丁寧，張曜武

(青島科技大學(xué) 化工學(xué)院，山東 青島 266042)

我國(guó)松屬植物分布廣泛，資源豐富，近年來(lái)國(guó)內(nèi)有關(guān)研究多見(jiàn)于東北紅松、馬尾松、華山松等，國(guó)外以日本學(xué)者研究較多，主要涉及白松和五葉松［1］?，F(xiàn)有研究表明松子殼中含有多糖、揮發(fā)油等多種化學(xué)成分［2］，松子殼水提物具有抗腫瘤［3-5］、抗菌［6］、抗病毒［7-8］、增強(qiáng)免疫功能［9］等生物活性，有關(guān)紅松松子殼多糖提取工藝的研究目前報(bào)道尚少。本實(shí)驗(yàn)中以多糖產(chǎn)率為指標(biāo)，采用水煎煮法提取紅松松子殼多糖，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)對(duì)影響多糖產(chǎn)率的主要因素進(jìn)行優(yōu)化，以期為紅松松子殼資源的綜合開(kāi)發(fā)利用提供一定參考。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料與儀器

紅松松子殼，青島天元普康生物技術(shù)有限公司提供;葡萄糖、95%乙醇、苯酚、NaOH、Na2SO3、酒石酸鉀鈉、3，5-二硝基水楊酸、鹽酸均為分析純。

FA1004N 型電子天平;98-I-B 型電子調(diào)溫電熱套;SHZ-III 式循環(huán)水真空泵;80-2B 型臺(tái)式低速離心機(jī);RE-52 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀;T6 新世紀(jì)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

準(zhǔn)確稱取紅松松子殼粉末40 g，置于圓底燒瓶中，加水預(yù)浸后，回流提取，趁熱過(guò)濾，得紅松松子殼多糖提取液。減壓濃縮至30 mL，加入5 倍體積95%乙醇，攪拌后靜置。離心，沉淀物烘干，即得紅松松子殼粗多糖。

1.3 分析方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱定105 ℃干燥至恒重的葡萄糖，溶解后置于100 mL 容量瓶中定容，搖勻，得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精密量取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0，0. 3，0. 4，0. 5，0. 6，0. 7，0. 8，0. 9，1. 0，1.1 mL 置于具塞試管中，加水補(bǔ)至2 mL，精密加入3，5-二硝基水楊酸試液2.5 mL，混勻，在100 ℃水浴中加熱5 min，取出，流水冷卻至室溫。各加水3 mL，搖勻，以蒸餾水為空白，測(cè)定吸光度。得回歸方程A=22.853C－0.232 3，r=0.999 1。

1.3.2 紅松松子殼多糖含量測(cè)定 采用3，5-二硝基水楊酸法測(cè)定多糖含量［10-11］，按下式計(jì)算多糖產(chǎn)率。

2 結(jié)果與討論

2.1 料液比對(duì)多糖產(chǎn)率的影響

提取時(shí)間2. 5 h，料液比對(duì)多糖產(chǎn)率的影響見(jiàn)圖1。

圖1 料液比對(duì)多糖產(chǎn)率影響Fig.1 Effect of the ratio of water to sample on the polysaccharide yield

由圖1 可知，隨著料液比的增加，多糖產(chǎn)率逐漸遞增，當(dāng)料液比為1∶12 時(shí)，多糖產(chǎn)率達(dá)到1.5%，此后再增大料液比，多糖產(chǎn)率增加趨于平緩。

2.2 提取時(shí)間對(duì)多糖產(chǎn)率的影響

料液比1 ∶12，提取時(shí)間對(duì)多糖產(chǎn)率的影響見(jiàn)圖2。

圖2 提取時(shí)間對(duì)多糖產(chǎn)率影響Fig.2 Effect of extraction time on the polysaccharide yield

由圖2 可知，隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，多糖產(chǎn)率逐漸增大，浸提時(shí)間為2 h 時(shí)，多糖產(chǎn)率超過(guò)1.4%;之后隨著浸提時(shí)間的延長(zhǎng)，多糖產(chǎn)率的增加趨于平緩。

2.3 提取次數(shù)對(duì)多糖產(chǎn)率的影響

料液比1∶12，分別提取1 次、2 次、3 次、4 次和5 次，每次提取時(shí)間各2 h，考察不同提取次數(shù)對(duì)多糖產(chǎn)率的影響，結(jié)果見(jiàn)圖3。

由圖3 可知，多糖產(chǎn)率隨提取次數(shù)的增加逐漸增高，提取次數(shù)多于3 次之后，多糖產(chǎn)率增加趨勢(shì)逐漸減緩。由此可知，提取3 次時(shí)已提取出絕大部分多糖。

圖3 提取次數(shù)對(duì)多糖產(chǎn)率影響Fig.3 Effect of extraction times on the polysaccharide yield

2.4 正交實(shí)驗(yàn)

在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，以多糖產(chǎn)率為指標(biāo)，按L9(34)正交表進(jìn)行，正交實(shí)驗(yàn)因素水平見(jiàn)表1，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 因素水平表Table 1 Factors and levels table

表2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 2 Result of orthogonal experiment

由表2 可知，3 個(gè)因素對(duì)紅松松子殼多糖產(chǎn)率影響的主次順序是:料液比＞提取次數(shù)＞提取時(shí)間。最佳工藝條件為A3B2C2，即料液比1 ∶15，每次提取2 h，提取3 次。以所得最佳條件進(jìn)行3 次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，紅松松子殼多糖平均產(chǎn)率為2.9%。

3 結(jié)論

水煎煮法提取紅松松子殼多糖的最佳工藝條件為:料液比1∶15，每次提取2 h，提取3 次。在此條件下，多糖產(chǎn)率為2.9%。該提取方法操作簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性好，生產(chǎn)成本較低，對(duì)于紅松松子殼多糖提取方法的工業(yè)化應(yīng)用具有一定參考價(jià)值。

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