朱琳燕

湖北黃石市中心醫(yī)院腫瘤內(nèi)三科 黃石 435000

神經(jīng)膠質(zhì)瘤占全部顱內(nèi)腫瘤的40%～50%，是來(lái)源于神經(jīng)上皮的一種腫瘤，具有低治愈率、高病死率、高復(fù)發(fā)率及高發(fā)病率特點(diǎn)［1］。神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展與機(jī)體免疫狀態(tài)有關(guān)，機(jī)體免疫監(jiān)視功能減弱及免疫功能低下常相互作用，促進(jìn)神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)生及發(fā)展［2］。其中淋巴細(xì)胞亞群是其最重要的一種指標(biāo)，其腫瘤的惡化程度與各亞群比例變化關(guān)系密切［3］。本文2011-12—2013-08在我院接受診治的神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者65例，采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)膠質(zhì)瘤不同分級(jí)患者的外周血淋巴細(xì)胞亞群及調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞（Treg）的比例進(jìn)行分析，探討與腫瘤惡化程度的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011-12—2013-08在我院接受診治的神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者65例為觀(guān)察組，男42例，女23例；年齡29～80歲，平均（54.8±10.6）歲；根據(jù)膠質(zhì)瘤惡性程度WHO分級(jí)，其中Ⅱ級(jí)～Ⅲ級(jí)作為A組，Ⅳ級(jí)作為B組。A組43例，男32例，女11例；年齡30～78歲，平均（55.1±11.2）歲；B組22例，男10例，女12例；年齡29～80歲，平均（54.2±10.3）歲。所有患者均經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診。選擇同期在我院健康體檢者43例作為對(duì)照組，男23例，女20例；年齡31～75歲，平均（53.9±9.6）歲。

1.2 主要試劑與儀器 美國(guó)Beckman Co uLter FC500流式細(xì)胞儀；試劑主要為CD4＋、CD25＋Treg試劑盒及Sim uL SET IMK Plus試劑盒，均為美國(guó)Beckman Co uLter公司生產(chǎn)。

1.3 淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)及CD4＋CD25＋Treg檢測(cè) （1）淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)：本組所有患者均在清晨空腹取靜脈血2 000μL于乙二胺四乙酸（EDTA-K2）真空抗凝采血管內(nèi)混勻，在室溫條件下保存。取6種不同熒光標(biāo)記抗體各20μL與100μL全血中，并將其混勻，避光孵育25min加入紅細(xì)胞裂解液（Lysing Solution）1 000μL避光孵育12min加入450 μL PBS避光孵育12min，以1 200r／min離心6min，棄去上清，PBS洗滌2次，再加入500UPBS上機(jī)檢測(cè)，記錄CD3＋CD4＋、CD3＋CD8＋、CD4＋／CD8＋陽(yáng)性細(xì)胞百分比。（2）CD4＋CD25＋Treg檢測(cè)：在其中1支管中加入20μL IgG1-FITC、20μL IgG2a-PE，另外1只管中加入20μL CD4-FITC、20μL CD25-PE分別加入100μL全血中，并將其混勻，避光孵育25min加入紅Lysing Solution 1000μL避光孵育12min加入450μL PBS避光孵育12min，以1 200r／min離心12min，棄去上清，PBS洗滌2次，再加入500μL PBS上機(jī)檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 11.0進(jìn)行分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)采用（±s）表示，兩組樣本均數(shù)對(duì)比采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組外周血T淋巴亞群檢測(cè)結(jié)果對(duì)比 觀(guān)察組外周血中CD3＋CD4＋T細(xì)胞百分比較對(duì)照組顯著降低（P＜0.05）；觀(guān)察組外周血中CD3＋CD8＋T細(xì)胞百分比較對(duì)照組升高，但無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；觀(guān)察組外周血中CD4＋／CD8＋比值較對(duì)照組顯著降低（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 2組外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果對(duì)比 （±s，%）

表1 2組外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果對(duì)比 （±s，%）

注：與對(duì)照組比較，＊P＜0.05

組別 n CD3＋CD4＋ CD3＋CD8＋CD4＋／CD8＋觀(guān)察組 65 36.9±4.6＊ 34.1±6.8 0.7±0.2＊對(duì)照組43 41.7±5.9 32.3±7.1 1.3±0.3

2.2 2組外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果對(duì)比 A組外周血中CD3＋CD4＋百分比、CD4＋／CD8＋比值均較B組顯著降低（P＜0.05）；A組外周血中CD3＋CD8＋百分比較B組顯著升高（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 2組外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果對(duì)比 （±s，%）

表2 2組外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果對(duì)比 （±s，%）

注：與B組比較，＊P＜0.05

組別 n CD3＋CD4＋ CD3＋CD8＋CD4＋／CD8＋A組 43 35.1±4.8＊34.6 ±6.9＊ 0.6±0.3＊B組22 40.4±6.9 31.7±6.8 1.2±0.4

2.3 2組T淋巴細(xì)胞與CD4＋CD25＋檢測(cè)結(jié)果對(duì)比 觀(guān)察組CD3＋T淋巴細(xì)胞百分比較對(duì)照組下降，但無(wú)顯著差異（P＞0.05）；觀(guān)察組CD4＋CD25＋Treg百分比較對(duì)照組顯著升高（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 2組T淋巴細(xì)胞與CD4＋CD25＋Treg亞群百分比檢測(cè)結(jié)果對(duì)比 （±s，%）

表3 2組T淋巴細(xì)胞與CD4＋CD25＋Treg亞群百分比檢測(cè)結(jié)果對(duì)比 （±s，%）

注：與對(duì)照組比較，＊P＜0.05

組別 n CD3＋T淋巴細(xì)胞 CD4＋CD25＋Tre g觀(guān)察組 65 63.3±8.3 7.3±2.9＊對(duì)照組43 66.1±8.7 5.6±3.5

2.4 2組T淋巴細(xì)胞與CD4＋CD25＋檢測(cè)結(jié)果對(duì)比 A組CD3＋T淋巴細(xì)胞百分比較B組下降，但無(wú)顯著差異（P＞0.05）；A組CD4＋CD25＋Treg百分比較B組顯著升高（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 2組T淋巴細(xì)胞與CD4＋CD25＋檢測(cè)結(jié)果對(duì)比 （±s，%）

表4 2組T淋巴細(xì)胞與CD4＋CD25＋檢測(cè)結(jié)果對(duì)比 （±s，%）

注：與B組比較，＊P＜0.05

組別 n CD3＋T淋巴細(xì)胞 CD4＋CD25＋Tre g A組 43 63.5±7.6 9.5±4.1＊B組22 64.2±7.9 6.3±3.4

3 討論

神經(jīng)膠質(zhì)瘤是常見(jiàn)的一種神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，該腫瘤占神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性腫瘤一半以上。研究表明，在全年所有新發(fā)腫瘤中，膠質(zhì)瘤占1.4%，其中病死率占所有腫瘤病死患者的2.4%，而患者的生存期與膠質(zhì)瘤級(jí)別呈負(fù)相關(guān)，級(jí)別越高生存期越短。目前，手術(shù)難以將神經(jīng)膠質(zhì)瘤完全切除。同時(shí)膠質(zhì)瘤患者由于增殖活性較高，術(shù)后易復(fù)發(fā)。而神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展與機(jī)體免疫狀態(tài)有關(guān)，抗腫瘤機(jī)體免疫包括細(xì)胞與體液兩大免疫，而在殺傷腫瘤細(xì)胞及控制腫瘤生長(zhǎng)方面，T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫具有重要作用。在神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者發(fā)生及發(fā)展過(guò)程中，細(xì)胞增殖能力降低、T細(xì)胞亞群數(shù)量發(fā)生變化、細(xì)胞毒性降低及免疫功能失衡［4］。本文結(jié)果表明，觀(guān)察組外周血中CD3＋CD4＋T細(xì)胞百分比較對(duì)照組顯著降低，觀(guān)察組外周血中CD3＋CD8＋T細(xì)胞百分比較對(duì)照組升高，觀(guān)察組外周血中CD4＋／CD8＋比值較對(duì)照組顯著降低。A組外周血中CD3＋CD4＋百分比、CD4＋／CD8＋比值均較B組顯著降低，A組外周血中CD3＋CD8＋百分比較B組顯著升高。由此表明，神經(jīng)膠質(zhì)腫瘤患者免疫功能處于抑制狀態(tài)。

Treg細(xì)胞具有防止免疫過(guò)程過(guò)度損傷機(jī)體與維持自身耐受的作用，是具有負(fù)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)的一群淋巴細(xì)胞，同時(shí)也參與腫瘤細(xì)胞逃避監(jiān)視［5］。CD4＋CD25＋T細(xì)胞是天然產(chǎn)生的Treg細(xì)胞，研究表明，CD4＋CD25＋T細(xì)胞主要具有兩大功能，包括免疫抑制和低反應(yīng)性，這些抑制功能的發(fā)揮不是細(xì)胞因子依賴(lài)性抑制，而是接觸式抑制［6］?；罨腃D4＋CD25＋T細(xì)胞能夠使CD4＋與CD8＋的T細(xì)胞表達(dá)IL-2受到抑制；而CD4＋CD25＋T細(xì)胞活化后由于CTLA-4分子表達(dá)增加，從而使得T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)受到影響［7］。本文結(jié)果表明，觀(guān)察組CD4＋CD25＋Treg百分比較對(duì)照組顯著升高（P＜0.05）；A組CD4＋CD25＋Treg百分比較B組顯著升高（P＜0.05）。由此表明，Treg細(xì)胞數(shù)目影響腫瘤的發(fā)生、增長(zhǎng)。綜上所述，Treg細(xì)胞可作為神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者重要檢測(cè)指標(biāo)，有利于對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者惡性程度及療效進(jìn)行判斷。

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