孫彥昊 浦 潔 曹 莉 楊世林 崔京浩

（蘇州大學(xué) 藥學(xué)院，江蘇 蘇州 215123）

艾迪注射液是由人參、黃芪、刺五加、斑螯等組成的中藥復(fù)方抗腫瘤針劑，臨床上主要用于原發(fā)性肝癌、肺癌、腸癌、鼻咽癌、泌尿系統(tǒng)腫瘤、惡性淋巴瘤和婦科惡性腫瘤的輔助治療以及腫瘤術(shù)后的鞏固治療[1-2]。通過前期有效成分的藥效學(xué)篩選，我們呢保留了艾迪注射液中的人參皂苷、刺五加皂苷、黃芪皂苷和斑蝥素等成分，并通過正交試驗進行了成分間配比的優(yōu)化，得到了艾迪注射液新組方。

本文通過比較正常小鼠和荷瘤小鼠的耐疲勞和耐缺氧實驗，以及荷瘤小鼠免疫器官指數(shù)的測定，探討了艾迪新組方對荷瘤小鼠的扶正作用及其機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與細胞株

ICR小鼠（SPF）260只，體重23±2g，雄性，購自蘇州大學(xué)實驗動物中心；小鼠肝癌H22細胞購自中國科學(xué)院上海生物化學(xué)與細胞生物學(xué)研究所。

1.2 試劑

人參皂苷，黃芪皂苷，刺五加皂苷，（純度均＞80%，蘇州大學(xué)天然藥物教研室自制，批號：20110228）；斑蝥素（純度＞90%，南京澤郎醫(yī)藥科技有限公司，批號：ZL20090120）；5-氟尿嘧啶（購自上海旭東海普藥業(yè)有限公司，批號：H31020593）。

1.3 實驗方法

1.3.1 實體瘤模型的建立 選取健康雄性ICR小鼠50只，體重23±2g，無菌抽取接種6d生長良好的肝癌H22小鼠腹水，稀釋至細胞密度為1×107/mL，以每只0.2 mL無菌接種于小鼠右側(cè)腋窩皮下制造實體瘤模型。

1.3.2 正常與荷肝癌小鼠耐疲勞實驗 將接種肝癌H22細胞后的小鼠隨機分為5組，每組10只。同時另外選取50只健康雄性ICR小鼠，也隨機均分為相對應(yīng)的5組。（1）模型對照組：生理鹽水10 mL·kg-1·d-1；（2）艾迪新組方低劑量組：艾迪新組方 5.5 mg·kg-1·d-1；（3）艾迪新組方中劑量組：艾迪新組方 11 mg·kg-1·d-1；（4）艾迪新組方高劑量組：艾迪新組方 22 mg·kg-1·d-1；（5）陽性對照組：5-氟尿嘧啶 15mg·kg-1·d-1。 腫瘤接種后次日開始腹腔注射給藥，給藥容積均為0.1mL·10g-1，連續(xù)7d。末次給藥 30min 后將各組小鼠尾部負重（2g），放入水深 20cm，水溫(20±0.5)℃的玻璃缸內(nèi)游泳。記錄小鼠從入水到沉入水底不能再游出水面的時間。

1.3.3 正常與荷肝癌小鼠耐缺氧實驗 末次給藥30min后將各組小鼠放入容積為150mL的廣口瓶中，加入20g變色硅膠，塞緊瓶蓋，用凡士林封口后，立即計時，以呼吸停止為指標(biāo)，觀察小鼠存活時間。

1.3.4 艾迪新組方對免疫器官重量的影響 設(shè)艾迪新組方低、中、高三個劑量組，并設(shè)立正常對照組、模型對照組和陽性對照組。末次給藥24h后（禁食10h）：稱小鼠體重，處死動物，測量和計算臟器系數(shù)。胸腺系數(shù)（%）=（胸腺重量 g/小鼠體重 g）×100%；脾臟系數(shù)（%）=（脾臟重量g/小鼠體重 g）×100%。

1.4 統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件分析，計量資料均以x±SEM表示，組間比較采用單因素方差分析和t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 艾迪新組方對正常小鼠和肝癌H22荷瘤小鼠耐疲勞的影響

隨著艾迪新組方給藥劑量的增加，正常小鼠和肝癌荷瘤小鼠的耐疲勞時間均有所延長，其中高劑量組與模型對照組相比具有顯著差異。而5-FU組雖可通過對腫瘤的抑制作用，提高肝癌荷瘤小鼠的耐疲勞時間，但卻明顯縮短了正常小鼠耐疲勞時間（見表1）。

表1 艾迪新組方對正常小鼠和肝癌荷瘤小鼠耐疲勞的影響(±SEM，N=10)

表1 艾迪新組方對正常小鼠和肝癌荷瘤小鼠耐疲勞的影響(±SEM，N=10)

與模型對照組比較：*P＜0.05， **P＜0.01.

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2.2 艾迪新組方對正常小鼠和肝癌H22荷瘤小鼠耐缺氧實驗結(jié)果

艾迪新組方各給藥組正常小鼠和肝癌荷瘤小鼠的耐缺氧時間均有所延長，且呈明顯的劑量依賴性，特別是提高肝癌荷瘤小鼠的耐缺氧能力，其與模型對照組比較均顯著提高。高劑量也可顯著延長正常小鼠的耐缺氧時間。而5-FU卻縮短了正常小鼠的耐缺氧時間（見表2）。

表2 艾迪新組方對正常小鼠和肝癌荷瘤小鼠耐缺氧的影響(±SEM，N=10)

表2 艾迪新組方對正常小鼠和肝癌荷瘤小鼠耐缺氧的影響(±SEM，N=10)

與模型對照組比較：*P＜0.05， **P＜0.01.

組 別 正常鼠（min） 荷H22鼠（min）模型對照組 16.99±0.90 14.20±0.68陽性對照組（5-Fu） 14.51±0.54* 15.58±1.08艾迪新組方低劑量 17.66±1.33 16.07±0.91*艾迪新組方中劑量 18.18±1.04 19.00±0.80**艾迪新組方高劑量 22.37±1.02** 23.00±1.43**

2.3 艾迪新組方對肝癌H22荷瘤小鼠免疫器官的影響

小鼠荷肝癌實體瘤后胸腺系數(shù)明顯減小，而脾臟系數(shù)卻顯著增大。肝癌荷瘤小鼠的脾臟腫大的原因，可能是由于移植性癌腫刺激機體的免疫反應(yīng)，也可能是由于癌細胞雖淋巴轉(zhuǎn)移侵潤脾臟[3]。陽性對照的5-FU組小鼠表現(xiàn)胸腺和脾臟系數(shù)均顯著下降，體現(xiàn)了其對免疫系統(tǒng)的抑制作用。艾迪新組方中小劑量組動物脾臟系數(shù)接近正常對照組，而艾迪新組方高劑量下則可顯著增加肝癌荷瘤小鼠脾臟系數(shù)。艾迪新組方對肝癌荷瘤小鼠的胸腺系數(shù)影響不大。

表3 艾迪新組方對肝癌H22荷瘤小鼠抑瘤率和臟器系數(shù)的影響(±SEM，N=10)

表3 艾迪新組方對肝癌H22荷瘤小鼠抑瘤率和臟器系數(shù)的影響(±SEM，N=10)

與模型對照組比較：*P＜0.05， **P＜0.01；與正常對照組比較：#P＜0.05，##P＜0.01.

組 別 體重(g)（不含瘤）腫瘤重(g)抑瘤率%胸腺系數(shù)%脾臟系數(shù)%正常對照組 23.13±0.67 -- -- 0.246±0.021 0.628±0.022模型對照組 22.67±0.31 1.50±0.23 -- 0.128±0.013##0.838±0.042#陽性對照組（5-FU） 22.60±0.86 0.55±0.08** 63.52 0.066±0.007**## 0.442±0.050**#艾迪新組方低劑量 21.06±0.63 1.02±0.05** 32.06 0.133±0.017##0.665±0.061*艾迪新組方中劑量 21.31±0.65 0.77±0.08** 49.13 0.131±0.017## 0.704±0.055艾迪新組方高劑量 21.20±0.52 0.67±0.11** 55.61 0.127±0.008##0.943±0.071##

2 討論

中醫(yī)認為腫瘤的發(fā)病是由于機體的正氣不足，導(dǎo)致邪毒留聚而成，而疾病的最終轉(zhuǎn)歸由正邪交爭的結(jié)果而定。因此，中醫(yī)治療腫瘤，特別重視正邪之間的關(guān)系處理?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，斑蝥素可通過破壞線粒體膜、下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2水平、上調(diào)凋亡前蛋白Bax等機制促進腫瘤細胞凋亡[4]。人參皂苷對肝癌有一定的治療效果，其機制可能與抑制端粒酶、抑制自噬及誘導(dǎo)凋亡有關(guān)[5]。黃芪皂苷可下調(diào)肝癌細胞中致癌基因的高表達[6]。刺五加皂苷可抑制肝癌細胞DNA合成[7]。此外，人參皂苷、黃芪皂苷和刺五加皂苷除能直接作用于腫瘤細胞抑制其生長外，均具有促進機體免疫功能和通過提高網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能，增強T細胞、NK細胞和IL-II的抗癌話性，增強對腫瘤細胞的殺傷能力的作用[8]。

本研究結(jié)果表明，艾迪注射液新組方可顯著延長正常小鼠和肝癌荷瘤小鼠耐疲勞和耐缺氧時間，高劑量時可明顯增加肝癌H22荷瘤小鼠脾臟系數(shù)，但對胸腺系數(shù)的影響不明顯。

［1］Xu XM,Ge W,Yuan GJ.Effects of Aidi injection on vinorelbine plus cisplatin chemotherapy for advanced non-small cell lung cancer[J].Chinese-German J Clin Oncol,2008,7(10):560.

［2］樓海舟,潘宏銘,金偉,等.艾迪注射液聯(lián)合冷循環(huán)射頻消融術(shù)治療肝癌的研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2007,27(5):393.

［3］Kawaguchi T,Honda T,Nishihara M,Yamamoto T,Yokoyama M.Histological study on side effects and tumor targeting of a block copolymer micelle on rats[J].J Control Release,2009,136(3):240.

［4］Chang C,Zhu YQ,Mei JJ,Liu SQ,Luo J.Involvement of mitochondrial pathway in NCTD-induced cytotoxicity in human hepG2 cells[J].J Exp Clin Cancer Res,2010,29(1):145.

［5］Zheng LH,Bao YL,Wu Y,et al.Cantharidin reverses multidrug resistance of human hepatoma HepG2/ADM cells via down-regulation of P-glycoprotein expression[J].Cancer Lett,2008,272(1):102.

［6］Qi H,Wei L,Han Y,et al.Proteomic characterization of the cellular response to chemopreventive triterpenoid astragaloside IV in human hepatocellular carcinoma cell line HepG2[J].Int J Oncol,2010,36(3):725.

［7］葉紅軍,葉炯賢,房家智.刺五加皂甙對肝癌細胞動力學(xué)的影響[J].中華肝臟病雜志,2000,8(3):134.

［8］Kaskiw MJ,Tassotto ML,et al.Structural analogues of diosgenyl saponins:synthesis and anticancer activity[J].Bioorg Med Chem,2009,17(22):7670.