呂 兵，王 卓，臧連生*，時(shí)東方，劉春明*

(1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生物防治研究所/天敵昆蟲應(yīng)用技術(shù)工程研究中心，長春 130118;2.長春師范大學(xué)中心實(shí)驗(yàn)室，長春 130032)

核桃楸Juglans mandshurica Maxim.又名山核桃，屬于胡桃科胡桃屬落葉喬木，是東北紅松林的重要伴生樹種(孫墨瓏等，2007)，其葉、外果皮及樹皮均可以用來殺蟲(時(shí)東方等，2013)。國內(nèi)外學(xué)者已從核桃楸葉、皮和果中分離到胡桃醌、黃酮醇、槲皮苷等多種化合物(Lee et al.，2001;Li et al.，2003;石建輝等，2006;孫墨瓏等，2007)，其中，胡桃醌是其中的主要毒性物質(zhì)。已有學(xué)者研究表明，核桃楸葉乙醇提取物對(duì)舞毒蛾Lymantria dispar L.、甘藍(lán)夜蛾Mamestra brassicae L.幼蟲 (孫墨瓏等，2007)以及雙斑螢葉甲Monolepta hieroglyphica (Mots-chulsky)、菜青蟲Pieris rapae L.和綠豆象Callosobruchus chinensis(L.)(時(shí)東方等，2013)等害蟲具有一定的殺蟲活性。溫室白粉虱 Trialeurodes vaporariorum Westw.、蚜蟲、小菜蛾P(guān)lutella xylostella (L.)幼蟲是東北地區(qū)為害保護(hù)地和設(shè)施栽培蔬菜及觀賞植物的重要害蟲。目前，關(guān)于核桃楸提取物對(duì)這三種害蟲的殺蟲效果研究尚少。為此，筆者研究了核桃楸葉乙醇提取物對(duì)溫室白粉虱、小菜蛾幼蟲及蚜蟲的殺蟲活性，為充分利用本地核桃楸葉豐富自然資源，開發(fā)環(huán)境友好型植物源農(nóng)藥提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試植物材料

供試胡核桃楸葉2013年采于吉林省白山市江源縣，自然陰干后，將葉粉碎過20-30 目篩備用。

1.2 供試?yán)ハx

溫室白粉虱、小菜蛾、豌豆蚜2012年采集自吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)蔬菜試驗(yàn)基地，在人工氣候室(26±1℃，60%±5% RH，L 14∶10 D)條件下，分別用番茄、甘藍(lán)和蠶豆進(jìn)行續(xù)代繁殖。

1.3 殺蟲活性物質(zhì)的提取方法

稱取50 g 核桃楸葉粉，用索氏提取器及95%乙醇回流提取4 h，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器減壓濃縮，得醇提液浸膏，備用。具體操作方法參見時(shí)東方等(2013)。

1.4 提取物對(duì)溫室白粉虱活性的測(cè)定

在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，將核桃楸葉乙醇提取物用蒸餾水稀 成 2.0395、1.6316、1.2237、0.8158、0.4079 g/L 五個(gè)濃度梯度，以蒸餾水做對(duì)照。核桃楸葉乙醇提取物對(duì)溫室白粉虱的活性測(cè)定采用連葉浸漬法。將無蟲番茄葉片在藥液中浸漬約30 s，取出后晾干藥液，將水培番茄葉片置于透明接蟲杯內(nèi)，并接入20 頭粉虱成蟲，48 h后，檢查試蟲存活數(shù)和死亡數(shù)。每個(gè)處理(濃度)重復(fù)10 次。

1.5 提取物對(duì)小菜蛾幼蟲活性的測(cè)定

在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，將核桃楸葉乙醇提取物用蒸餾水稀 成 2.0395、1.6316、1.2237、0.8158、0.4079 g/L 五個(gè)濃度梯度，以蒸餾水做對(duì)照。用藥方式為藥液浸蟲法。將試蟲在供試核桃楸葉藥液中浸漬5 s 后取出，吸去多余藥液，移入培養(yǎng)皿中。供試小菜蛾幼蟲飼喂新鮮的甘藍(lán)葉片，48 h 后，檢查試蟲存活數(shù)和死亡數(shù)。每個(gè)處理提供5 頭3-4 齡小菜蛾幼蟲，每個(gè)處理重復(fù)10 次。

1.6 提取物對(duì)蚜蟲活性的測(cè)定

在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，將核桃楸葉乙醇提取物用蒸餾水稀 成 1.9518、0.6798、0.4079、0.2719、0.1360 g/L 五個(gè)濃度梯度，以蒸餾水做對(duì)照。用藥方式為浸蟲浸葉法，將帶有蚜蟲的蠶豆葉片在供試藥液中浸滯5 s 后取出，吸去試蟲與葉片上多余藥液，將試蟲與葉片移入培養(yǎng)皿中，48 h 后，檢查試蟲存活數(shù)和死亡數(shù)。每個(gè)處理提供10 頭蚜蟲，每個(gè)處理重復(fù)11 次。

1.7 數(shù)據(jù)分析

以死亡率作為毒力指標(biāo)，通過用藥濃度-藥效毒力回歸評(píng)價(jià)核桃楸葉乙醇提取物的殺蟲活性。校正死亡率計(jì)算公式:

校正死亡率=(處理死亡率-對(duì)照死亡率)/ (1-對(duì)照死亡率)×100 %。

數(shù)據(jù)用DPS 14.10 軟件進(jìn)行分析，以藥劑質(zhì)量濃度值的常用對(duì)數(shù)值為自變量，校正死亡率幾率值為因變量，進(jìn)行回歸分析，求出供試?yán)ハx對(duì)藥劑反應(yīng)的回歸方程、LC50。不同處理間的死亡率進(jìn)行方差分析，采用Duncan 氏新復(fù)極差法進(jìn)行平均數(shù)的多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 核桃楸葉乙醇提取物對(duì)溫室白粉虱的毒殺作用

核桃楸葉乙醇提取物對(duì)白粉虱具有較強(qiáng)的胃毒作用(表1)。取食浸漬不同稀釋濃度藥液番茄葉片48 h 后，溫室白粉虱的死亡率存在明顯差異(F5，54=94.87，P＜0.0001)，隨著藥液濃度的增大，對(duì)于白粉虱的毒殺作用越強(qiáng)(見表1)。取食浸漬2.0395 g/L 番茄葉片48 h 后，白粉虱的校正死亡率高達(dá)94.48%。根據(jù)毒力測(cè)定結(jié)果，以質(zhì)量濃度(對(duì)數(shù))-校正死亡率(幾率)建立毒力回歸方程:Y=5.2645 +2.1140x，r=0.8297。當(dāng)死亡率為50%時(shí)，LC50=0.7527 g/L。

2.2 核桃楸葉乙醇提取物對(duì)小菜蛾幼蟲的毒殺作用

核桃楸葉乙醇提取物對(duì)小菜蛾幼蟲具有較強(qiáng)的觸殺作用(表1)。浸漬不同稀釋濃度藥液48 h 后，小菜蛾幼蟲的死亡率存在明顯差異 (F5，54=47.967，P＜0.0001)，隨著藥液濃度的增大，對(duì)于小菜蛾幼蟲的毒殺作用越強(qiáng)。浸漬2.0395 g/L藥液48 h 后，小菜蛾幼蟲的校正死亡率高達(dá)98.00%。根據(jù)毒力測(cè)定結(jié)果，以質(zhì)量濃度 (對(duì)數(shù))-校正死亡率(幾率)建立毒力回歸方程:Y=5.2971+2.9402x，r=0.8786，當(dāng)死亡率為50%時(shí)，LC50=0.7924 g/L。

表1 核桃楸葉乙醇提取物對(duì)溫室白粉虱和小菜蛾48 h 的毒殺作用Table 1 Toxicity of alcohol extracts from Juglans mandshurica leaves on Trialeurodes vaporariorum and Plutella xylostella in 48 h

2.3 核桃楸葉乙醇提取物對(duì)蚜蟲的毒殺作用

核桃楸葉乙醇提取物對(duì)蚜蟲也有更強(qiáng)的觸殺作用(表2)。浸漬不同稀釋濃度藥液48 h 后，豌豆蚜的死亡率存在明顯差異(F5，60=29.285，P＜0.0001)，隨著藥液濃度的增大，對(duì)于蚜蟲的毒殺作用越強(qiáng)。浸漬0.9518 g/L 藥液48 h 后，豌豆蚜的校正死亡率高達(dá)89.35%。根據(jù)毒力測(cè)定結(jié)果，以質(zhì)量濃度(對(duì)數(shù))-校正死亡率(幾率)建立毒力回歸方程:Y=6.2442 +1.8476x，r=0.9893，當(dāng)死亡率為50%時(shí)，LC50=0.2121 g/L。

表2 核桃楸葉乙醇提取物對(duì)蚜蟲48 h 的毒殺作用Table 2 Toxicity of alcohol extracts from Juglans mandshurica leaves on Aphis craccivora in 48 h

3 結(jié)論與討論

本研究結(jié)果表明，核桃楸葉乙醇提取物對(duì)東北地區(qū)三種常見害蟲溫室白粉虱、小菜蛾和豌豆蚜均有較好的毒殺作用。提取物對(duì)白粉虱成蟲具有一定的胃毒作用，致死中濃度為0.7527 g/L，對(duì)小菜蛾幼蟲和蚜蟲則具有較強(qiáng)的觸殺作用，致死中濃度分別為0.7924 和0.2121 g/L。

孫墨瓏等(2007)研究表明，核桃楸葉乙醇提取物對(duì)舞毒蛾和甘藍(lán)夜蛾幼蟲具有殺蟲活性，致死中濃度分別為3.9 和6.0 g/L，其報(bào)道數(shù)值高于本研究對(duì)三種昆蟲的測(cè)試結(jié)果，可能與其選擇測(cè)試的種類不同以及昆蟲個(gè)體較大有關(guān)。蘇秀等(2010)測(cè)試的山核桃Carya cathayensis Sarg.外果皮甲醇提取物對(duì)蚜蟲的致死中濃度為42.8 g/L，其毒殺作用遠(yuǎn)低于本研究核桃楸葉乙醇提取物測(cè)定結(jié)果，這可能與提取工藝以及不同測(cè)試植物種類有關(guān)。此外，核桃楸葉提取物對(duì)雙斑螢葉甲、菜青蟲和綠豆象等害蟲也表現(xiàn)出一定的殺蟲活性(時(shí)東方等，2013)。本研究首次發(fā)現(xiàn)核桃楸葉提取物對(duì)粉虱類害蟲也表現(xiàn)出較強(qiáng)的毒殺作用。有研究結(jié)果表明，核桃楸提取物具有廣譜的殺蟲活性，是否對(duì)瓢蟲和寄生蜂等天敵昆蟲具有殺蟲活性有待進(jìn)一步研究。

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