范冬茹，邢振楠，臧海蓮，王丹麗，張德巖

（1.伊春林業(yè)科學(xué)院，黑龍江 伊春 153000；2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，哈爾濱 150030）

香菇多糖（Lentinan LNT）是一種β-1，3-葡聚糖，系從擔(dān)子菌綱傘菌科真菌香菇子實(shí)體中提取分離純化獲得的均一組分的多糖。具有抗腫瘤、抗感染和調(diào)節(jié)免疫力等作用。傳統(tǒng)香菇多糖的提取方法有水提醇沉法、稀堿浸提法、稀酸浸提法和酶法等，隨著對(duì)香菇研究的不斷深入，又出現(xiàn)超濾法、超聲波法以及微波輔助浸提法等。其中微波輔助浸提法具有設(shè)備簡(jiǎn)單、快速、高效、安全等特點(diǎn)。利用微波強(qiáng)化固液浸取過程是頗具發(fā)展?jié)摿Φ囊环N新型輔助提取技術(shù)。

本實(shí)驗(yàn)利用微波法提取香菇多糖，考察時(shí)間對(duì)多糖得率的影響，在此基礎(chǔ)上用微波法提取伊菇820及香菇808單孢菌株粗多糖，并測(cè)量菌絲體干重，加以比較。

1 材料與方法

1.1 菌種及培養(yǎng)基

伊菇820，香菇808單孢菌株是由伊春林業(yè)科學(xué)院小興安嶺原生態(tài)食用菌研究所自主選育。其中伊菇820是香菇236、香菇808孢子雜交而產(chǎn)生的菌株。

培養(yǎng)基選用CYM培養(yǎng)基：葡萄糖20.0g，蛋白胨2.0g，酵母膏2.0g，MgSO40.5g，K2HPO41.0g，KH2PO40.46g，水1 000mL，pH 自然。

1.2 儀器與設(shè)備

AL104精密電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；Galanz WD800B型微波爐，佛山市順德區(qū)格蘭仕微波爐電器有限公司；KZ-2111KB立式振蕩培養(yǎng)箱，金壇市盛藍(lán)儀器制造有限公司；BAO-23A干燥箱，施都凱儀器（上海）有限公司；MBR-304OR冰箱，三洋電機(jī)株式公社；SW-CT-1D超凈工作臺(tái)，江蘇蘇潔凈化設(shè)備有限公司；TDL-5M臺(tái)式低率冷凍離心機(jī)，湖南凱達(dá)科學(xué)儀器有限公司。

1.3 研究方法

1.3.1 伊菇820培養(yǎng)條件。在裝液量為500mL的三角瓶中裝200mL的培養(yǎng)液，共制備16瓶。高壓滅菌后，涼至常溫，接種伊菇820，每瓶10個(gè)接種點(diǎn)。置于搖床震蕩培養(yǎng)（26℃、160r／min）。培養(yǎng)7d左右至長(zhǎng)滿瓶。

1.3.2 菌絲生長(zhǎng)量測(cè)定方法。經(jīng)1.3.1方法培養(yǎng)后，4 000r／min、5min離心獲得菌絲體，于70℃恒溫烘干至恒重后稱量。

1.3.3 多糖提取步聚。稱取一定質(zhì)量的干菌絲，按1∶30的料液比加入蒸餾水并攪拌，然后設(shè)定時(shí)間、800W微波處理提取香菇多糖。收集濾液，添加乙醇使其終濃度為75%，-4℃醇沉12h后離心（4 000r／min、10min）。取沉淀，70℃烘干即得粗多糖。

1.3.4 微波提取時(shí)間梯度實(shí)驗(yàn)。稱取6份干重為2.0g的菌絲體，分別設(shè)定微波提取時(shí)間為3、5、7、9、11、13min，然后按1.3.3方法提取多糖，計(jì)算多糖得率，確定微波最佳提取時(shí)間。

1.3.5 伊菇820及香菇808單孢菌株多糖產(chǎn)量比較。制備4組200mL／瓶的CYM培養(yǎng)基，每組3瓶。滅菌兩組接種伊菇820，2組接種香菇808單孢菌株。每瓶10個(gè)接種點(diǎn)。置于搖床震蕩培養(yǎng)（26℃、160r／min）。培養(yǎng)7天左右到長(zhǎng)滿瓶即可。按1.3.2方法制備干菌絲并測(cè)定菌絲生長(zhǎng)量。按1.3.3方法提取多糖，微波提取時(shí)間采用1.3.4微波提取時(shí)間梯度實(shí)驗(yàn)中最佳提取時(shí)間。

2 結(jié)果與分析

2.1 微波提取時(shí)間最佳時(shí)間的確定

從圖1結(jié)果可知，微波提取時(shí)間對(duì)菌絲體粗多糖的得率有較大影響，且在9min時(shí)有最大值，表明9min為微波提取粗多糖的最佳時(shí)間。

圖1 不同微波提取時(shí)間下粗多糖干重

2.2 伊菇820及香菇808單孢菌株菌絲生長(zhǎng)量及多糖產(chǎn)量

表2 伊菇820菌絲生長(zhǎng)量及多糖產(chǎn)量

表3 單孢菌株菌絲生長(zhǎng)量及多糖產(chǎn)量

由表2、表3及圖2可知，香菇808單孢菌株菌絲生長(zhǎng)量及多糖產(chǎn)量均明顯優(yōu)于伊菇820。

圖2 兩種菌株均量比較柱形圖

3 結(jié)論

微波法提取菌絲體粗多糖的最佳提取時(shí)間為9 min。香菇808單孢菌株菌絲生長(zhǎng)量及多糖產(chǎn)量均明顯優(yōu)于伊菇820，且粗多糖得率高達(dá)9.52%。表明香菇808單孢菌株多糖含量較高，具有進(jìn)一步的研究?jī)r(jià)值。

［1］ 劉寧，李健.香菇多糖的提取工藝比較［J］.食品科學(xué)，2007，28（9）：199-201.

［2］ 申進(jìn)文，王淑敏，戚元成，等.香菇939菌株單核菌絲和雙核菌絲多糖產(chǎn)量比較［J］.園藝學(xué)報(bào)，2007，34（4）：941-946.

［3］ 姜慧燕，林茂，邵平.微波輔助提取香菇菌糠多糖的工藝研究［J］.安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2010，16（24）：34-36.