王景濤 李 凌 袁 晶

1）鄭州大學第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 鄭州 450052 2）北京協(xié)和醫(yī)院神經(jīng)科 北京 100730

目前發(fā)現(xiàn)的AD候選基因很多，已經(jīng)公認ApoE基因是唯一與AD關(guān)系較肯定的基因，其余尚存在較大爭議。國內(nèi)研究結(jié)果顯示［1］，ApoEε4在AD患者中出現(xiàn)的頻率為20%～29%，在正常對照中為2%～9.5%，但在中國人ApoEε4等位基因頻率明顯低于白種人中的頻率［2］。

目前國內(nèi)的研究納入的樣本量普遍較小，需要較大樣本量的研究明確我國AD患者ApoE基因分布特征。本研究通過對495例中國北方漢族阿爾茨海默病患者群進行研究，以了解我國AD患者ApoE基因分布特征。

1 研究對象與方法

1.1 樣本來源 病例組樣本來自1999—2010-04北京協(xié)和醫(yī)院認知障礙門診連續(xù)就診的AD患者，知情同意抽血行ApoE基因型測定。AD患者符合NINCDS-ADRDA制定的很可能及確診的AD診斷標準及排除標準［3］和（或）2007年修訂的NINCDS-ADRDA診斷及排除標準［4］。所有研究對象在認知障礙門診須完成詳細的臨床資料評估和認知功能測評，完成頭顱CT或頭顱海馬像檢查，對于診斷困難的患者，進一步行腰穿和頭顱FDG-PET-CT檢查，完成腦脊液β淀粉樣蛋白和Tau蛋白的檢查。認知功能測試量表包括簡易精神狀態(tài)評分（MMSE）、物體記憶測驗（FOM）、語言流暢性測驗（RVR）、WISC積木測驗、WAIS數(shù)字廣度測驗、Hachinski缺血量表（Hachinski ischemic score，HIS）評分、漢密爾頓抑郁量表評分、日常生活能力量表（ADL）等。

1.2 DNA提取 抽取研究對象晨空腹血4～5mL，加入EDTA抗凝管內(nèi)，應(yīng)用飽和鹽沉淀-氯仿抽提法提取DNA。并應(yīng)用分光光度計測定DNA濃度。

1.3 ApoE基因型測定 應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性分析法［5］測定ApoE基因型。本課題所用試劑和儀器的廠家、測定詳細步驟和ApoE的電泳圖見課題組相關(guān)論文［6］。

1.4 統(tǒng)計學處理 等位基因頻率和基因型頻率采用基因計數(shù)法，應(yīng)用擬合優(yōu)度χ2檢驗探討ApoE基因型是否符合Hardy-Weinberg平衡。

2 結(jié)果

2.1 研究對象的一般情況 本研究共入組AD患者495例，其中男219例（44.19%），平均年齡（73.30±7.54）歲；EOAD平均發(fā)病年齡（57.8±5.3）歲，LOAD平均發(fā)病年齡（74.2±6.2）歲；受教育程度：＜7a168例（34.02%），7～12 a135例（27.18%），≥13a192例（38.80%）；有癡呆家族史110例（22.22%）。

2.2 不同癡呆組和對照組ApoE基因型Hardy-Weinberg平衡 擬合優(yōu)度χ2檢驗結(jié)果顯示，AD組ApoE基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。

2.3 AD患者ApoE等位基因和基因型分布 EOAD與LOAD比較：無論是3個等位基因，還是5個基因型，2組均無顯著性差異（P＞0.05）。有癡呆家族史患者和無癡呆家族史患者比較，有癡呆家族史患者僅含1個ε2等位基因，ε2等位基因頻率和ε2／4基因型頻率顯著低于無癡呆家族史患者（P＜0.0001）；而ε3和ε4等位基因頻率和ε3／3、ε3／4、ε4／4基因型頻率均無顯著差異（均為P＞0.05）。男性患者和女性患者比較：男女患者3種等位基因頻率無顯著差異（均P＞0.05），男性ε3／3頻率顯著高于女性（χ2＝7.233，P＝0.007）；女性ε3／4頻率顯著高于男性（χ2＝7.950，P＝0.005）；其余基因型均無顯著性差異（P＞0.05）。見表1。

表1 不同AD患者ApoE等位基因和基因型分布 ［n（%）］

3 討論

在AD易感基因的研究方面，科學家們關(guān)注的最多是ApoE。ε4被認為是AD的危險因素，可影響家族性AD發(fā)病的時間，也是散發(fā)型AD最主要的致病因素［7］。在Meta分析中，ε4的純合子與ε3的純合子優(yōu)勢比（OR）值在各個人種均＞10。Corder等發(fā)現(xiàn)1個APOEε4拷貝就可以把阿爾茨海默病的發(fā)病時間提前7～9a。與ε4的作用相反，ε2可減少阿爾茨海默病的發(fā)生［8］。

本研究結(jié)果顯示，我國北方漢族AD患者ε2、ε3、ε4等位基因頻率分別為4.85%、70.51%、24.64%；基因型頻率分別為ε2／3（5.86%）、ε2／4（3.84%）、ε3／3（50.50%）、ε3／4（34.14%）、ε4／4（5.66%）。為了明確我國漢族人群AD患者ApoE基因的分布與國外人群的差異，將本研究與各洲不同國家的研究結(jié)果進行比較發(fā)現(xiàn)，挪威、英國、智利等國AD患者ε3頻率（分別為53.1%，57.5%和52.0%）較本研究低［9-11］，而ε4頻率較本研究高（分別為39.6%、39.1%和40.0%）；而日本和伊朗AD患者的ε3頻率（分別為67.0%、78.1%）和ε4頻率（分別為31.0%、21.0%）與本研究比較無顯著差異［12-13］。以上結(jié)果提示我國AD患者ApoE基因分布與亞洲國家相似，與歐美國家有較大差別。

對AD患者的進一步分析發(fā)現(xiàn)，EOAD和LOAD無論是3個等位基因的分布還是5種基因型的分布均無顯著性差異；在110例具有癡呆家族史AD患者中僅1例攜帶ε2等位基因，ε2等位基因頻率和ε2／4基因型頻率顯著降低；而ε3和ε4等位基因頻率和ε3／3、ε3／4、ε4／4基因型頻率均無顯著差異。研究［14］顯示，具有癡呆家族史的人群中ε4攜帶者的比例較無癡呆家族史者高，而ε2攜帶者的比例則較無癡呆家族史者低。在具有癡呆家族史人群中，只有ε4攜帶者的AD風險才明顯增高。這提示癡呆家族史和ε4等位基因在AD發(fā)病風險中的協(xié)同作用。本研究僅觀察到該人群ε2頻率和ε2（＋）基因型頻率的降低，并未觀察到ε4頻率和ε4（＋）基因型頻率的增高，可能與種族不同有關(guān)。

根據(jù)性別分層后發(fā)現(xiàn)，男女患者3種等位基因頻率無顯著差異；男性ε3／3頻率顯著高于女性（57.21%vs 45.05%），而女性ε3／4頻率則顯著高于男性（39.56%vs 27.48%，）；其余基因型均無顯著性差異。已經(jīng)有研究發(fā)，現(xiàn)AD患者不同性別之間ApoE分布的不同。在美國高加索AD患者中，女性ε3／4頻率為64%，而男性則為44%，存在較大差異，ε4＋／-型女性患AD的風險（OR＝3.71，95%CI 1.74～7.9）顯著高于男性（OR＝1.36，95%CI 0.54～3.46）［15］。另一項針對高加索人群AD患者的研究和對日本AD患者的研究均發(fā)現(xiàn)了類似結(jié)果［16］。

由此可見，我國AD患者ApoE基因分布與亞洲國家類似，而與歐美國家有較大差別，這可能與人種不同有關(guān)。我國ApoE基因頻率在不同性別和不同癡呆家族史患者之間存在差異，可能導致不同性別和有無癡呆家族史之間AD發(fā)病風險的差別。

［1］吳亞寧，張俊武，張振馨.中國人群中載脂蛋白E等位基因型與阿爾茨海默病的相關(guān)性分析［J］.中國醫(yī)學科學院學報，2001，23（5）：450-454.

［2］Saunders AM，Hulette O，Welsh-Bohmer KA，et al.Specificity，sensitivity，and predictive value of apolipoprotein-E genotyping for sporadic Alzheimer＇s disease［J］.Lancet，1996.348（9020）：90-93.

［3］McKhann G，Drachman D，F(xiàn)olstein M，et al.Clinical diagnosis of Alzheimer＇s disease：report of the NINCDS-ADRDA Work Group under the auspices of Department of Health and Human Services Task Force on Alzheimer＇s Disease［J］.Neurol，1984，34（7）：939-944

［4］Dubois B，F(xiàn)eldman HH，Jacova C，et al.Research criteria for the diagnosis of Alzheimer＇s disease：revising the NINCDSADRDA criteria［J］.Lancet Neurol，2007，6（8）：734-746.

［5］Hixson JE，Vernier DT.Restriction isotyping of human apolipoprotein E by gene amplification and cleavage with HhaI［J］.J Lipid Res，1990，31（3）：545-548.

［6］郭峰，張振馨，許群，等.載脂蛋白Eε2和ε4等位基因與胎兒宮內(nèi)發(fā)育的關(guān)系［J］.中華神經(jīng)科雜志，2008，41（12）：835-839.

［7］Munoz DG，F(xiàn)eldman H.Causes of Alzheimer＇s disease［J］.CMAJ，2000，162（1）：65-72.

［8］Corder EH，Saunders AM，Strittmatter WJ，et al.Gene dose of apolipoprotein E type 4allele and the risk of Alzheimer＇s disease in late onset families［J］.Science，1993，261（5123）：921-923.

［9］Davidson Y，Gibbons L，Pritchard A，et al.Apolipoprotein E epsilon4allele frequency and age at onset of Alzheimer＇s disease［J］.Dement Geriatr Cogn Disord，2007，23（1）：60-66.

［10］Quiroga P，Calvo C，Albala C，et al.Apolipoprotein E polymorphism in elderly Chilean people with Alzheimer＇s disease［J］.Neuroepidemiology，1999，18（1）：48-52.

［11］Henderson AS，Easteal S，Jorm AF，et al.Apolipoprotein E allele epsilon 4，dementia，and cognitive decline in a population sample［J］.Lancet，1995，346（8987）：1 387-1390.

［12］Nunomura A，Chiba S，Eto M，et al.Apolipoprotein E polymorphism and susceptibility to early-and late-onset sporadic Alzheimer＇s disease in Hokkaido，the northern part of Japan［J］.Neurosci Lett，1996，206（1）：17-20.

［13］Raygani AV，Zahrai M，Raygani AV，et al.Association between apolipoprotein E polymorphism and Alzheimer disease in Tehran，Iran［J］.Neurosci Lett，2005，375（1）：1-6.

［14］Huang W，Qiu C，von Strauss E，et al.APOE genotype，family history of dementia，and Alzheimer disease risk：a 6-year follow-up study［J］.Arch Neurol，2004，61（12）：1 930-1 934.

［15］Payami H，Zareparsi S，Montee KR，et al.Gender difference in apolipoprotein E-associated risk for familial Alzheimer disease：apossible clue to the higher incidence of Alzheimer disease in women［J］.Am J Hum Genet，1996，58（4）：803-811.

［16］Poirier J，Davignon J，Bouthillier D，et al.Apolipoprotein E polymorphism and Alzheimer＇s disease［J］.Lancet，1993，342（8873）：697-699.