劉新義，陳 斌，馮小花，蔡文杰

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，湖南長沙410128；2.湖南省畜牧獸醫(yī)研究所，湖南長沙410131）

黃芪多糖對豬免疫功能的影響

劉新義1，陳 斌1，馮小花2，蔡文杰2

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學動物科技學院，湖南長沙410128；2.湖南省畜牧獸醫(yī)研究所，湖南長沙410131）

為了進一步考察黃芪多糖（黃芪提取物）對豬免疫功能的影響，本試驗于豬瘟疫苗免疫前后15日，對50頭65日齡的健康外三元雜交豬分組，按不同劑量添加飼喂黃芪多糖可溶性粉，飼喂時間為1個月；并于飼喂后分兩次進行耳靜脈采血，采用豬瘟病毒抗體阻斷ELISA檢測法檢測豬體內(nèi)抗體水平,得出了在日糧中添加黃芪多糖的豬體內(nèi)抗體水平明顯高于空白對照組，且添加量為日糧0.2%的黃芪多糖可溶性粉的試驗組抗體水平最高，該試驗證實了黃芪多糖對豬的免疫功能具有明顯的增強效果。

黃芪多糖；抗體檢測；免疫增強劑；豬

免疫增強劑是一類單獨或與抗原同時使用通過非特異性途徑增強機體免疫應(yīng)答的物質(zhì)。它有利于加強機體的免疫功能，緩解由環(huán)境應(yīng)激造成的免疫功能紊亂，有利于預防和治療傳染性及條件性疾病。隨著現(xiàn)代醫(yī)學科學研究的深入發(fā)展，人們對免疫增強劑的醫(yī)療、保健作用越來越重視，高效、穩(wěn)定、毒副作用小的中藥免疫增強劑將是未來抗御疾病的主要物質(zhì)。

黃芪多糖(Astragaluspolysaccharme，APS)是黃芪中最重要的天然有效成分，是黃芪藥理作用中起決定性因素的一類化合物。黃芪多糖能提高機體免疫功能，增強細胞生理代謝，提高巨噬細胞活性，是理想的免疫增強劑，它能促進T細胞、B細胞、NK細胞等免疫細胞的功能，對多種免疫缺陷癥均有良好的防治作用，同時具有抗病毒、抗衰老、抗應(yīng)激、抗氧化等作用。筆者通過檢測黃芪多糖對豬瘟免疫抗體的影響，為黃芪多糖的合理臨床應(yīng)用提供了可靠的試驗數(shù)據(jù)。

1 試驗材料

1.1 主要試劑

豬瘟兔化弱毒活疫苗（細胞源，由湖南省漣源市畜牧水產(chǎn)局提供)；黃芪多糖可溶性粉可溶性粉（10%，湖南廣大傲農(nóng)畜牧獸醫(yī)研發(fā)有限公司）；豬瘟抗體檢測試劑（美國EDEXX：13-43220-Y241）

1.2 主要儀器

高速離心機（上海耐圣卡蘭實業(yè)有限公司）；微量移液槍（上海榮泰生化工程有限公司）；全自動酶標儀（南京華東電子集團醫(yī)療裝備有限責任公司）；微量振蕩器（長沙永樂康醫(yī)療設(shè)備有限公司）；生化培養(yǎng)箱（上海精密儀器有限公司）；優(yōu)普純水機（廣州市授科儀器科技有限公司）。

1.3 試驗動物

根據(jù)試驗要求，選擇未經(jīng)過豬瘟疫苗免疫的漣源市藍田辦事處某豬場（200頭母豬），自繁自養(yǎng)，飼養(yǎng)管理水平適中，挑選出50頭65日齡左右，體重相近、健康壯實的“杜長大”三元雜交豬。

2 試驗方法

2.1 動物分組

共分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和空白對照組五組，基礎(chǔ)日糧為玉米-豆粕型，對照組與試驗組均每天飼喂2次，飼喂時間為1個月。

（1）空白對照組：飼喂基礎(chǔ)日糧，耳標編號為1～10 號；（2）試驗Ⅰ組：基礎(chǔ)日糧，另添加飼料量0.05%黃芪多糖可溶性粉，耳標編號為11～20號；（3）試驗Ⅱ組：基礎(chǔ)日糧，另添加飼料量0.1%黃芪多糖可溶性粉，耳標編號為21～30號；（4）試驗Ⅲ組：基礎(chǔ)日糧，另添加飼料量0.2%黃芪多糖可溶性粉，耳標編號為 31～40 號；（5）試驗Ⅳ組：基礎(chǔ)日糧，另添加飼料量0.3%黃芪多糖可溶性粉，耳標編號為41～50號。

2.2 注射免疫疫苗

在免疫疫苗前后15天，除空白對照組外，試驗組按試驗要求在基礎(chǔ)食糧中添加了不同量黃芪多糖可溶性粉。在豬群無異常狀況下，2013年4月25日，按照疫苗使用說明，用專用疫苗稀釋液稀釋豬瘟凍干疫苗，嚴格按免疫要求進行消毒和一個針頭免疫一頭豬標準，在豬頸部后側(cè)肌注豬瘟疫苗1頭份/頭。觀察免疫副反應(yīng)及應(yīng)激情況。

2.3 采血及檢測判定方法

于5月25日和6月25日，在豬耳靜脈進行采血，每頭豬采血量為2.5mL，按操作規(guī)程要求采集豬全血樣品100個，用保溫箱冷藏，在試驗室用離心機處理得到檢測用血清。采用豬瘟病毒抗體阻斷ELISA檢測法。判定標準：阻斷率≥40%，抗體陽性（+）；阻斷率≤30%，抗體陰性（－）；40%＞阻斷率＞30%，為可疑（±），可疑血清樣品在下次采血時以下次抗體效價作為最終結(jié)果判定。

3 試驗結(jié)果

3.1 免疫副反應(yīng)及應(yīng)激情況

4月2 5 日免疫后，空白組的3、7號豬，試驗I組的18號豬，出現(xiàn)了免疫應(yīng)激反應(yīng)，具體表現(xiàn)為精神萎靡不振、呼吸略為急促，觀察1h后，免疫應(yīng)激反應(yīng)癥狀消失，逐步恢復正常。

3.2 抗體檢測對照

5月2 7 日免疫抗體檢測其陰性對照OD450=0.131，陽性對照OD450=1.633；6月27日免疫抗體檢測其陰性對照OD450=0.147，陽性對照OD450=1.735。

3.3 各組抗體檢測結(jié)果

3.3.1 空白對照組的抗體檢測結(jié)果。具體結(jié)果見表1。

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從表1中可看出，5月27日檢測4、6、7號豬抗體結(jié)果為陰性，其它為陽性，抗體陽性率為70%；7個抗體陽性O(shè)D450值平均為0.641。6月27日檢測4、6、7號豬抗體結(jié)果為陰性，其它為陽性，抗體陽性率為70%；7個抗體陽性O(shè)D450值平均為0.658。

3.3.2 試驗Ⅰ組抗體檢測結(jié)果。

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試驗Ⅰ組添加黃芪多糖可溶性粉的量為0.05%。從表2中顯示5月27日檢測18號豬免疫抗體結(jié)果為陰性，其它9個豬瘟免疫抗體陽性，抗體陽性率為90%，抗體效價OD450值平均為0.761。6月27日檢測18號豬免疫抗體陰性，其它9個豬瘟免疫抗體陽性，抗體陽性率為90%，抗體效價OD450值平均為0.761。

3.3.3 試驗Ⅱ組抗體檢測結(jié)果。具體結(jié)果見表3。

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試驗Ⅱ組添加黃芪多糖可溶性粉的量為0.1%。從表3可看出,5月27日檢測27號豬免疫抗體為可疑，28號為免疫抗體陰性，其它8個豬瘟免疫抗體陽性，抗體陽性率為80%，OD450值平均為0.818。6月27日檢測28號豬為免疫抗體陰性，其它9個豬瘟免疫抗體陽性，抗體陽性率為90%，OD450值平均為0.892。

3.3.4 試驗Ⅲ組抗體檢測結(jié)果。具體結(jié)果見表4。

試驗Ⅲ組添加黃芪多糖可溶性粉的量為0.2%，表4中顯示5月27日檢測免疫抗體結(jié)果全部為陽性，抗體陽性率為100%，OD450值平均為0.857。6月27日檢測免疫抗體結(jié)果全部為陽性，抗體陽性率為100%，OD450值平均為0.975。

3.3.5 試驗Ⅳ組抗體檢測結(jié)果。

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試驗Ⅳ組黃芪多糖可溶性粉的添加量為0.3%，從表5看出,5月27日檢測Ⅳ組免疫抗體結(jié)果全部為陽性，抗體陽性率為100%，OD450值平均為0.813；6月27日檢測免疫抗體全部為陽性，抗體陽性率為100%，OD450值平均為0.904。

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6 小結(jié)

從試驗結(jié)果來看，空白對照組的免疫抗體合格率為70%，抗體陽性O(shè)D450值平均為0.641；試驗組整體抗體陽性率達92.5%，抗體陽性O(shè)D450值平均為0.812，表明日糧中添加適量的黃芪多糖可溶性粉能增強仔豬免疫功能，并促進免疫抗體水平效價的提高；試驗Ⅲ組(基礎(chǔ)日糧+0.2%黃芪多糖可溶性粉)的5月27日檢測免疫抗體全部為陽性，抗體陽性率為100%，OD450值平均為0.857。6月27日檢測免疫抗體全部為陽性，抗體陽性率為100%，OD450值平均為0.975,免疫效果最好，抗體效價最高；試驗Ⅲ組(基礎(chǔ)日糧+0.2%黃芪多糖可溶性粉)與試驗Ⅳ組(基礎(chǔ)日糧+0.3%黃芪多糖可溶性粉)檢測抗體陽性率均為100%，并無明顯抗體效價水平差異，從中可以得出在基礎(chǔ)日糧中添加0.2%黃芪多糖可溶性粉為最適宜，可達到理想的免疫增強效果；豬瘟疫苗在免疫60天后可達到較好的免疫效果，在基礎(chǔ)日糧中添加黃芪多糖可溶性粉的試驗組免疫效價提升相對較高，免疫增強效果顯著；未在基礎(chǔ)日糧中添加黃芪多糖可溶性粉的空白對照組發(fā)生免疫應(yīng)激反應(yīng)較大，在基礎(chǔ)日糧中添加黃芪多糖可溶性粉的試驗組免疫應(yīng)激反應(yīng)最小，機體抗病能力強。

通過此次試驗，可以得出以下初步結(jié)論：在免疫疫苗前后15天左右添加黃芪多糖可溶性粉，有效添加量為基礎(chǔ)日糧的0.2%黃芪多糖可溶性粉，有利于加強機體的免疫系統(tǒng)功能，解除免疫抑制，提高抗體效價水平，緩解由環(huán)境應(yīng)激造成的免疫功能紊亂，有利于預防和早期控制傳染性及條件性疾病。

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S858.28

A

1006-4907（2014）04-0007-04

10.3969/j.issn.1006-4907.2014.04.003

2014-06-12