶劑延遲時間,揮發(fā)油分析2 min、頂空進(jìn)樣 0.1 min。

        1.5 保留指數(shù)KI值測定精密移取正構(gòu)烷烴混合對照品20 μl加入10 ml頂空瓶中,按照“1.4”項條件直接進(jìn)樣的升溫程序條件分析,用于頂空進(jìn)樣各組分的保留指數(shù)KI值計算;分別記錄不同條件下各正烷烴保留時間,采用線性升溫公式計算各組分的保留指數(shù)KI值,保留指數(shù)KI=100n+100(tx-tn)/(tn+1-tn),式中,tx為被分析組分流出峰的保留時間,tn和tn+1分別為被分析組分相鄰的碳原子數(shù)處于n和n+1之間的正烷烴(tn<tx<tn+1)的流出峰的保留時間。

        2 結(jié)果與分析

        按“1.4”項分析條件,對側(cè)柏葉揮發(fā)性成分進(jìn)行GCMS分析,以峰面積歸一化法計算揮發(fā)油各組分相對含量,對相對峰面積>0.01%的組分進(jìn)行鑒定。各峰質(zhì)譜圖進(jìn)行NIST標(biāo)準(zhǔn)譜庫檢索,選取質(zhì)譜匹配度高的前10個可能物質(zhì),計算其保留指數(shù)KI值,并與NIST庫保留指數(shù)KI值檢索結(jié)果相比較,以質(zhì)譜和保留指數(shù)KI值匹配度最高的化學(xué)結(jié)構(gòu)為最佳鑒定結(jié)果。結(jié)果表明(表1),野生藏茴香和人工種植的藏茴香的揮發(fā)油含有α-蒎烯、檜烯、月桂烯、右旋萜二烯、β-羅勒烯、萜品烯、草蒿腦、右旋香芹酮、茴香腦共9種相同的揮發(fā)性成分,但這些相同的揮發(fā)油含量卻是大多不同的,如α-蒎烯野生藏茴香含量為0.31%、人工種植藏茴香為3.57%,右旋萜二烯野生藏茴香含量為70.32%、人工種植藏茴香為16.60%等。因此野生藏茴香和人工種植的藏茴香在除去相互單獨存在的不同的微量揮發(fā)性成分外,其在共有成分的含量上也是差異比較大的。采用頂空直接進(jìn)樣分析檢測到野生藏茴香有81個色譜峰,鑒定出19種化合物占其總揮發(fā)性成分的88.16%,含量較高的組分為右旋萜二烯(70.32%)、右旋香芹酮(14.02%);采用頂空直接進(jìn)樣分析檢測到人工種植的藏茴香有26個色譜峰,鑒定出17種化合物占其總揮發(fā)性成分的76.73%,含量較高的組分為茴香腦(40.86%)、右旋萜二烯(16.60%)、草蒿腦(7.52%)??梢?,野生藏茴香和人工種植的藏茴香的揮發(fā)油的主要組成成分的種類相近,均含有α-蒎烯、檜烯、月桂烯、右旋萜二烯等,但其組成成分和含量仍然存在一定的差異。

        表1 野生藏茴香人工種植藏茴香揮發(fā)性化學(xué)成分分析結(jié)果(n=5)

        3 小結(jié)與討論

        該試驗首次采用MS定性與Kovats保留指數(shù)相結(jié)合的方法對藏茴香的揮發(fā)性成分進(jìn)行鑒別,使定性結(jié)果更加準(zhǔn)確可信。試驗結(jié)果表明,野生藏茴香和人工種植的藏茴香的揮發(fā)油的主要組成成分的種類相近,均含有α-蒎烯、檜烯、月桂烯、右旋萜二烯、β-羅勒烯、萜品烯、草蒿腦、右旋香芹酮、茴香腦共9種相同的揮發(fā)性成分,但其組成成分和含量仍然存在一定的差異。而從野生藏茴香分離出來的香芹酮(葛縷酮)的含量與張存彥等對其葛縷酮含量以及譚睿等用HPLC對藏茴香油中葛縷酮的含量的測定結(jié)果[6-7]有一定差別,分析原因是由于藏茴香不同年生、不同時期采收和生長環(huán)境不同所致。對于其共有成分α-蒎烯有較強的抗炎、祛痰、抗真菌作用[8],藏茴香在青海的分布較為廣泛,其含有的揮發(fā)性油較多,藏茴香油還被廣泛用作食品添加劑、調(diào)味劑和化妝品香精等[9-10]。筆者建立了GC-MS結(jié)合保留指數(shù)法測定2種藏茴香中揮發(fā)油含量及成分的方法,為藏茴香中揮發(fā)油品質(zhì)評價及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供了依據(jù)。

        [1]中國科學(xué)院中國植物志編寫委員會.中國植物志[M].北京:科學(xué)出版社,1985:275 -2771.

        [2]中華人民共和國衛(wèi)生部.藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)藏藥(第一冊)[S].北京:中華人民共和國衛(wèi)生部,1995:131.

        [3]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典:下冊[K].上海:上海人民出版社,1977:2673.

        [4]吳玫涵,聶凌云,劉云,等.氣相色譜-質(zhì)譜法分析不同產(chǎn)地小茴香藥材揮發(fā)油成分[J].藥物分析雜志,2001,21(6):415 -418.

        [5]鞏麗麗,容蓉,楊勇.GC-MS結(jié)合保留指數(shù)分析側(cè)柏葉揮發(fā)成分[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué),2011,28(1):48 -51.

        [6]張存彥,王成港,陳繼英,等HPLC法測定藏茴香油中葛縷酮的含量[J].中草藥,2005,36(9):19 -22.

        [7]譚睿,王波,陳士林.氣相色譜-質(zhì)譜法分析藏茴香藥材揮發(fā)油成分[J].中草藥,2003,26(12):869 -870.

        [8]MARTIN S,PADILLA E,OCETE M A.Anti-inflammatory activity of the essential oil of Bupleurm fruticesens[J].Planta Med,1993,59(6):533 -536.

        [9]黃遠(yuǎn)征,左堯鳳,何宗英,等.兩種新的茵香腦資源植物[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),1991,3(3):18 -24.

        [10]唐法娣,謝強敏,王硯,等.葛縷酮的氣道擴張作用和呼吸道抗過敏作用[J].中國藥理學(xué)通報, 1999,25(6):25 -27.

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