李翠平，梁金鐘，趙紅宇

1(黑龍江省高等學(xué)校食品科學(xué)與工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，哈爾濱商業(yè)大學(xué)食品工程學(xué)院，黑龍江哈爾濱，150076)

2(黑龍江康普生物科技有限公司，黑龍江哈爾濱，150025)

γ-聚谷氨酸(γ-poly glutamic acid，γ-PGA)是一種微生物在胞內(nèi)合成并分泌到胞外的水溶性可生物降解型多功能的生物高分子，為水溶性的酰胺化合物，可以通過芽孢桿菌的變種來生產(chǎn)，由 D-谷氨酸和L-谷氨酸單體以γ-羧基與α-氨基以酰胺鍵的形式縮合而成，分子質(zhì)量一般在 105～ 106u［1-2］。γ-PGA 具有極佳的成膜性、成纖維性、阻氧性、可塑性、黏結(jié)性、保濕性和可生物降解等獨(dú)特的理化和生物學(xué)特性［3］。在食品領(lǐng)域，可作為食品及飲料類的增稠劑，還可以改善飲料的味道;作穩(wěn)定劑添加在冰淇淋中;紋理強(qiáng)化劑［4-5］;粘合劑;動物飼料的添加劑;抗凍劑或保護(hù)劑;減輕苦味劑;作為添加劑使用在淀粉食品(面包或面條)可避免老化、改善食品質(zhì)地和保持食物的形狀。在保健方面，它有利于骨質(zhì)疏松癥者對鈣的吸收［6，8］。γ-PGA 作為一種生態(tài)友好型的生物制品，愈來愈顯現(xiàn)出廣闊的研究價值和應(yīng)用前景。

傳統(tǒng)枯草芽孢桿菌發(fā)酵生產(chǎn)γ-PGA主要采用蔗糖、葡萄糖和玉米糖化液等為碳源。以葡萄糖為碳源，發(fā)酵液中 γ-PGA 產(chǎn)量較高(約 19.0 g/L)［9-10］。以檸檬酸鈉和豆粕浸提液為碳源，γ-PGA的產(chǎn)量達(dá)到40.0 g/L。而以玉米糖化液為碳源的基礎(chǔ)，可高產(chǎn)γ-PGA，達(dá)68.4 g/L［11］。但利用玉米秸稈酶解液作為碳源進(jìn)行微生物發(fā)酵生產(chǎn)γ-PGA的還未見報道。以可再生的、價格低廉的秸稈為原料，通過特定微生物發(fā)酵所得的產(chǎn)物具有極大的潛力，如2，3-丁二醇、燃料乙醇、糠醛和丁醇等［12］。我國年產(chǎn)秸稈7.4億 t［13］，其中玉米秸稈年產(chǎn)量高達(dá) 2億 t以上，但目前開發(fā)利用率仍很低［14］。而玉米秸稈一般不能直接被微生物發(fā)酵，所以在發(fā)酵前要將其轉(zhuǎn)化成可溶性糖。酶法水解玉米秸稈［15］條件溫和，副產(chǎn)物少，成本低廉，環(huán)境友好，被廣泛采納。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

玉米秸稈，取自哈爾濱郊區(qū);纖維素酶(Celluclast?1.5L，β-葡糖苷酶 Novozymes188)，購于諾維信公司;菌種，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis HCUL-B-115)，由哈爾濱商業(yè)大學(xué)發(fā)酵工程實(shí)驗(yàn)室篩選、誘變、分離并保藏，中國科學(xué)院菌種保藏中心鑒定，中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的菌種保藏號:CGMCCNo.2283。

1.2 儀器與設(shè)備

SBA-40D生物傳感分析儀(配有 β-D-葡萄糖檢測膜及L-谷氨酸檢測膜)，山東省科學(xué)院生物研究所;723可見分光光度計，上海精科有限公司;HNY恒溫培養(yǎng)振蕩器，天津市歐諾儀器有限公司;DHG-9203A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海一恒科技有限公司;SW-CJ-FD型單人單面凈化工作臺，蘇州凈化有限公司;BS 224S電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司;S-3400掃描電子顯微鏡，HITACHI公司;ES-2030型冷凍干燥，HITACHI公司;E-1010型離子濺射鍍膜儀，HITACHI公司。

1.3 培養(yǎng)基

斜面培養(yǎng)基:牛肉膏3.00 g/L、蛋白胨10.00 g/L、NaCl 5.00 g/L、瓊脂20.00 g/L，pH 7.2 ～7.4。

種子培養(yǎng)基:牛肉膏3.00 g/L、葡萄糖20.00 g/L、蛋白胨10.00 g/L、NaCl 5.00 g/L，pH 7.2 ～7.4。

發(fā)酵培養(yǎng)基:玉米秸稈酶解液、玉米糖化液，CaCl20.42 g/L、蛋白胨5.00 g/L、谷氨酸鈉60.00 g/L、NaCl 12.00 g/L、MgSO4·7H2O 1.25 g/L、KH2PO44.00 g/L、MnSO40.08 g/L。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 玉米秸稈的預(yù)處理

將玉米秸稈自然風(fēng)干，切成2～5 cm的小段，然后利用粉碎機(jī)將玉米秸稈小段粉碎成40目左右的粉末，備用。

蒸煮預(yù)處理:稱取15 g玉米秸稈粉末置于500 mL耐壓試劑瓶中，并以1 g秸稈粉末加入10 mL溶液的比例，向瓶中分別加入 1.0%H2SO4、10.0%NH3OH、水，混勻。將瓶口密封，置于高壓鍋內(nèi)121℃，蒸煮 2 h。蒸煮完成后，高壓鍋溫度降至90℃，迅速降壓，取出后冷卻至室溫，用自來水沖洗處理至pH=6.5～7.0(約洗5～6次)，然后于 80℃烘干至恒重。

1.4.2 玉米糖化液的制備

取300 g市售玉米粉，加水1 000 mL，加入無水CaCl2(添加量為100 mg/kg)煮沸，調(diào)節(jié)pH至6.7～7.0，再加入 α-耐高溫淀粉酶(添加量為 10 U/g原料)，迅速降溫至 80～85℃，保溫 15～20 min，繼續(xù)降溫至58～60℃，調(diào)節(jié)pH 4.5，加糖化酶(添加量為120 U/g原料)，60℃保溫 4 h后，再加熱煮沸 10 min，過濾除渣，測定糖化液糖度為17%，生物傳感儀測得葡萄糖含量為190 g/L。低溫保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.3 玉米秸稈酶解

取適量經(jīng)過預(yù)處理的玉米秸稈置于250 mL三角瓶中，加入纖維素酶和β-葡糖苷酶，用檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(pH 4.8，0.05 mol/L)調(diào)節(jié)固液比。放置在恒溫培養(yǎng)箱(50℃)中酶解，酶解結(jié)束后迅速滅酶(沸水浴10 min)，于4 000 r/min下離心10 min，上清液即為纖維素酶水解液，將酶解液適當(dāng)稀釋，測定其中糖的含量。

1.4.4 培養(yǎng)方法

將斜面上的菌種轉(zhuǎn)接到種子培養(yǎng)基中，37℃，150 r/min搖床培養(yǎng)18 h，將活化后的種子培養(yǎng)液按2%的接種量接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，37℃，150 r/min搖床培養(yǎng)72 h。

1.4.5 γ-PGA的測定

發(fā)酵液在6 000 r/min的轉(zhuǎn)速下離心15 min。取上清液10 mL，加入25 mL的無水乙醇，劇烈搖晃得到團(tuán)狀凝聚物，將其轉(zhuǎn)入恒重的稱量瓶中，置于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中100℃下烘至恒重，得到塊狀樣品，并稱重。

1.5 分析方法

1.5.1 葡萄糖含量測定

待測酶解液稀釋100倍后用SBA-40D生物傳感分析儀測定葡萄糖含量(g/L)。

1.5.2 還原糖含量測定

用 3，5-二硝基水楊酸法(DNS 法)［16］測定。

用間苯三酚-冰醋酸法測定［17］。

1.5.4 電鏡掃描分析

分別將處理前后的秸稈以及酶解后的秸稈進(jìn)行烘干、粉碎，用掃描電鏡進(jìn)行分析(掃描電壓為 5 kV，放大1 000倍)，觀察玉米秸稈內(nèi)部纖維素束的微觀結(jié)構(gòu)變化。

2 結(jié)果與分析

2.1 玉米秸稈處理前后電鏡掃描分析

不同條件預(yù)處理的玉米秸稈電子掃描電鏡圖像見圖1-a。粉碎與未粉碎的玉米秸稈結(jié)構(gòu)差別明顯，未粉碎的玉米秸稈呈纖維素狀，表面光滑，細(xì)胞排列整齊，結(jié)構(gòu)完整。細(xì)胞壁(其主要成分為纖維素)包裹著細(xì)胞內(nèi)容物，纖維素結(jié)構(gòu)之間連接緊密，其致密的表面結(jié)構(gòu)是阻礙纖維素酶作用于纖維素，進(jìn)而阻礙水解的主要原因。而粉碎后的秸稈呈現(xiàn)出明顯的斷層，纖維組織被破壞;由圖1-b、c、d可見，不同預(yù)處理?xiàng)l件的玉米秸稈其復(fù)雜的纖維素結(jié)構(gòu)均發(fā)生了變化。原有的纖維平行排列結(jié)構(gòu)被破壞，細(xì)胞壁撕裂變?yōu)樾鯛罾w維，細(xì)胞間距拉大，輪廓模糊，細(xì)胞內(nèi)容物游離出來。雖然呈束狀結(jié)構(gòu)，但是結(jié)構(gòu)表面有許多不規(guī)則的溝壑和坑洞，整個束狀結(jié)構(gòu)變得松散，不完整，這些結(jié)構(gòu)變化增加了纖維素酶與纖維素的接觸面積，有利于酶解反應(yīng)的進(jìn)行;由圖左右兩圖對比可見:秸稈預(yù)處理后束狀結(jié)構(gòu)表面都有許多的孔洞，但是整體束狀結(jié)構(gòu)仍然很完整，沒有較大的破壞，這說明纖維結(jié)構(gòu)破壞不充分，而經(jīng)酶解處理后的玉米秸稈，秸稈表面出現(xiàn)許多大的坑洞，變得十分疏松，幾乎看不到原來的束狀結(jié)構(gòu)，這是因?yàn)榻?jīng)過酶解處理后玉米秸稈復(fù)雜致密的結(jié)構(gòu)被破壞，內(nèi)部變得疏松多孔，很明顯酶解的都較充分。

圖1 不同處理?xiàng)l件下秸稈電子掃描電鏡圖像Fig.1 Electron microscope images of corn straw under different treatment conditions

水、酸、堿3種預(yù)處理方法對比，酸堿預(yù)處理明顯提高了酶對玉米秸稈的接觸面積，使得酶解反應(yīng)進(jìn)行的很充分，秸稈束狀結(jié)構(gòu)大部分被破壞，說明經(jīng)過預(yù)處理的玉米秸稈更適于能源的生物轉(zhuǎn)化。

2.2 玉米秸稈酶解單因素實(shí)驗(yàn)

2.2.1 酶用量對糖濃度的影響

玉米秸稈在 pH 5.0、反應(yīng)時間 72 h、溫度為50 ℃、底物比例為 1∶15、酶用量分別為 20、25、30、35、40 FPIU/g條件下酶解，然后離心，稀釋酶解液，測定出糖濃度。結(jié)果見圖2。

四十多歲，就疾病纏身，這種遭遇，大抵是悲催的。以至于我長時間處在一種憂慮與焦躁的狀態(tài)當(dāng)中。戒酒是必須的。有幾次，在瀘州和畢節(jié)，都是產(chǎn)好酒的地方，卻不敢再喝一口。因此，我特別懷念自己還可以喝酒時候的某種癲狂狀態(tài)。其實(shí)，酒解決和帶入的是人生的混沌境界，這種混沌是激越和亢奮的，也是歡樂與豐富的，就像去掉了肉身，進(jìn)入到了純粹的靈魂仙境一般。

圖2 酶加入量對還原糖濃度的影響Fig.2 Effect of the amount of enzyme on reducing sugar yield

由圖2可以看出，當(dāng)酶加入量為30 FPIU/g時，玉米秸稈酶解后含糖量最高;當(dāng)酶加入量低于30 FPIU/g時，隨著酶加入量的不斷升高，還原糖含量隨之升高;當(dāng)高于30 FPIU/g時，隨著酶加入量的升高，還原糖含量呈現(xiàn)下降趨勢。這說明，酶與底物配比最佳量，在最適反應(yīng)底物量時，酶活力最大，還原糖含量達(dá)到最高。

2.2.2 底物比例對糖濃度的影響

玉米秸稈在 pH 5.0、反應(yīng)時間 72 h、溫度為50℃、酶用量分別為25 FPIU/g、底物比例分別為1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35 條件下進(jìn)行酶解反應(yīng)，然后進(jìn)行離心，稀釋酶解液，測定出糖濃度。結(jié)果見圖3。

圖3 底物比例對還原糖濃度的影響Fig.3 Effect of the substrate concentration on reducing sugar yield

從圖3可以看出，當(dāng)?shù)孜锉壤秊?∶15時，還原糖含量較高，隨著底物比例的增加，還原糖含量也增加，這是由于在酶用量一定的情況下，與底物接觸的越充分，酶解越徹底，從而使更多的糖能夠釋放出來。底物比例對酶解反應(yīng)非常重要，如果加緩沖液較少，酶則不能夠充分與底物接觸，從而降低酶解液含糖量;若加酶量太多，則增加了生產(chǎn)成本，綜合考慮，底物比例選擇1∶15。

2.2.3 酶解時間對糖濃度的影響

玉米秸稈在溫度50℃、酶用量25 FPIU/g、酶解pH 5.0、反應(yīng)時間 60、72、84、96、108 h 的條件下酶解，然后離心，得到酶解液，結(jié)果見圖4。

圖4 酶解時間對還原糖濃度的影響Fig.4 Effect of the time on reducing sugar yield

從圖4可以看出，隨著酶解時間的延長，玉米秸稈酶解液中還原糖含量升高。在最初的酶解階段，還原糖含量提高得較為明顯，隨后作用效果就減弱，酶解時間是使纖維素降解的關(guān)鍵，適合的時間應(yīng)該根據(jù)還原糖含量來確定。酶解時間長有利于糖量升高，但酶解時間超過84 h后出糖量增加緩慢，從工作效率、設(shè)備利用以及能耗等經(jīng)濟(jì)角度來衡量，最適的酶解時間為84 h。

2.3 玉米秸稈酶解正交試驗(yàn)結(jié)果

玉米秸稈經(jīng)不同的預(yù)處理方法處理后進(jìn)行酶解，酸、堿、水預(yù)處理，相對堿效果要好。以氨處理原料進(jìn)行酶解條件優(yōu)化，選擇酶濃度(A)、底物比例(B)、酶解時間(C)3個因素，每個因素3個水平，采用L9(34)進(jìn)行正交試驗(yàn)，以還原糖含量為評價指標(biāo)，對玉米秸稈酶解條件進(jìn)行優(yōu)化。確定正交試驗(yàn)的因素和水平見表1-表3。

表1 玉米秸稈酶解糖化正交試驗(yàn)的因素水平表Table 1 Maize straw enzyme saccharification factors and levels for orthogonal array design

表2 10.0%NH3OH處理原料正交試驗(yàn)設(shè)計及結(jié)果Table 2 10.0%NH3OH treatment orthogonal array design and results

表3 10.0%NH3OH處理原料正交試驗(yàn)方差分析結(jié)果Table 3 Analysis of variance for the experimental results of orthogonal array design

表2表明，影響10.0%NH3OH預(yù)處理玉米秸稈酶解的各因素主次順序?yàn)锳＞B＞C;表3表明，A因素(即酶量)對玉米秸稈酶解有顯著影響(P＜0.05)，而B、C因素影響較小(P＞0.05)，因此優(yōu)選出最佳工藝條件為A3B1C2，即加酶量為35 FPIU/g，底物比為1∶15，酶解時間為84 h。與水，1.0%H2SO4預(yù)處理方法相比，酶解液含糖量提高較大，可以作為發(fā)酵γ-PGA原料處理的最優(yōu)處理方法，氨還可以通過回收循環(huán)利用，整個過程能耗較低，是一種較有發(fā)展前途和應(yīng)用前景的預(yù)處理技術(shù)。

2.4 預(yù)處理與未處理原料對酶解效果的影響

玉米秸稈處理前和處理后的酶解效果差別較大，見圖5。酸氨處理打破了玉米秸稈3種組分的致密結(jié)構(gòu)，解除了木質(zhì)素對半纖維素和纖維素的包裹，盡可能地降低了纖維素的結(jié)晶度［18，20］，增加了微生物與酶的可及性，提高利用率。蒸汽爆破法與酸堿連用，在高壓狀態(tài)下，保持一定時間內(nèi)蒸發(fā)掉纖維細(xì)胞內(nèi)的水分，使半纖維素水解，然后瞬間釋壓，使物料爆破。稀酸處理則可以有效溶解木質(zhì)素和半纖維素，同時破壞纖維素的結(jié)晶結(jié)構(gòu)，使原料疏松。氨處理可以脫除原料中大部分木質(zhì)素，條件溫和，而且可以除去纖維素原料中對發(fā)酵不利的乙酰基，但是會損失半纖維素。

圖5 玉米秸稈酶解隨底物比例還原糖產(chǎn)量變化Fig 5 Maize straw enzyme reducing reducing sugar yield changes over substrate ratio

由圖5可知，經(jīng)過酸處理的玉米秸稈還原糖產(chǎn)量為33.99 g/L，經(jīng)氨處理的為68.78 g/L，而未經(jīng)處理的為9.26 g/L。處理后比處理前的還原糖含量有明顯的提高。

2.5 不同預(yù)處理方法所得玉米秸稈酶解液對γ-PGA的影響

以玉米秸稈酶解液為碳源，調(diào)節(jié)pH為5左右，接種量2%，于37℃發(fā)酵。原料預(yù)處理方式有4種，分別為水預(yù)處理、1.0%H2SO4、10.0%NH3OH預(yù)處理、未經(jīng)預(yù)處理。發(fā)酵效果以γ-PGA含量、殘?zhí)橇俊埞劝彼崃繛橹笜?biāo)，結(jié)果如圖6所示。

圖6 玉米秸稈酶解液發(fā)酵產(chǎn)γ-PGAFig.6 Maize straw enzymolysis liquid fermentation to produce γ-PGA

未經(jīng)預(yù)處理的原料直接酶解，其酶解液(還原糖量為23.60 g/L)發(fā)酵效果不好，提取物未成團(tuán)，呈絮狀物，發(fā)黏，黏壁，產(chǎn)物顏色較深。而經(jīng)過預(yù)處理的酶解液(還原糖量分別為28.78 g/L、34.63 g/L、67.5 g/L)發(fā)酵效果較好，提取物均成團(tuán)。3種原料(水處理原料、10.0%NH3OH處理原料、1.0%H2SO4處理原料)單獨(dú)對比，10.0%NH3OH處理原料酶解液發(fā)酵效果最好，γ-PGA產(chǎn)量為41.00 g/L。

2.6 玉米糖化液與玉米秸稈酶解液混合發(fā)酵

2.6.1 混合發(fā)酵對γ-PGA的影響

玉米糖化液以10%、20%、30%、40%、50%比例與10.0%NH3OH處理原料玉米秸稈酶解液混合發(fā)酵產(chǎn)γ-PGA。玉米秸稈酶解液經(jīng)過濃縮，脫色處理配制發(fā)酵培養(yǎng)基?；旌习l(fā)酵培養(yǎng)基起始還原糖含量為70.08 g/L。發(fā)酵后以殘?zhí)橇?、?PGA含量為指標(biāo)分析了對發(fā)酵效果的影響(圖7)。

圖7 玉米糖化液與玉米秸稈酶解液混合發(fā)酵γ-PGAFig.7 Corn saccharification liquid mixed with corn straw enzymolysis liquid fermentation γ-PGA

結(jié)果表明，枯草芽胞桿菌利用混合培養(yǎng)基發(fā)酵效果較好，產(chǎn)量較高。在玉米糖化液比例為30%時，發(fā)酵效果最好，γ-PGA產(chǎn)量為 80.00 g/L，殘?zhí)橇繛?1.00 g/L。隨著玉米糖化液含量的增加，γ-PGA的產(chǎn)量不是直線上升，反而有所下降。玉米秸稈酶解液與玉米糖化液混合比例為30%作為枯草芽孢桿菌發(fā)酵產(chǎn)γ-PGA的最優(yōu)碳源?；旌习l(fā)酵γ-PGA產(chǎn)量為80.00 g/L，而單獨(dú)以玉米秸稈酶解液發(fā)酵γ-PGA產(chǎn)量最高為41.00 g/L，相比，混合發(fā)酵產(chǎn)γ-PGA產(chǎn)量提高了95.12%。為合成γ-PGA提供了適宜的糖量，既保證了γ-PGA合成所需的糖量又不會因糖量過高而抑制γ-PGA的合成。

2.6.2 混合發(fā)酵產(chǎn)γ-PGA前后葡萄糖、還原糖、木糖含量的變化

一般來說，碳源對于枯草芽孢桿菌合成γ-PGA的產(chǎn)量有很大的影響，是細(xì)胞生長最重要的能量和營養(yǎng)來源。本研究采用的玉米秸稈酶解液與玉米糖化液混合作為培養(yǎng)基中的碳源，其中除了葡萄糖，還有木糖、甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖、乙酸及少量糠醛等物質(zhì)，優(yōu)于其他單一的碳源，因?yàn)樗撕芯N生長所必需的碳源外還有其他微量元素和生長因子，從而有利于菌種生長或?qū)酃劝彼岷铣擅傅幕钚杂兴岣?，以葡萄糖、木糖、還原糖為指標(biāo)衡量發(fā)酵前后對糖的利用情況(見圖8)。其中葡萄糖含量22.00 g/L、還原糖含量66.46 g/L、木糖含量9.10 g/L。

圖8 發(fā)酵前后葡萄糖、木糖、還原糖含量變化Fig.8 Glucose，xylose，reducing sugar content changes before and after fermentation

由圖8可見，通過對發(fā)酵前后糖含量的分析，糖量的變化都較為明顯，葡萄糖利用率可達(dá)到100%，還原糖利用率為68.58%，木糖利用率為53.84%。可以確定部分木糖被利用，實(shí)現(xiàn)了戊糖與己糖同時被微生物利用。木糖一般不能為微生物發(fā)酵所利用，只能被部分細(xì)菌利用，多存在于廢棄物中。以價廉易得的木質(zhì)玉米秸稈纖維為原料來生產(chǎn)γ-PGA，其中主要的糖都可以被充分利用，可以大大的拓展了其生產(chǎn)原料的來源，還明顯增加其利用的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益。

4 結(jié)論

玉米秸稈預(yù)處理可改變木質(zhì)素微結(jié)構(gòu)及超分子結(jié)構(gòu)，使纖維素結(jié)晶區(qū)破壞，提高反應(yīng)靈活性，降低酶量，得到含糖量較高的酶解液。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，玉米秸稈的最佳預(yù)處理?xiàng)l件為10.0%NH3OH汽爆處理，固液比1∶10，121℃ 高壓水解2 h。NH3OH處理優(yōu)點(diǎn)較多，NH3OH易揮發(fā)，可以進(jìn)行回收，對環(huán)境不易造成污染還可以節(jié)省生產(chǎn)成本。酶解最佳條件為當(dāng)pH為5，酶用量為35 FPIU/g，底物比例為1∶15，時間96 h。通過比較分析玉米秸稈酶解液單獨(dú)發(fā)酵和與玉米糖化液混合發(fā)酵對產(chǎn)γ-PGA的影響，結(jié)果表明，混合發(fā)酵優(yōu)于玉米酶解液單獨(dú)發(fā)酵，確定了最佳比例為3∶7時，發(fā)酵效果最好，γ-PGA 產(chǎn)量可達(dá)80.00 g/L，與玉米秸稈酶解液單獨(dú)發(fā)酵相比，混合發(fā)酵產(chǎn)γ-PGA產(chǎn)量提高了95.12%。葡萄糖利用率100%，還原糖利用率68.58%，木糖利用率53.84%。

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