李 萍，張黎明

（天津科技大學(xué)生物工程學(xué)院，天津 300457）

近年來(lái)，紅霉素衍生物的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用研究較為活躍[1,2]，其中衍生物之一硫氰酸紅霉素，已被我國(guó)歸類到了獸用藥品中。硫氰酸紅霉素為紅霉素硫氰酸鹽，為最新一代動(dòng)物專用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，主要用于革蘭氏陽(yáng)性菌和支原體感染，更多用于合成紅霉素、羅紅霉素、阿奇霉素、克拉霉素等大環(huán)內(nèi)酯類抗生素[3]?！吨袊?guó)獸藥典》（2010 年版）對(duì)有機(jī)溶劑殘留做了限度規(guī)定[4]。但是關(guān)于對(duì)硫氰酸紅霉素溶劑殘留分析方法的研究，國(guó)內(nèi)未見(jiàn)報(bào)道。本次研究旨在探討一種適用于硫氰酸紅霉素溶劑殘留中丙酮的測(cè)定方法，對(duì)進(jìn)一步提高產(chǎn)品質(zhì)量控制具有重要的理論和實(shí)踐指導(dǎo)作用。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

安捷倫7820A 型氣相色譜儀，丙酮、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）為色譜純，硫氰酸紅霉素樣品（樣品1、2、3）。

1.2 分析方法的色譜條件

色譜柱：PEG-20M Agilent 毛細(xì)管柱（1.0 μm，0.53 mm×30 m），載氣：氮?dú)猓瑱z測(cè)器：氫火焰離子檢測(cè)器；汽化室溫度：200 ℃，色譜柱溫度：80 ℃，檢測(cè)器溫度：250 ℃，柱流量：1.0 mL/min，頂空進(jìn)樣。

1.3 試驗(yàn)溶液的制備

1.3.1 對(duì)照品溶液 取丙酮約5 000 μg ，置100 mL容量瓶中，加DMF 溶解并定容稀釋至刻度，搖勻，轉(zhuǎn)入頂空瓶中作為對(duì)照品溶液。

1.3.2 空白溶液 DMF。

1.3.3 供試品溶液 精密稱取硫氰酸紅霉素樣品1 批約0.05 g，置100 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀釋定容至刻度，混勻，轉(zhuǎn)入頂空瓶中作為供試品溶液。

1.3.4 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)溶液的制備 精密稱取硫氰酸紅霉素樣品1 批約0.05 g，共計(jì)9 份。分別置于100 mL 容量瓶中，分別加入含丙酮50 μg、100 μg、150 μg 的水溶液，加入DMF 溶解并定容稀釋至刻度，搖勻，制備成溶液濃度為50 %、100 %、150 %的溶液各3 份。

1.3.5 線性實(shí)驗(yàn)溶液的制備 取丙酮約6 000 μg，置100 mL 容量瓶中，加DMF 溶解并定容稀釋至刻度。分別吸取4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL、7.0 mL、8.0 mL、9.0 mL、10.0 mL 于10 mL 容量瓶中，加DMF 溶解并定容稀釋至刻度。轉(zhuǎn)入頂空瓶中作為線性溶液，配制濃度分別是24.0 μg/mL、30.0 μg/mL、36.0 μg/mL、42.0 μg/mL、48.0 μg/mL、54.0 μg/mL、60.0 μg/mL，相當(dāng)于檢測(cè)樣品含量的48 %、60 %、72 %、84 %、96 %、108 %、120 %。1.3.6 檢測(cè)限、定量限溶液的制備 吸取1.3.1 項(xiàng)下溶液1 mL 至10 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀釋定容至刻度，混勻，作為溶液1#，即稀釋為10-1，依次稀釋至10-n，（依次編號(hào)為2#、3#、4#…n）轉(zhuǎn)入頂空瓶中備用。

1.4 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

系統(tǒng)適用性參數(shù)結(jié)果及其它實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)的評(píng)價(jià)參考《中國(guó)獸藥典》[4]的要求。

2 方法與結(jié)果

2.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液頂空平衡30 min 后，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖至丙酮峰保留時(shí)間的3 倍。重復(fù)進(jìn)樣5次。所得圖譜中丙酮峰面積RSD 為1.0 %，理論塔板數(shù)（N）為86 416，拖尾因子（T）為1.0，分離度（R）為1.6。

2.2 專屬性實(shí)驗(yàn)

取對(duì)照品溶液、空白溶液、供試品溶液頂空平衡30 min 后，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖至丙酮峰保留時(shí)間的3 倍?？瞻兹芤簩?duì)對(duì)照品溶液和供試品溶液無(wú)干擾，主成分與相鄰物質(zhì)能完全分離，分離度為1.6。

2.3 精密度實(shí)驗(yàn)

取供試品溶液6 份，并依次編號(hào)。取上述6 份溶液頂空平衡30 min 后，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖至丙酮峰保留時(shí)間的3 倍，重復(fù)進(jìn)樣6 次，其丙酮含量的RSD 為2.3 %。

2.4 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)

取準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)溶液頂空平衡30 min 后，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖至丙酮峰保留時(shí)間的3 倍，測(cè)定丙酮的色譜峰面積。丙酮的平均回收率為99.7 %，RSD為1.2 %。

2.5 線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)

取線性實(shí)驗(yàn)溶液頂空平衡30 min 后，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖至丙酮峰保留時(shí)間的3 倍。以峰面積Y 對(duì)濃度X（μg/mL）進(jìn)行線性回歸，得到線性方程Y=0.1065X+1.7536，R2=0.999 0（見(jiàn)圖1）。

圖1 線性實(shí)驗(yàn)回歸曲線

2.6 檢測(cè)限、定量限實(shí)驗(yàn)

將空白溶液和檢測(cè)限、定量限檢測(cè)溶液頂空平衡30 min 后，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖至丙酮峰保留時(shí)間的3 倍。計(jì)算對(duì)照品溶液中主峰信號(hào)響應(yīng)值與空白響應(yīng)值的比值。信噪比為3：1 時(shí)的對(duì)照品溶液濃度即為檢測(cè)限，信噪比為10：1時(shí)的對(duì)照品溶液濃度即為定量限。結(jié)果最低檢測(cè)限為4.0 μg/L，最低定量限為8.0 μg/L。

2.7 樣品檢測(cè)

稱取硫氰酸紅霉素樣品0.05 g，加入DMF 溶解并定容稀釋至刻度，搖勻。取上述溶液頂空平衡30 min后，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖至丙酮峰保留時(shí)間的3 倍，測(cè)定丙酮的色譜峰面積。另取丙酮對(duì)照品0.25 g，加入DMF 溶解并定容稀釋至刻度，搖勻。稀釋后加DMF 溶解并定容稀釋至刻度，搖勻，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算（見(jiàn)表1）。

表1 樣品丙酮?dú)埩魷y(cè)定結(jié)果

3 討論

藥物中的溶劑殘留[4]系指在原料藥或輔料的生產(chǎn)中，以及在制備過(guò)程中使用的，但在工藝過(guò)程中未能完全去除的有機(jī)溶劑。殘留溶劑不但沒(méi)有療效，而且具有毒性和致癌作用，已逐漸引起國(guó)際醫(yī)藥界和管理部門的重視。本研究建立的氣相色譜法首次全面、準(zhǔn)確的對(duì)其中最主要的丙酮?dú)埩羧軇┓治龇椒ㄟM(jìn)行了報(bào)道。

該法操作簡(jiǎn)便、快速，最低檢測(cè)限和定量限較低，分別為4.0 μg/mL 和8.0 μg/mL，可以滿足獸藥溶劑殘留檢測(cè)的要求；測(cè)定結(jié)果的重復(fù)性好，樣品測(cè)定RSD＜10.0 %的要求；同時(shí)樣品加標(biāo)回收率在90.0 %～110.0 %范圍之內(nèi)，具有較高的準(zhǔn)確度；專屬性強(qiáng)，分離度符合＞1.5 的要求；線性結(jié)果表明丙酮濃度在24～60 μg/mL的線性范圍內(nèi)，其線性關(guān)系良好；對(duì)其不同批號(hào)樣品的殘留進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果均小于0.50 %的限度，從而證明了該分析方法適合于對(duì)硫氰酸紅霉素的殘留檢測(cè)。

［1］ 陳悅.反相HPLC 分析硫氰酸紅霉素的相關(guān)物質(zhì)及主組分含量［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2007，42（23）：1822-1826.

［2］ 魏琦，李欣.反相高效液相色譜法測(cè)定硫氰酸紅霉素組分［J］.基層醫(yī)學(xué)論壇，2009，（28）：920-921.

［3］ 徐錚奎.硫氰酸紅霉素如日中天［N］.醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào)，2008.

［4］ Ch.P（2010）Vol Ⅱ（中國(guó)獸藥典2010 年版，二部）［S］.2010：81-86.