周慶杰, 于道德, 高天翔, 官曙光

(1.中國海洋大學(xué) 水產(chǎn)學(xué)院, 山東 青島 266071; 2.山東省海洋生物研究院, 山東 青島 266002)

七帶石斑魚(Epinephelus septemfasciatus) 隸屬鱸形目(Perciformes), 鮨科(Serranidae), 石斑魚屬(Epinephelus), 是該屬中大型的石斑魚類。該魚為暖溫性礁棲魚類, 主要分布于日本、韓國、中國的黃海和東海沿岸的淺水區(qū)域, 是石斑魚在黃海唯一分布的魚種[1], 因其能夠耐受 7~8℃的低溫冷水, 又稱為“冷水石斑”[2]。七帶石斑魚具有生長快、耐低溫、適應(yīng)能力強(qiáng)、營養(yǎng)物質(zhì)豐富、肉質(zhì)鮮美等優(yōu)點(diǎn), 是石斑魚屬中唯一可以在較低溫下生活、適合在北方養(yǎng)殖的, 如今已成為中、日、韓三國海水魚類繁育研究的熱點(diǎn), 具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和市場潛力。

目前, 七帶石斑魚的繁殖生物學(xué)[1,3-6]、人工育苗[7-,8]、病害研究[9-11]、肌肉成分分析[12]、染色體核型[13]等研究雖然已有報(bào)道, 國內(nèi)七帶石斑魚的人工繁殖和育苗仍處于試驗(yàn)階段, 繁育技術(shù)尚未成熟, 使七帶石斑魚規(guī)?；B(yǎng)殖受到制約。作者詳細(xì)描述了七帶石斑魚胚胎發(fā)育及仔、稚、幼魚的形態(tài)變化特征, 提供了七帶石斑魚生物學(xué)資料, 為大規(guī)模開展七帶石斑魚工廠化苗種生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 受精卵孵化

實(shí)驗(yàn)于2012年2~8月在煙臺百佳水產(chǎn)有限公司進(jìn)行, 試驗(yàn)親魚從韓國購進(jìn), 2012年2月選擇30尾5~7 齡親魚進(jìn)行培育。采用激素肌肉注射催產(chǎn), 雌魚混合催產(chǎn)注射量為絨毛膜促性腺激素(HCG)700IU/kg體質(zhì)量, 促黃體素釋放激素(LRH-A3)6μg /kg體質(zhì)量。雄魚注射量為HCG200單位/kg。注射催產(chǎn)激素后 72 h, 將雌魚用特制擔(dān)架小心撈起, 蓋住魚眼, 請按魚腹, 讓卵子自然流入燒杯。雄魚操作大致同雌魚, 用 1.5 mL吸管吸取精液后, 加入適量的海水激活, 然后加入到盛有魚卵的燒杯中授精, 攪拌使精卵均勻, 充分受精。將獲得的受精卵在水溫23.5℃±0.5℃、鹽度 31、pH7.9~8.2、溶氧量 6~8mg/L、光照強(qiáng)度1 500 ~2 000 lx、連續(xù)微充氣, 流水孵化。

1.2 胚胎發(fā)育觀察

胚胎發(fā)育期間, 定時(shí)從孵化箱中取樣, 在Olympus sz61解剖鏡下進(jìn)行胚胎發(fā)育的觀察測量,詳細(xì)記錄發(fā)育時(shí)間及各個(gè)發(fā)育時(shí)期的主要形態(tài)特征,并用數(shù)碼相機(jī)對各個(gè)發(fā)育時(shí)期拍照。以 50%的受精卵孵出仔魚作為胚胎發(fā)育結(jié)束的標(biāo)志。

1.3 苗種培育及觀察

育苗池為 4 m×4 m×1.5 m 的方形室內(nèi)水泥池,苗種培育期間的水溫變化范圍為 24~26 ℃, 鹽度28。以長牡蠣(Crassostrea gigas)受精卵及其幼體為仔魚的開口餌料; 隨著仔魚的不斷長大, 所用餌料依次過渡為S型輪蟲(Brachionus)、L型輪蟲、鹵蟲(Artemia salina)無節(jié)幼體、魚肉糜、配合飼料。培育期間根據(jù)水色和水質(zhì)的變化情況適時(shí)適量添加小球藻(Chlorella)及潔凈海水。自布池開始, 仔魚期連續(xù)每天取樣, 稚、幼魚期每隔3~5 d取樣, 每次取樣20尾, 用Olympus sz61解剖鏡和Nikon TS100顯微鏡進(jìn)行觀察, 詳細(xì)記錄描述其形態(tài)特征, 并用數(shù)碼相機(jī)拍照。

2 結(jié)果與分析

2.1 胚胎發(fā)育

七帶石斑魚受精卵呈圓球形, 無色、透明, 彼此分離, 卵徑為(0.854±0.021)mm(n＝30), 油球直徑為(0.181±0.006)mm(n＝30)。受精卵為端黃卵, 胚盤形成于動物極, 在相對靜止的狀態(tài)下, 鹽度31時(shí)上浮,動物極朝下, 植物極朝上。在水溫(23.5±0.5)℃、鹽度31的海水中孵化, 歷時(shí)31 h5 min, 50%以上受精卵孵出仔魚, 胚胎發(fā)育過程完成。與其他石斑魚屬石斑魚一樣, 七帶石斑魚的胚胎發(fā)育可分為 5個(gè)階段,即: 卵裂期、囊胚期、原腸胚期、神經(jīng)胚期和器官形成期。胚胎發(fā)育過程及特征見表1。

2.1.1 卵裂期

七帶石斑魚的卵裂方式屬于盤狀卵裂。受精后15 min, 卵裂開始發(fā)生, 卵裂僅發(fā)生在動物極所在的半球; 受精后2 h20 min, 經(jīng)過6次細(xì)胞分裂(圖1-1~圖1-6)進(jìn)入 64細(xì)胞期(圖1-7), 細(xì)胞排列不規(guī)則, 且細(xì)胞形狀和大小也不盡相同, 分裂面紊亂不清, 細(xì)胞層開始出現(xiàn)重疊現(xiàn)象(圖1-7); 在受精后2 h50 min,細(xì)胞變小變多, 進(jìn)入多細(xì)胞期(圖1-8); 在受精后4 h 15 min, 細(xì)胞變得更小, 不可計(jì)數(shù), 整個(gè)細(xì)胞團(tuán)呈圓形, 狀如桑葚, 進(jìn)入桑葚期(圖1-9)。

2.1.2 囊胚期

5 h 30 min左右, 隨著卵裂繼續(xù)進(jìn)行, 細(xì)胞數(shù)目與細(xì)胞層次不斷增加, 胚盤與卵黃之間形成囊胚腔,囊胚中部向上隆起, 胚胎進(jìn)入高囊胚期(圖1-10); 此后, 囊胚隆起部分逐漸變低, 6 h 30 min囊胚隆起變得最低, 胚盤逐漸扁平, 細(xì)胞開始下包, 進(jìn)入低囊胚期(圖1-11)。

表1 七帶石斑魚胚胎發(fā)育過程Tab.1 Embryonic development of E.septemfasciatus

2.1.3 原腸胚期

在囊胚期之后, 根據(jù)卵黃被胚層下包的程度,胚胎依次經(jīng)歷原腸早期(圖1-12)、原腸中期(圖1-13)、原腸晚期(圖1-14)。

2.1.4 神經(jīng)胚期

受精后12 h 45 min胚體背面增厚, 形成神經(jīng)板,中央隱約可見一條圓柱形脊索, 胚體輪廓清晰, 進(jìn)入胚體形成期(圖1-15)。

2.1.5 器官形成期

受精后14 h 35 min胚體頭部兩側(cè)出現(xiàn)1對視囊,進(jìn)入視囊形成期(圖1-16); 受精后15 h15 min脊索兩側(cè)出現(xiàn)長方形的體節(jié), 胚體進(jìn)入肌節(jié)出現(xiàn)期, 視囊輪廓變得更加清晰(圖1-17); 受精后15 h45 min在胚體頭部視囊靠后的位置出現(xiàn)1對聽泡, 肌節(jié)數(shù)增多,胚體進(jìn)入聽囊形成期(圖1-18); 受精后17 h 35 min胚體背面的視囊之間出現(xiàn)橢圓形板狀腦泡, 腦泡尚未分室, 胚體進(jìn)入腦泡形成期(圖1-19); 受精后21 h 25 min胚體背腹兩處逐漸形成鰭褶, 尾部有少部分與卵黃囊分離, 尾鰭褶可見, 胚體進(jìn)入尾芽期(圖1-20); 受精后23 h15 min胚體開始間歇抽動, 視囊

內(nèi)可見折光性強(qiáng)的晶體(圖1-21); 受精后26 h15min心臟開始微弱跳動, 胚體進(jìn)入心跳器(圖1-22); 受精后30 h30 min胚體的扭動更頻繁有力, 進(jìn)入出膜前期(圖1-23); 受精后30 h45 min進(jìn)入出膜期, 胚體頭部先頂破卵膜, 然后尾部用力擺動, 脫去卵膜。

圖1 七帶石斑魚胚胎發(fā)育Fig.1 Embryonic development of E.septemfasciatus

2.2 仔稚幼魚形態(tài)發(fā)育特征

七帶石斑魚仔稚魚各期的發(fā)育和形態(tài)特征如圖2所示。

2.2.1 仔魚期

初孵仔魚 全長 1.99 mm±0.041 mm, 卵黃囊呈橢球形, 長徑 0.92 mm±0.012mm, 短徑 0.55 mm±0.014mm。油球 1個(gè), 圓球形, 油球直徑 0.18 mm±0.012mm, 大部分仔魚油球位于卵黃囊后端, 一部分仔魚的油球位于卵黃囊下端, 極少數(shù)仔魚的油球位于卵黃囊前端。剛孵出的仔魚, 魚體透明, 脊索略有彎曲, 肌節(jié) 22~24對, 肛前肌節(jié) 8~9對, 肛后肌節(jié)14~15對。頭部上方, 背腹部, 尾部有無色透明的鰭膜連成一體。肛門稍離開卵黃囊, 位于體中央偏后,尚未開口于體外。孵化后5h的仔魚, 消化管后方背面出現(xiàn)黑色素細(xì)胞, 魚體靠近尾部出現(xiàn)兩個(gè)上下對稱的黑色素細(xì)胞。初孵仔魚腹部朝上, 懸浮于水中,游泳能力較弱, 尾部偶爾快速扭動。

圖2 七帶石斑魚仔、稚、幼魚Fig.2 Larva, juvenile, and young fish of E.septemfasciatus

1日齡仔魚 全長2.48 mm±0.030mm, 卵黃囊長徑 0.70 mm±0.010 mm, 短徑 0.24 mm±0.012 mm。油球1個(gè), 圓球形, 油球直徑0.14 mm±0.012 mm, 卵黃囊與油球逐漸縮小。脊索稍伸直, 頭部增大, 大部分仔魚頭部已脫離卵黃囊并抬起。消化道開始膨大, 肛門位置略前移, 位于魚體中央, 輸尿管細(xì)小透明, 后端膨大為膀胱。仔魚眼部晶體透明, 可清楚看到耳囊,耳囊內(nèi)有 2個(gè)耳石, 很小, 前后排列。肌節(jié)呈“V”字形, 23~25對。油球邊緣出現(xiàn)一圈黑色素, 卵黃囊前端和眼后方出現(xiàn)星狀黑色素, 仔魚背部也新出現(xiàn)黑色素細(xì)胞。仔魚游泳能力增強(qiáng)。

2日齡仔魚 全長2.41 mm±0.024 mm, 卵黃囊長徑 0.29 mm±0.021 mm, 短徑 0.16 mm±0.014 mm。油球直徑0.09 mm±0.024 mm, 卵黃囊與油球進(jìn)一步被吸收, 部分仔魚卵黃囊明顯萎縮。口裂已經(jīng)形成, 但口不能活動, 未開口。消化管變粗, 前端膨大形成胃,肛門開口于體外。仍然存在卵黃囊的仔魚, 卵黃囊前端的黑色素顏色加深, 肛門與尾中央脊索上方的黑色素呈輻射狀擴(kuò)散生長; 卵黃囊明顯萎縮的仔魚,眼囊出現(xiàn)黑色素, 部分仔魚眼囊已布滿黑色素。

3日齡仔魚 全長2.64 mm±0.082 mm, 卵黃囊與油球全部消失或只剩下殘余的油球。胸鰭出現(xiàn), 長0.38 mm。尾基部的鰭膜開始向內(nèi)凹陷。耳囊明顯增大。仔魚上頜短, 下頜長。消化道膨大變粗蠕動有力,腸道形成第一個(gè)腸曲。眼囊黑色素顏色加深, 部分仔魚眼囊出現(xiàn)虹彩色素。消化道及其上方的體側(cè)原有的黑色素向腹部下方擴(kuò)散生長。背部和脊索上方的黑色素消失, 在肛門與尾端之間中央處的黑色素向脊索方向擴(kuò)散生長。仔魚開始由外源營養(yǎng)轉(zhuǎn)換為內(nèi)源營養(yǎng)。

4~5日齡仔魚 全長2.69 mm±0.068 mm, 卵黃囊與油球完全被吸收。仔魚口裂增大, 張合頻率高, 在水中活力增強(qiáng), 反應(yīng)靈敏。在消化道進(jìn)一步膨大, 可觀察到大量的牡蠣 D形幼蟲存在其中。心臟一心房一心室, 收縮有力。肛門與尾端中央處的黑色素更加密集, 眼囊中虹彩色素加深。仔魚基本以外源營養(yǎng)為主。

6日齡仔魚 全長2.74 mm±0.072 mm。消化道加粗, 攝食能力增強(qiáng), 消化道中最多發(fā)現(xiàn)20個(gè)D形幼蟲, 消化系統(tǒng)逐漸完善, 消化道前端的 D形幼蟲呈黃色, 而 D形幼蟲進(jìn)入消化道后端時(shí)變得透明, 說明D形幼蟲殼內(nèi)的物質(zhì)已經(jīng)被消化吸收。鰓蓋骨輪廓明顯, 耳囊內(nèi)耳石清晰可見。腹部色素加深, 脊索瓦狀分節(jié)。尾椎下方鰭膜可見輻射狀的鰭條絲。

7日齡仔魚 全長2.74 mm±0.052 mm。尾部上方鰭膜也出現(xiàn)輻射狀鰭條絲。消化道上方的樹枝狀黑色素增密, 肛門與尾端中央的黑色素?cái)U(kuò)散至脊索中央。尾部脊索下方出現(xiàn)數(shù)條長枝狀黑色素。在顯微鏡下可清楚的分辨出動脈和靜脈。D形幼蟲可順利的經(jīng)肛門排出。

8日齡仔魚 全長2.76 mm±0.096 mm。背鰭膜變窄變平并出現(xiàn)第二背棘原基, 但未超出鰭膜。尾鰭膜輻射狀鰭條絲更加明顯。消化系統(tǒng)發(fā)育更加完善, 消化道前部逐漸變得不透明, 看不清攝食的D形幼蟲,幽門盲囊可見。背部鰭膜中新增一處向外輻射生長的點(diǎn)狀黑色素, 個(gè)別仔魚此處有兩個(gè)點(diǎn)狀黑色素。

9日齡仔魚 全長3.08 mm±0.088 mm。第二背鰭棘超出鰭膜, 長0.13 mm。鰓蓋骨明顯, 頭部各器官逐漸發(fā)育完善。心臟清晰可見。消化系統(tǒng)發(fā)達(dá), 幽門盲囊清晰可見, 經(jīng)解剖發(fā)現(xiàn)仔魚已經(jīng)攝食輪蟲。尾鰭發(fā)達(dá), 擺動有力, 攝食能力強(qiáng), 尾鰭后緣也出現(xiàn)長枝狀的黑色素。

10日齡仔魚 全長3.47 mm±0.094 mm。仔魚生長差異顯著, 大小不均, 較大的仔魚胸鰭發(fā)達(dá), 尾鰭擺動有力, 反應(yīng)迅速, 已能平游, 仔魚在光線亮的地方容易集群。腹部黑色素覆蓋面積增大, 幾乎將整個(gè)腹部遮住。背部的點(diǎn)狀黑色素繼續(xù)向外生長。尾部下方的長枝狀黑色素延長, 數(shù)量增多。

11日齡仔魚 全長3.73 mm±0.098 mm。魚體各組織器官發(fā)育迅速。下頜明顯長于上頜, 胃腸蠕動有力, 心跳明顯, 耳囊清晰可見。腹鰭棘長出, 長0.31mm, 腹鰭棘明顯長于背鰭棘, 長棘的出現(xiàn)是石斑魚屬魚類仔魚發(fā)育所特有的。肛門與尾端中央的黑色素明顯增多, 俯瞰魚體幾乎環(huán)抱此處整個(gè)肌體。

12日齡仔魚 全長3.74 mm±0.086 mm。背、腹鰭棘增長, 腹鰭棘末端已超過肛門, 腹鰭棘明顯長于背鰭棘, 長棘末端黑色素細(xì)胞增多, 腹部出現(xiàn)黃色素, 肛門與尾端中央的黑色素叢下方也出現(xiàn) 5~6條長枝狀黑色素。尾鰭輻射狀鰭條絲明顯。

13日齡仔魚 全長4.08 mm±0.074 mm。仔魚生長差異顯著, 最小個(gè)體全長只有2.90 mm, 最大的個(gè)體全長6.50 mm。鰓蓋骨明顯, 隱 約可見 鰓 絲。腹部點(diǎn)狀黃色素細(xì)胞數(shù)量增多, 背腹長棘繼續(xù)伸長, 長棘中部也開始出現(xiàn)少量的黑色素, 腹鰭棘前緣出現(xiàn)2列鋸齒狀的小棘, 背鰭長棘頂端出現(xiàn)一個(gè)無色透明的刺。頭部上方及背鰭長棘前后的鰭膜明顯變窄變平。仔魚活動能力增強(qiáng)。

14日齡仔魚 全長4.32 mm±0.462 mm。頭部各組織發(fā)育逐漸完善, 耳囊內(nèi)2個(gè)耳石前后排列, 前者小后者大。背、腹鰭長棘明顯增長, 長棘上黑色素分布不均勻, 末端較密, 基部黑色素較少。長棘都長出數(shù)列鋸齒狀小棘并出現(xiàn)點(diǎn)狀黃色素。第一背鰭棘長出, 長0.11 mm, 第二背鰭棘基部下方出現(xiàn)一叢黑色素細(xì)胞。腹部出現(xiàn)虹彩色素, 尾端下方的長枝狀黑色素延長, 數(shù)量增加。

15日齡仔魚 全長 4.44 mm±0.531mm。俯視仔魚, 上頜中央有一明顯向內(nèi)凹入的缺刻, 長度短于下頜, 上頜齒隱約可見。鰓絲清晰可見略顯紅色。背、腹長棘繼續(xù)增長, 末端稍膨大, 黑色素密集, 靠近基部處黑色素稀疏, 可見單個(gè)的樹枝狀黑色素, 長棘中下部點(diǎn)狀黑色素增多。腹部叢狀黑色素逐漸分散開, 黃色素加深, 已看不清消化道。背部向外輻射生長的點(diǎn)狀黑色素消失, 仔魚游動靈敏, 受到驚嚇后三叉棘會迅速張開。

16日齡仔魚 全長5.30 mm±0.681 mm。上頜與下頜長度差異不大。背鰭棘長度已超過全長 1/2, 背腹鰭膜繼續(xù)縮小, 尾鰭與背鰭之間和尾鰭與臀鰭之間的鰭膜逐漸向內(nèi)凹陷。背鰭長棘有 3列鋸齒狀的小棘, 前緣1列, 后緣2列; 腹鰭棘有4列小棘, 前緣2列, 后緣2列。第三背鰭棘超出鰭膜。仔魚攝食能力明顯增強(qiáng)。

17日齡仔魚 全長5.78 mm±0.642 mm。仔魚頭部顏色加深, 心臟逐漸被發(fā)育的鰓蓋骨遮蓋, 只隱約可見。上頜上方出現(xiàn)黑色素, 腹部的黑色素開始消退, 只有消化道上方的黑色素較密集, 點(diǎn)狀黃色素和藍(lán)色素增多。鰾充氣, 從魚體側(cè)面觀察在貼近脊柱的下方有一小亮圈, 呈橢圓形。

18日齡仔魚 全長6.19 mm±0.724 mm。頭部黑色素增多, 出現(xiàn)少量虹彩色素, 只能隱約看到耳囊的輪廓。上頜齒清晰可見, 10顆, 透明, 排列稀疏。鰓蓋上出現(xiàn)2枚棘。腹部下半部分黑色素已消退, 黃色素顏色加深, 鰾泡已不可見。肌節(jié)呈“V”形, 21對。尾部脊索末端上翹, 部分尾鰭鰭條出現(xiàn)。

19日齡仔魚 全長6.62 mm±0.874 mm。頭部黑色素加深, 眼上方出現(xiàn) 1枚棘, 明顯看出鰓絲呈紅色。背、腹鰭長棘繼續(xù)增長, 第二背鰭棘已超過全長的2/3, 腹鰭接近全長的1/2, 第一背鰭棘后緣出現(xiàn)鋸齒狀小棘。尾鰭下方的長枝狀黑色素逐漸消褪。

20日齡仔魚 全長6.74 mm±0.883 mm。腹部黑色素減少, 虹彩色素增多。第二背棘基部下方黑色素增多。尾部鰭膜與背部、腹部鰭膜分開形成尾柄, 背鰭、臀鰭逐漸發(fā)育, 尾鰭鰭條數(shù)量增加, 脊索末端上翹, 尾下骨增大并連成片狀, 中央向內(nèi)凹陷。肌節(jié)呈“W”型, 22對。

21~25日齡仔魚 全長7.65 mm±1.120 mm。隨著魚體的生長, 頭部發(fā)育更加完善, 透光性差, 頭部黑色素加深, 上頜齒仍為 10顆, 大小沒有明顯增大,下頜無齒, 長度與上頜相當(dāng)。眼徑增大, 眼囊充滿藍(lán)色素。眼眶上方出現(xiàn)一棘, 主鰓蓋骨耳囊后方位置向后長出一短棘, 前鰓蓋骨出現(xiàn) 3枚棘, 其外側(cè) 2枚,另有一枚向下的短棘。鰓絲紅色加深。消化道下部的樹枝狀黑色素基本消褪, 取而代之的是黃色素和虹彩色素, 肛門與尾中央仍有一叢黑色素。背腹鰭長棘繼續(xù)增長, 略有彎曲, 第二背棘長度超過全長的3/4, 腹鰭棘長達(dá)到全長的 1/2, 各鰭鰭條清晰可見,尾柄末端尾骨分上下兩部分, 中央凹入, 鰭條數(shù)為17。背腹鰭長棘的末端黑色素顏色深, 越靠近基部顏色越淺。第二背鰭棘前緣鋸齒狀小棘的數(shù)量多于后緣, 腹鰭棘前、后緣小棘的數(shù)量相差不大。

26~30日齡仔魚 全長7.98 mm±1.461 mm。頭部各器官逐漸發(fā)育完, 頭部上方顱骨部位和耳囊后方出現(xiàn)幾點(diǎn)星狀的黑色素。鰭膜已基本消失, 只在尾柄的上下殘留很窄的一點(diǎn), 各鰭鰭棘和鰭條逐漸明顯,第一背鰭出現(xiàn)10根鰭棘, 其中 6根超出鰭膜, 第三背鰭棘明顯長于第一背鰭棘, 第二背鰭出現(xiàn)14根鰭條; 腹鰭1根棘4根鰭條; 臀鰭形成, 可見3根棘9根鰭條; 尾鰭鰭條更加明顯, 鰭條分6節(jié)。尾端下方的長枝狀黑色素全部消失。全長9.6 mm的仔魚, 背、腹鰭長棘的長度分別為7.8、5.3 mm, 達(dá)到3根長棘絕對長度的最大值, 隨著魚體的生長發(fā)育, 背、腹鰭長棘開始逐漸被吸收, 仔魚進(jìn)入稚魚去期。背、腹鰭長棘上的黑色素開始由基部向末端逐漸消褪, 第二背棘后緣小棘明顯比前緣小棘大。肝門與尾鰭之間腹緣的樹枝狀黑色素后移至尾柄處。骨骼和肌肉系統(tǒng)發(fā)育增快, 軀體明顯變寬, 脊椎骨明顯, 尾椎下方出現(xiàn)紅色的血管。肝臟與膽囊已形成。

2.2.2 稚魚期

31~40日齡稚魚 全長16.1 mm±1.862 mm。進(jìn)入稚魚期后, 魚體生長速度明顯變快, 大小差異顯著,稚魚骨骼和肌肉系統(tǒng)快速發(fā)育, 眼眶上方和鰓蓋骨上的小棘消失, 顱骨上方的黑色素增多連成片狀并開始大量集中。消化道上部的樹枝狀黑色素逐漸消褪, 只覆蓋其 1/3, 腹部肌肉增厚, 隨著生長腹部開始呈銀白色反光, 攝食鹵蟲無節(jié)幼體后腹部明顯膨脹, 呈現(xiàn)紅棕色。背、腹鰭長棘繼續(xù)收縮至已接近全長 1/4, 長棘基部只剩少量黑色素, 末端黑色素仍較密集。尾鰭棘9根, 鰭條15根; 腹鰭棘1根, 鰭條5根; 臀鰭棘3根, 鰭條9根; 尾鰭條17根, 尾骨中央向內(nèi)凹陷處的上半部分8根, 下半部分9根, 尾鰭鰭條分節(jié)數(shù)增多。背鰭鰭條基部開始出現(xiàn)星狀黑色素,尾柄處出現(xiàn)數(shù)枚細(xì)小櫛鱗。稚魚活動能力和攝食能力都很強(qiáng), 反應(yīng)靈敏, 魚苗多在水的中下層活動。

41~50日齡稚魚 全長19.5 mm±1.461mm。背、腹鰭長棘收縮明顯, 長度分別為3.85、3.07 mm, 長棘后緣仍有幾個(gè)較大的小齒。從眼睛上方至脊椎最前端覆蓋了較密集的黑色素, 身體背部略有隆起,背部和脊柱上部黑色素細(xì)胞明顯增多, 呈線狀排列。腹部消化道上方的黑色素消褪明顯, 只在腹腔上方有小部分星狀黑色素分布, 腹部仍以黃色素?cái)?shù)量最多, 消化道下方布滿藍(lán)色素。尾柄處有一黑色素叢,脊椎明顯, 其下方出現(xiàn)一條紅色的血管。各鰭逐漸發(fā)育完善, 臀鰭第2根鰭棘明顯增粗。稚魚活動能力強(qiáng),攝食旺盛。

55日齡稚魚 全長24.5 mm±1.383 mm。全長28.5 mm的稚魚, 背、腹鰭長棘的絕對長度最小, 分別為2.23 、2.83 mm。各鰭鰭條與成魚相似。體被小櫛鱗,側(cè)線發(fā)達(dá), 體表色素急劇增加, 在體表形成數(shù)條橫帶。除體表橫帶外, 形態(tài)特征已和成魚無多大差異。

2.2.3 幼魚期

58日齡幼魚 全長29.6 mm±1.962 mm。幼魚完成變態(tài), 細(xì)小櫛鱗覆蓋整個(gè)魚體, 體表側(cè)線發(fā)達(dá), 7條橫帶明顯。第二背鰭棘和腹鰭棘已完全收縮。除生殖腺尚未發(fā)育成熟外, 幼魚的形態(tài)特征和生活習(xí)性基本接近成魚, 幼魚喜歡棲息在育苗池底。

2.3 仔稚幼魚的生長與培育管理

七帶石斑魚仔、稚、幼魚全長及鰭棘長度與日齡的關(guān)系如圖3所示。

圖3 七帶石斑魚仔、稚、幼魚的生長Fig.3 Growth of larva, juvenile, and young fish of E.septemfasciatus

2.3.1 前期準(zhǔn)備

小球藻和金藻(Chrysophyta)培養(yǎng): 為調(diào)節(jié)培育池水色、維持培育水體的微生態(tài)環(huán)境, 購置小球藻、金藻(3011)20 000 mL進(jìn)行保種室培育、5~6 d后擴(kuò)種入0.4 m3塑料桶中使用連續(xù)充氣法培養(yǎng)。7 d后進(jìn)入二級培養(yǎng)池(4 m3)5~6 d, 后接入三級培養(yǎng)池(15 m3)3 d, 此時(shí)所培育藻密度≥300個(gè)/mL。

育苗池消毒: 使用漂白粉消毒、刷洗池底和池壁,沖洗3~4遍后用硫代硫酸鈉中和殘余氯離子。

培育水環(huán)境: 布池前加入升溫后海水, 水溫 24℃,水深80 cm, 光強(qiáng)度1 500 ~2 000 lx, 每個(gè)仔魚培育池加入密度≥300 個(gè)/mL的小球藻0.5 m3。

2.3.2 培育過程

七帶石斑魚受精卵的布池密度為4 000~6 000粒/m3。

仔魚從孵出至 3日齡, 即自孵化出膜至開口的時(shí)期, 此階段不換水、不投餌。應(yīng)注意的是此時(shí)期需要嚴(yán)格控制充氣量, 防止水體劇烈波動對仔魚造成機(jī)械損傷。

仔魚從 4日齡開始攝食, 此時(shí)水溫逐漸升高到26 ℃。以長牡蠣(Ostrea gigas)受精卵及幼體作為開口餌料。長牡蠣受精卵制備方法: 將活體牡蠣逐個(gè)洗凈、開殼、檢查雌雄, 以雌雄比例10: 1, 用120目尼龍濾網(wǎng)搓碎轉(zhuǎn)入干凈容器中, 加海水靜置5分鐘, 再濾去浮沫及大型組織碎塊, 按預(yù)定投喂量均勻潑灑于仔魚培育池, 投喂原則為“少投勤投”(24 ℃水溫下牡蠣受精卵22 h左右發(fā)育成為D形幼蟲, 因其具有幾丁質(zhì)外殼故無法被仔魚消化吸收)。保持育苗池中牡蠣受精卵的密度為0.5~1個(gè)/mL。鏡檢觀察腸道內(nèi)充滿牡蠣受精卵及少量 D形幼蟲, 則表明仔魚攝食良好。每天加升溫海水10 cm并補(bǔ)充小球藻保持水色。夜間開啟暖風(fēng)空調(diào)以維持室溫恒定, 控制育苗池水溫穩(wěn)定。仔魚 6日齡后逐漸停止投喂牡蠣受精卵, 開始投喂S型輪蟲。從9日齡開始, 仔魚第二背鰭棘和腹鰭棘長出, 鰭棘較脆弱易折斷, 因此, 在鰭棘長出之前, 應(yīng)預(yù)先調(diào)整育苗池中仔魚密度, 避免密度過大仔魚因趨光聚集而導(dǎo)致鰭棘碰撞引起死亡。

10日齡后, 仔魚開始攝食 L型輪蟲, 但攝食量較低, 鏡檢發(fā)現(xiàn)幼魚腸道中較多 D形幼蟲。因七帶石斑魚仔魚消化道纖細(xì), 單尾仔魚攝食野生輪蟲量1~3個(gè), 多數(shù)僅攝食1~2個(gè)輪蟲。輪蟲投喂量過大的弊端: 若環(huán)境不適, 輪蟲大量死亡, 仔魚無可攝食餌料導(dǎo)致饑餓死亡; 若條件適當(dāng), 輪蟲大量繁殖, 造成水質(zhì)變差, 導(dǎo)致仔魚大量死亡。所以, 要嚴(yán)格控制輪蟲投喂數(shù)量, 定時(shí)抽樣檢查育苗池的輪蟲密度, 維持在 5個(gè)/mL并根據(jù)仔魚的攝食情況調(diào)整輪蟲的投喂量。從11日齡開始使用80目網(wǎng)箱或?yàn)V鼓換水, 日換水量10%。

15~20日齡仔魚進(jìn)入開鰾期, 此時(shí)背腹棘較長,仔魚趨光現(xiàn)象明顯, 經(jīng)常聚集于培育池較明亮的角落。此期關(guān)鍵點(diǎn): 注意水質(zhì)變化, 控制水體透明度30~40 cm; 適宜光照強(qiáng)度范圍1 000 ~1 500 lx, 避免強(qiáng)光、直射光, 增加小球藻濃度以加深水色, 培育車間窗及棚頂加蓋遮光網(wǎng)以降低日間光照。發(fā)育至此時(shí)期的仔魚易受驚擾, 應(yīng)減少驚動, 尤其是直射光、強(qiáng)光手電和巨大的聲響會導(dǎo)致仔魚嚴(yán)重受驚嚇而死亡。當(dāng)仔魚發(fā)育到17日齡時(shí), 第二背鰭棘和腹棘已迅速增長, 活動能力增強(qiáng), , 開始少量投喂鹵蟲無節(jié)幼體。保持育苗池中鹵蟲無節(jié)幼體的密度為0.1個(gè)/mL,輪蟲密度降至1個(gè)/mL。26日齡時(shí)停止投喂輪蟲, 鹵蟲無節(jié)幼體的密度增至0.5~1個(gè)/mL。室內(nèi)水泥池育苗時(shí)七帶石斑魚苗以為鹵蟲無節(jié)幼體主要食物的時(shí)間較長, 一直要持續(xù)到仔魚期結(jié)束。此時(shí), 很容易用肉眼觀察到魚的攝食情況, 側(cè)面觀察魚體腹部呈紅褐色, 實(shí)際操作中可以根據(jù)仔魚攝食量來增減餌料的投喂量。日換水量20%。

55日齡后幼魚全長超過2.5 cm, 開始投喂魚蝦肉糜并每天吸底1次。此時(shí)期互殘現(xiàn)象較為嚴(yán)重, 個(gè)體較大的幼魚大多會被個(gè)體較小的幼魚噎死, 從而大大降低苗種培育成活率。為避免殘食現(xiàn)象的發(fā)生,間隔5~7 d分選1次; 提高投喂頻率, 在育苗池中設(shè)置掩蔽物, 如空心磚、塑料管等, 也可有效減少互相殘食。

3 討論與小結(jié)

3.1 胚胎發(fā)育

七帶石斑魚受精卵徑 0.854 mm ±0.021mm, 比謝菁等[14]報(bào)道的(0.8880 mm ±0.024 mm)稍小, 比同屬的鞍帶石斑魚(Epinephelus lanceolatus) (0.79 mm±0.85mm)[15]、點(diǎn)帶石斑魚(Epinephelus malabaricus)(0.75 mm±077 mm)[16]大, 比云紋石斑魚(Epinephelus moara) (0.871 mm±0.013 mm)[17]小。本研究發(fā)現(xiàn)七帶石斑魚受精卵約 2640粒/g, 而點(diǎn)帶石斑魚[16]、云紋石斑魚[18]的受精卵約 1500粒/g, 作者認(rèn)為可能是七帶石斑魚卵黃較小, 卵內(nèi)含物質(zhì)較輕所致。另外, 親魚的個(gè)體大小、培育環(huán)境的不同、餌料營養(yǎng)的優(yōu)劣、產(chǎn)卵方式等都會造成受精卵卵徑的差異, 石斑魚是分批產(chǎn)卵, 所以同一尾親魚排出的卵粒大小也會有差異。本研究中胚胎孵化出膜時(shí)間為31 h5 min, 趙明等[18]報(bào)道的在溫度(22±0.5)℃, 鹽度30~35范圍內(nèi)胚胎孵化出膜時(shí)間為32 h36 min~32 h42 min, 作者認(rèn)為可能是本研究提高了受精卵的孵化水溫導(dǎo)致胚胎孵化出膜的時(shí)間縮短。根據(jù)實(shí)驗(yàn)觀察的結(jié)果, 將七帶石斑魚的胚胎發(fā)育劃分為卵裂期、囊胚期、原腸胚期、神經(jīng)胚期和器官形成期, 與報(bào)道的其他石斑魚類[15-17,19]結(jié)果基本一致。

3.2 七帶石斑魚胚后發(fā)育階段的劃分

參照國內(nèi)外石斑魚仔稚幼魚的劃分方式[20-23],七帶石斑魚胚后發(fā)育主要依據(jù)卵黃囊的變化、長鰭棘的生長與收縮、鱗片的出現(xiàn)劃分為仔魚期、稚魚期、幼魚期。仔魚期分為前期仔魚和后期仔魚, 前期仔魚主要由卵黃囊提供營養(yǎng), 為內(nèi)源性營養(yǎng)階段;后期仔魚階段, 仔魚完成從內(nèi)源性營養(yǎng)到外源性營養(yǎng)的過渡, 仔魚在形態(tài)、生理方面變化劇烈。國內(nèi)外學(xué)者在后期仔魚結(jié)束的標(biāo)志上觀點(diǎn)有所不同, 郭仁湘等[20]認(rèn)為以仔魚各鰭基本發(fā)育形成作為鞍帶石斑魚后期仔魚結(jié)束的標(biāo)志; 鄒記興等[23]認(rèn)為點(diǎn)帶石斑魚仔魚背腹鰭棘開始收縮, 鱗片長出前為后期仔魚結(jié)束的標(biāo)志。本研究表明, 30 dph的七帶石斑仔魚第二背鰭棘和腹鰭棘的絕對長度達(dá)到早期發(fā)育階段的最大值。根據(jù)七帶石斑魚胚后發(fā)育的特性, 將仔魚長鰭棘絕對長度最大作為后期仔魚結(jié)束的標(biāo)志, 這與鄒記興等[23]觀點(diǎn)一致。稚魚期為長鰭棘開始收縮至鱗被完全形成結(jié)束。幼魚期, 魚體全身被鱗片覆蓋,橫帶明顯, 除生殖腺尚未發(fā)育成熟外, 幼魚的形態(tài)特征和生活習(xí)性基本接近成魚。

3.3 七帶石斑魚仔、稚、幼魚的生長與培育

本研究測得七帶石斑初孵仔魚的全長為1.99 mm±0.041mm, 比陳超等[24]報(bào)道的 1.36 mm±0.07 mm 偏大, 周玲等[15]在對鞍帶石斑魚胚胎發(fā)育及仔魚形態(tài)發(fā)育觀察研究中認(rèn)為, 可能跟受精卵的卵粒大小和卵黃含量的差異有關(guān); 王涵生等[25]在對赤點(diǎn)石斑魚仔、稚、幼魚研究中認(rèn)為這可能是地理種群差別或取樣個(gè)體、時(shí)間差異所致; 作者認(rèn)為初次產(chǎn)卵的親魚得到受精卵卵徑比較大, 卵黃含量較高, 因此親魚的年齡和體質(zhì)的不同, 會造成初孵仔魚大小的差異,具體原因還有待進(jìn)一步研究。

前期仔魚階段(0~3 dph), 魚苗發(fā)育所需營養(yǎng)主要由卵黃囊提供, 個(gè)體差別較小。后期仔魚階段(4~30dph), 魚苗由內(nèi)源性營養(yǎng)轉(zhuǎn)換為外源性營養(yǎng),由于卵質(zhì)不良、先天性畸形、不能開口攝食、開鰾等原因造成這期間魚苗的成活率很低, 另外長鰭棘的長出和趨光性會使魚苗過度密集, 窒息致死。餌料生物的種類、大小、數(shù)量及其某些營養(yǎng)物質(zhì)的缺少或不足是導(dǎo)致仔稚魚大量死亡的一個(gè)重要因素[15]。人工培養(yǎng)的輪蟲及孵化的鹵蟲無節(jié)幼體, 由于缺乏高度不飽和脂肪酸, 連續(xù)使用會造成仔稚魚大量死亡。實(shí)踐證明, 經(jīng)過幾天藻類培育及營養(yǎng)強(qiáng)化的輪蟲或鹵蟲無節(jié)幼體是比較安全的生物餌料[26]。因此在育苗中應(yīng)及時(shí)投喂牡蠣受精卵作為開口餌料, 并根據(jù)魚苗的發(fā)育狀況完成由牡蠣受精卵到S型輪蟲、L型輪蟲、鹵蟲無節(jié)幼體的餌料轉(zhuǎn)換。本研究用小球藻和金藻強(qiáng)化輪蟲, 用裂壺藻(Schizochytrium limacinum)強(qiáng)化鹵蟲無節(jié)幼體, 有效提高了魚苗的成活率。每次更換餌料, 要有2~3 d的過渡時(shí)間, 以便多數(shù)魚苗能很好地適應(yīng)新餌料; 更換餌料要適時(shí), 太遲影響魚的生長, 太早則會造成個(gè)別能攝食較大餌料的魚苗長得特別快, 引起生長不均勻。盡量保持水質(zhì)穩(wěn)定, 水色保持淡綠色為佳, 夜間育苗池邊不開燈,在魚苗聚集處放置充氣石充氧, 防止魚苗窒息死亡。

稚魚期(31~57 dph)最顯著的特征是長鰭棘的收縮, 魚苗轉(zhuǎn)為底棲生活, 攝食餌料由鹵蟲轉(zhuǎn)換為魚蝦肉糜, 已經(jīng)出現(xiàn)相互攻擊和殘食現(xiàn)象。在云紋石斑仔魚發(fā)育出現(xiàn)三叉棘到變態(tài)成稚魚這段時(shí)期, 仔稚魚要經(jīng)歷各種形態(tài)學(xué)、生理學(xué)的變化, 對外界環(huán)境的變化十分敏感, 處理不當(dāng)會導(dǎo)致仔稚魚的大批量死亡[18]。因此, 要避免各種人為操作的刺激, 如溫差變化、強(qiáng)光照射、肆意撈捕等[27]。長鰭棘收縮階段是石斑魚苗種培育的關(guān)鍵時(shí)期, 雖然長鰭棘的作用機(jī)理尚不清楚, 但在這一時(shí)期加強(qiáng)培育管理, 保持水環(huán)境穩(wěn)定, 適時(shí)篩選分池, 提高喂食頻率, 設(shè)置掩體,避免相互殘食, 可以有效降低苗種死亡率。直至進(jìn)入幼魚期(58 dph)長鰭棘完成收縮, 魚苗的生長速度加快, 全長超過6 cm后殘食明顯減弱。

在七帶石斑魚仔、稚、幼魚的生長速度方面, 不同的報(bào)道間具有一定差距, 本研究30 dph仔魚全長7.98 mm±1.461mm, 比陳超等[24]報(bào)道的 11.08 mm±0.792 mm 偏小。60 dph的幼魚全長 30.60 mm±1.961mm, 與北島力等[28]報(bào)道的 60 dph全長即可超過30 mm相差無幾。作者認(rèn)為其中的原因是多方面的, 餌料質(zhì)量、培育池的大小、培育水溫(陳超等培育池為25 m3, 水溫22~24℃; 本研究培育池為15m3,水溫 22~28℃)、布池密度等都會造成仔稚、幼、魚生長速度的差異。

將本研究結(jié)果與鞍帶石斑魚[20]、赤點(diǎn)石斑魚(E.akaara)[25]、斜帶石斑魚(E.coioides)[29]、云紋石斑魚[17]早期發(fā)育進(jìn)行比較(表2), 七帶石斑魚胚后發(fā)育較慢, 背腹鰭棘較長等特點(diǎn)增加了人工繁育的難度, 成為實(shí)現(xiàn)規(guī)?；庇钠款i, 因此還有待加強(qiáng)其苗種規(guī)?；庇夹g(shù)的研究。

表2 七帶石斑魚與其他4種石斑魚的相關(guān)數(shù)據(jù)對比Tab.2 Comparison of relevant data of Epinephelus septemfasciatus to those of other groupers

[1]區(qū)又君, 廖光勇, 陳超, 等.七帶石斑魚精子活力及其與環(huán)境的關(guān)系[J].海洋環(huán)境科學(xué), 2011, 30(4): 516-519.

[2]王新安, 馬愛軍, 陳超, 等.七帶石斑魚兩個(gè)野生群體形態(tài)差異分析[J].海洋與湖沼, 2008, 39(6) : 655-660.

[3]Kline R J, Khan I A, Soyano K, et al.Role of folliclestimulating hormone and androgens on the sexual inversion of seven-band grouper Epinephelus septemfasciatus [J].North Am J Aquac, 2008, 70(2) : 266-272.

[4]Koh I C C, Yoloi K, Tsuji M, et al.Cryopreservation of sperm from seven-band grouper,Epinephelus septemfasciatus[J].Cryobiology, 2010, 61(3) : 263-267.

[5]廖光勇, 區(qū)又君, 李加兒, 等.七帶石斑魚精子的超微結(jié)構(gòu)[J].上海海洋大學(xué)學(xué)報(bào), 2011, 20(1) : 71-75.

[6]雷從改, 尹紹武, 陳國華.石斑魚繁殖生物學(xué)和人工繁殖技術(shù)研究現(xiàn)狀[J].海南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2005, 23(3): 75-79.

[7]劉新富, 莊志猛, 孟振, 等.七帶石斑魚人工繁育技術(shù)研究進(jìn)展[J].中國水產(chǎn)科學(xué), 2010, 7(5): 1128-1136.

[8]Teruya K, Yoseda K, Oka M, et al.Effects of photoperiod on survival, growth and feeding of seven band grouper Epinephelus septemfaciatus larvae[J].Nippon Suisan Gakkaishi, 2008, 74(4) : 645-652.

[9]Kokawa Y, Takami I, Nishizawa T.A mixed infection in seven band grouper Epinephelus septemfasciatus affected with viral nervous necrosis (VNN)[J].Aquaculture, 2008, 284(1/2/3/4) : 41-45.

[10]陳超, 程波, 于宏, 等.七帶石斑魚繁殖群體“突眼”癥病原菌的分離與鑒定[J].漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展, 2010, 31(1):25-33.

[11]Tanaka S, Takagi M, Miyazaki T.Histopathological studies on viral nervous necrosis of seven band grouper,Epinephelus septemfasciatusThunberg, at the grow-out stage[J].J Fish Dis, 2004, 27(7) : 385-399.

[12]程波, 陳超, 王印庚, 等.七帶石斑魚肌肉營養(yǎng)成分分析與品質(zhì)評價(jià)[J].漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展, 2009, 30(5) : 51-57.

[13]鐘聲平, 陳超, 王軍, 等.七帶石斑魚染色體核型研究[J].中國水產(chǎn)科學(xué), 2010, 17(1) : 150-155.

[14]謝菁, 區(qū)又君, 李加兒, 等.七帶石斑魚胚體和卵黃囊期仔魚的發(fā)育[J].海洋通報(bào), 2009, 28(2): 41-49.

[15]周玲, 翁文明, 李金亮, 等.鞍帶石斑魚胚胎發(fā)育及仔魚形態(tài)發(fā)育、餌料轉(zhuǎn)變的觀察研究[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào), 2010, 26(01): 293-302.

[16]鄒記興, 常林, 向文洲, 等.點(diǎn)帶石斑魚的親魚培育、產(chǎn)卵受精和胚胎發(fā)育[J].水生生物學(xué)報(bào), 2003, 27(4):378-384.

[17]宋振鑫, 陳超, 翟介明, 等.云紋石斑魚胚胎發(fā)育及仔、稚、幼魚形態(tài)觀察[J].漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展, 2012, 33(3): 26-34.

[18]趙明, 陳超, 柳學(xué)周, 等.鹽度對七帶石斑魚胚胎發(fā)育和卵黃囊仔魚生長的影響[J].漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展, 2011,32(2): 16-21.

[19]賈瑞錦, 王魯, 趙從明, 等.條紋鋸魚旨胚胎發(fā)育及卵黃囊仔魚形態(tài)變化的觀察[J].漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展, 2012,33(3): 26-34.

[20]郭仁湘, 符書源, 楊薇, 等.鞍帶石斑魚仔稚(幼)魚的發(fā)育和生長研究[J].水產(chǎn)養(yǎng)殖, 2011, 32(4) : 8-13.

[21]許波濤, 李加兒, 周宏團(tuán).赤點(diǎn)石斑魚的胚胎和仔魚形態(tài)發(fā)育[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào), 1985, 9(4): 369-374.

[22]陳國華, 張本.點(diǎn)帶石斑魚仔、稚、幼魚的形態(tài)觀察[J].海南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2001, 19(2): 151-156.

[23]鄒記興, 向文洲, 胡超群, 等.點(diǎn)帶石斑魚仔、稚、幼魚的生長與發(fā)育[J].高技術(shù)通訊, 2003, 4: 77-84.

[24]陳超, 趙明, 柳學(xué)周, 等.七帶石斑魚胚胎及仔稚魚形態(tài)觀察[J].漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展, 2011, 32(5): 24-31.

[25]王涵生, 方瓊珊, 鄭樂云.赤點(diǎn)石斑魚仔稚幼魚的形態(tài)發(fā)育和生長[J].上海水產(chǎn)大學(xué)學(xué)報(bào), 2001, 10(4):307-312.

[26]蘇惠美.石斑, 石斑魚餌料生物培養(yǎng)與利用[M].基隆:臺灣漁業(yè)經(jīng)濟(jì)發(fā)展協(xié)會, 2007: 70-103.

[27]劉秉忠.石斑, 石斑魚養(yǎng)殖要點(diǎn)[M].基隆: 臺灣漁業(yè)經(jīng)濟(jì)發(fā)展協(xié)會, 2007: 38-47.

[28]北島力, 高屋雅生, 塚島康生, 等.マ ハタの卵內(nèi)発生および 飼 育による仔稚 魚 の 形 態(tài) 態(tài)化[J].魚魚學(xué)雑誌, 1991, 38(1): 47-55.

[29]劉冬娥, 張雅芝, 方瓊珊, 等.斜帶石斑魚仔、稚、幼魚的形態(tài)發(fā)育研究[J].臺灣海峽, 2008, 27(2): 188-189.