黃桃源 楊文林 尹嘉文 楊健

急性時相反應標志物及凝血、纖溶標志物與慢性蕁麻疹的相關性研究

黃桃源 楊文林 尹嘉文 楊健

目的探討急性時相反應、凝血/纖溶系統(tǒng)與慢性蕁麻疹的關系。方法用酶聯(lián)免疫吸附法測定53例慢性蕁麻疹患者及25例健康人血清白介素6(IL-6)、淀粉樣A物質(zhì)(SAA)水平,同時用免疫比濁法測定血清超敏C反應蛋白(Hs-CRP)及血漿D-二聚體水平,比較兩組之間的差異。慢性蕁麻疹患者按癥狀嚴重程度分為3級(3組),分析各檢測項目之間的相關性以及各檢測項目與慢性蕁麻疹癥狀嚴重程度的關系。結(jié)果慢性蕁麻疹患者組IL-6(10.70±4.94 ng/L)、SAA[M(P25,P75)為4.92(8.22,12.51)μg/L]、D-二聚體(222.32±163.69 μg/L) 水平均高于健康對照組[分別為7.49±3.41 ng/L、2.11(1.21,2.83)μg/L、104.72±43.12 μg/L],兩組差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);Hs-CRP水平[0.30(0.10,1.40)mg/L]與健康對照組[0.30(0.10,0.55)mg/L]比較,差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。慢性蕁麻疹患者IL-6水平與Hs-CRP、SAA、D-二聚體水平及癥狀嚴重程度均無顯著相關性(均P＞0.05),Hs-CRP水平與SAA水平(r=0.67,P＜0.01)、Hs-CRP水平與D-二聚體水平(r=0.49,P＜0.01)、SAA水平與D-二聚體水平(r=0.38,P＜0.01)均呈顯著正相關;Hs-CRP、SAA、D-二聚體水平與癥狀嚴重程度呈顯著正相關(r值分別為0.63、0.62、0.47,均P＜0.01)。結(jié)論慢性蕁麻疹患者存在急性時相反應及凝血系統(tǒng)的激活,兩者的發(fā)生可能存在相關性。

蕁麻疹;血液凝固;急性時相反應

近年的研究表明,部分急性時相反應標志物及凝血途徑相關因子等參與了慢性蕁麻疹(chronic urticaria,CU)發(fā)病的過程并與其癥狀嚴重程度等密切相關[1-4],但急性時相反應標志物與凝血途徑相關因子之間的關系研究較少。我們通過檢測CU患者和健康人群血清白介素6(IL-6)、超敏C反應蛋白(Hs-CRP)、血清淀粉樣A物質(zhì)(SAA)水平、血漿D-二聚體水平,分析各檢測指標與CU患者癥狀嚴重程度的關系,研究急性時相反應標志物與凝血途徑相關因子之間的關系,探討急性時相反應與凝血/纖溶系統(tǒng)在CU發(fā)病中的意義。

對象與方法

一、對象

2013年4-8月我院皮膚科診斷為CU患者53例,年齡(37.0±14.9)歲,男16例,女37例;來自我院健康體檢中心體檢健康人25例,年齡(33.9±10.0)歲,男9例,女16例。兩組間性別、年齡差異無統(tǒng)計學意義。CU患者納入標準:符合CU的診斷;性別不限,年齡18～60歲;無腦、肺、心、肝、腎、血液等重大器官疾病;無合并哮喘、變應性鼻炎;了解檢查項目并同意抽血。入選后進行癥狀評級。排除標準:物理性蕁麻疹、膽堿能性蕁麻疹、藥物性蕁麻疹、蕁麻疹性血管炎;1個月內(nèi)曾服抗凝血藥物、糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑;1個月內(nèi)有手術外傷史;3 d內(nèi)曾服抗組胺藥物;孕婦、月經(jīng)期、哺乳期女性。

二、方法

1.標本收集:抽取被檢者清晨空腹靜脈血,采用含肝素鈉的綠色標準采血管、含檸檬酸鈉抗凝的藍色標準采血管、含分離膠促凝的黃色標準采血管分裝,1 000×g4℃離心5 min,綠色采血管取血清(檢測Hs-CRP)、藍色采血管留取血漿(檢測D-二聚體)、黃色采血管取血清(檢測IL-6及SAA),分別放置-80℃冰箱儲存待測。

2.試劑:IL-6、SAA試劑盒(美國USCN Life Science公司),Hs-CRP試劑盒(芬蘭Orion diagnostica公司),D-二聚體試劑盒(愛爾蘭Trinity Biotech公司)。

3.主要儀器:酶標儀(美國Thermo Fisher Scientific公司),全自動凝血分析儀(法國Stago公司),全自動生化分析儀(德國羅氏公司)。

4.方法:酶聯(lián)免疫吸附法測定CU患者血清IL-6及SAA水平;免疫比濁法測定CU患者血清Hs-CRP水平及血漿D-二聚體水平,具體步驟按試劑盒操作說明進行。

5.CU患者癥狀分級(分組):按照文獻[3]方法,根據(jù)近1周風團表現(xiàn)分級,1級(輕度組)為1～10個風團,直徑 ＜3 cm;2級(中度組)為10～50個風團、直徑 ＜3 cm或1～10個風團、直徑 ＞3 cm;3級(重度組)為＞50個風團、直徑＜3 cm或＞10個風團。本研究收集的53例CU患者中輕度組26例,中度組20例,重度組7例。

6.統(tǒng)計學分析:采用SPSS 21.0軟件包進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計,符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以±s表示,不符合則以“M(P25,P75)”表示,檢驗水準α=0.05;CU組與健康對照組符合正態(tài)分布的指標采用t檢驗,不符合則采取秩和檢驗,檢驗水準α=0.05;CU組各指標之間相關關系及與癥狀嚴重程度的相關關系采用Spearman秩相關檢驗。

結(jié) 果

CU組患者IL-6水平、SAA水平、D-二聚體水平均高于健康對照組,兩組差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);Hs-CRP水平與健康對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。見表1。

表1 慢性蕁麻疹組與對照組白介素6(IL-6)、超敏C反應蛋白(Hs-CRP)、淀粉樣A物質(zhì)(SAA)及D-二聚體檢測結(jié)果

慢性蕁麻疹患者IL-6水平與Hs-CRP、SAA、D-二聚體水平及癥狀嚴重程度均無顯著相關性(均P＞0.05),Hs-CRP與SAA(r=0.67,P＜0.01)、Hs-CRP與D-二聚體(r=0.49,P＜0.01)、SAA與D-二聚體(r=0.38,P＜0.01)均呈顯著正相關;Hs-CRP、SAA、D-二聚體水平與癥狀嚴重程度均呈顯著正相關(r值分別為 0.63、0.62、0.47,均P＜ 0.01)。

討 論

急性時相反應(acute-phase response,APR)是指感染、炎癥、組織損傷后的局部或系統(tǒng)的調(diào)節(jié)反應。APR對機體影響可分為血漿蛋白濃度改變及伴隨的一系列生理、生化改變。其中,血漿蛋白濃度增加超過25%的稱為正性急性時相蛋白(acute phase proteins,APP),如 C 反應蛋白(CRP)、SAA、纖維蛋白原(FIB)等。在多種疾病中,APR與凝血/纖溶功能關系密切。當機體受到感染、炎癥、組織損傷后,局部炎癥細胞可以釋放如腫瘤壞死因子α、IL-6、IL-8等炎癥因子,在補體途徑及各種炎癥因子直接刺激下,CRP、SAA、降鈣素原、α1抗胰蛋白酶、α1 酸性糖蛋白、結(jié)合珠蛋白等正性急性時相蛋白在肝臟合成增加;同時其他蛋白如血清白蛋白、血清前白蛋白、血清轉(zhuǎn)鐵蛋白等負性急性時相蛋白合成下調(diào)[5]。不同炎癥因子與急性時相蛋白在APR中發(fā)揮強大的生物學效應.目前已知在炎癥過程中,CRP可以誘導局部血管內(nèi)皮細胞的組織因子表達,暴露在血液中的組織因子是外源性凝血途徑激活的啟動因子,并且主要參與凝血酶的調(diào)控,組織因子的表達引起凝血/纖溶系統(tǒng)激活,整個凝血途徑相關因子發(fā)生改變,最后使凝血酶生成及纖維蛋白形成,凝血酶可以通過血管內(nèi)皮等組織引起炎癥介質(zhì)的釋放[6]。近年來國外文獻報道,CU患者部分急性時相標記物水平增高,認為其體內(nèi)發(fā)生APR,且參與CU的發(fā)病[1]。另一方面,國內(nèi)外的研究結(jié)果表明,CU患者體內(nèi)的內(nèi)、外凝血途徑激活,多種凝血因子水平升高,并與CU癥狀嚴重程度相關[2-4],但目前CU患者凝血途徑激活的原因還不清楚。

APR中的關鍵因子是IL-6,參與調(diào)控大部分APP。IL-6是一種具有廣泛生物學特性的細胞因子,具有促進炎癥反應、促進細胞的增殖和分化[7]。目前IL-6在CU中的研究結(jié)果不盡相同,王穎超等[8]的研究表明,CU患者外周血IL-6水平及外周血單一核細胞體外產(chǎn)生IL-6的能力與正常對照組差異無統(tǒng)計學意義。國外研究則顯示,CU患者外周血IL-6水平升高[9-10]。我們的研究亦顯示,CU患者IL-6水平升高。另一方面,有報道指出,IL-6與CU癥狀嚴重程度呈正相關[10]。但本研究中CU患者IL-6水平與癥狀嚴重程度無顯著相關關系,可能由于我們對CU患者的癥狀嚴重程度分級不夠精細,未能完全反映患者癥狀嚴重程度。Kasperska等[10]在研究急性時相標志物與疾病嚴重程度時,采用了歐洲變態(tài)反應和臨床免疫學會(EAACI)評估蕁麻疹活動性的標準,該標準采用對未服用任何藥物的患者連續(xù)7 d記錄每天的癥狀評分,算出總分進行評估,盡管這個標準評分量化程度高,較為嚴謹,但臨床上可操作性欠佳。多項研究已表明,IL-6在CU患者體內(nèi)升高,但其來源仍未完全清楚,國外學者認為肥大細胞和皮膚炎癥細胞(如單核細胞、嗜堿性粒細胞、活化的T細胞等)可以產(chǎn)生和釋放IL-6[11],有人認為只含有類胰蛋白酶的T型肥大細胞可能是CU中IL-6的重要來源[12]。

Hs-CRP及SAA均屬于APR的正性急性時相蛋白,主要接受IL-6調(diào)控[7]。CRP參與炎癥過程,可促進損傷的血管內(nèi)皮細胞和激活的炎性反應細胞大量表達和釋放組織因子,使凝血系統(tǒng)激活,引起血管收縮活性增強和血小板激活[13],而Hs-CRP是指使用更敏感方法檢測出的CRP。SAA目前在臨床上主要用于各種感染性疾病治療前后效果的參考、移植排斥反應的檢測等。陳長強等[14]報道SAA比CRP更能反應系統(tǒng)的低水平炎癥。本研究結(jié)果表明,CU患者Hs-CRP與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義,53例患者中Hs-CRP超過實驗室正常范圍(0～3 mg/L)的有5例(9.4%)。 Takahagi等[3]在74例CU患者中發(fā)現(xiàn)17例患者(23.07%)的CRP超過正常范圍值。Kasperska-Zajac[1]認為,CRP在正常范圍內(nèi)升高即可發(fā)揮各種生物學效應,影響CU癥狀。本實驗首次測定了CU患者SAA水平,結(jié)果顯示,CU患者組SAA水平高于對照組。SAA水平升高進一步說明CU患者存在著低水平的炎癥反應。

D-二聚體是纖溶過程的特異性標記物,當其在體內(nèi)升高時可反映機體處于高凝狀態(tài)及纖溶亢進。本研究中,CU組D-二聚體水平高于健康對照組,其中33例患者(62.26%)D-二聚體超過實驗室正常范圍(0～150 μg/L),提示CU患者體內(nèi)處于高凝狀態(tài)及纖溶亢進,其中包括輕度組9例(34.61%),中度組17例(85.00%),重度組7例(100%)。D-二聚體的升高提示凝血酶的生成,凝血酶是蛋白激酶受體的激動劑,可以與具有蛋白激酶受體的肥大細胞結(jié)合,進一步活化肥大細胞,放大組胺、炎癥介質(zhì)的水平,從而加重CU風團、瘙癢等癥狀[2]。本研究結(jié)果表明,Hs-CRP、SAA分別與D-二聚體呈正相關關系,提示CU患者APR與凝血系統(tǒng)異常激活存在著一定的相關性。

迄今有關APR在CU方面的研究尚不多,本研究結(jié)果初步證實了CU患者體內(nèi)發(fā)生APR及凝血系統(tǒng)的激活,二者之間有一定相關性。根據(jù)本研究結(jié)果筆者認為,CU患者體內(nèi)發(fā)生APR,IL-6、Hs-CRP及SAA等相關炎癥介質(zhì)增加,使組織因子表達增加,激活凝血/纖溶途徑,使D-二聚體水平升高,凝血系統(tǒng)的激活可以加重CU癥狀。但本組重度患者納入偏少,數(shù)據(jù)可能會存在偏倚。

[1]Kasperska-Zajac A.Acute-phase response in chronic urticaria[J].J Eur Acad Dermatol Venereol,2012,26(6):665-672.

[2]Asero R,Cugno M,Tedeschi A.Activation of blood coagulation in plasma from chronic urticaria patients with negative autologous plasma skin test[J].J Eur Acad Dermatol Venereol,2011,25(2):201-205.

[3]Takahagi S,Mihara S,Iwamoto K,et al.Coagulation/fibrinolysis and inflammation markers are associated with disease activiey in patients with chronic urticaria[J].Allergy,2010,65(5):649-656.

[4] 朱慧蘭,李潤祥,郭慶,等.蕁麻疹患者血漿D二聚體、活化凝血因子Ⅶ及組織因子途徑抑制物-活性凝血因子X復合物與癥狀的關系[J].中華皮膚科雜志,2008,41(10):660-662.

[5]Kato A,Takita T,Furuhashi M,et al.Comparison of serum albumin,C-reactive protein and carotid atherosclerosis as predictors of 10-year mortality in hemodialysis patients[J].Hemodial Int,2010,14(2):226-232.

[6]Esmon CT.Crosstalk between inflammation and thrombosis[J].Maturitas,2008,61(1):122-131.

[7]Gabay C,Kushner I.Acute-phase proteins and other systemic responses to inflammation[J].N Engl J Med,1999,340(6):448-454.

[8] 王穎超,史同新,李民,等.慢性特發(fā)性蕁麻疹患者血清IL-6、IL-12P70和β-內(nèi)啡肽及組胺測定[J].中國麻風皮膚病雜志,2010,26(2):89-91.

[9]Kasperska-Zajac A,Brzoza Z,Rogala B.Plasma concentration of interleukin 6 (IL-6),and its relationship with circulating concentration ofdehydroepiandrosterone sulfate(DHEA-S)in patients with chronic idiopathic urticaria[J].Cytokine,2007,39(2):142-146.

[10]Kasperska-Zajac A,Sztylc J,Machura M,et al.Plasma IL-6 concentration correlates with clinical disease activity and serum C-reactive protein concentration in chronic urticaria patients[J].Clinical Experimental Allergy,2011,41(10):1386-1391.

[11]Oishi K,Machida K.Some plasma component is essential for IL-6 secretion by neutrophils[J].Environ Health Prev Med,1997,2(2):89-92.

[12]Nettis E,Dambra P,Loria MP,et al.Mast-cell phenotype in urticaria[J].Allergy,2001,56(9):915.

[13]Volanakis JE.Human C-reactive protein:expression,structure,and function[J].Mol Immunol,2001,38(2-3):189-197.

[14] 陳長強.血清淀粉樣蛋白A在疾病應用中的研究進展[J].檢驗醫(yī)學,2012,27(9):776-779.

2013-11-05)

(本文編輯:顏艷)

Biomarkers for acute-phase response and coagulation/fibrinolysis in patients with chronic urticaria:a correlation study

Huang Taoyuan,Yang Wenlin,Yin Jiawen,Yang Jian.Department of Dermatology,Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University,Guangzhou 510260,China

Yang Wenlin,Email:yangwenlin@21cn.com

ObjectiveTo evaluate the relationship of acute-phase response and coagulation/fibrinolysis with chronic urticaria(CU).MethodsFifty-three patients with CU and twenty-five healthy human controls were enrolled in this study.Venous blood samples were collected from all of these subjects.Then,enzyme-linked immunosorbent assay was carried out to measure the serum levels of interleukin-6(IL-6)and amyloid protein A(AA),and immunoturbidimetry to determine the levels of serum high sensitive C-reactive protein(Hs-CRP)and plasma D-dimer.The patients with CU were classified into three groups according to the severity of clinical symptoms.The levels of serum IL-6 and plasma D-dimer were given in mean±standard deviation,and those of serum AA and Hs-CRP in mean(25th percentile,75th percentile).Rank sum test andttest were performed to compare these parameters between the patients and controls,and Spearman rank correlation analysis was conducted to study the relationship among these parameters as well as between these parameters and symptom severity in these patients.ResultsThe levels of serum IL-6,serum AA and plasma D-dimer were(10.70±4.94)ng/L,4.92(8.22,12.51)μg/L,and(222.32±163.69)μg/L respectively in the patients with CU,significantly higher than those in the healthy controls((7.49±3.41)ng/L,2.11(1.21,2.83)μg/L,(104.72±43.12)μg/L,respectively,allP＜0.05),while no significant differences were observed between the patients and controls in the level of serum Hs-CRP(0.30(0.10,1.40)mg/L vs.0.30(0.10,0.55)mg/L,P＞0.05).In patients with CU,the levels of serum IL-6 were unrelated to those of serum Hs-CRP,serum AA,or plasma D-dimer(allP＞0.05),whereas a positive correlation was observed between the levels of serum Hs-CRP and AA(r=0.67,P＜0.01),serum Hs-CRP and plasma D-dimer(r=0.49,P＜0.01),serum AA and plasma D-dimer(r=0.38,P＜0.01).Further more,the levels of serum Hs-CRP,AA and plasma D-dimer were significantly correlated with symptom severity in patients with CU(r=0.63,0.62,0.47,respectively,allP＜0.01).ConclusionsAcute-phase response coexists with the activation of coagulation system in patients with CU,suggesting a potential association between acute-phase response and coagulation system activation.

Urticaria;Blood coagulation;Acute-phase response

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2014.07.006

510260廣州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院皮膚科

楊文林,Email:yangwenlin@21cn.com