王玉亮，王澤劍，殷 明＊，辛海量

（1.上海交通大學藥學院，上海200240；2.上海交通大學農(nóng)業(yè)與生物學院植物生物技術(shù)研究中心，上海200240；3.第二軍醫(yī)大學中醫(yī)系，上海200433）

［本文編輯］陽凌燕

青蒿琥酯是青蒿素的重要衍生物之一，與青蒿素相比，不僅效價高、毒性小，而且溶解性好，更有利于臨床應(yīng)用［1］。青蒿琥酯不僅具有很好的抗瘧疾作用，而且還具有治療寄生蟲?。?］、抗腫瘤［3］、抗炎和免疫調(diào)節(jié)［4］等多種作用。熊果酸又名烏索酸（烏蘇酸），屬五環(huán)三萜類化合物，在自然界分布很廣，如存在于杜鵑花科植物熊果的葉和果實中，玄參科植物毛泡桐的葉中，以及木樨科植物女貞的葉中。熊果酸具有廣泛的生物活性，包括抗癌、降血脂、對肝損傷的保護、抗菌消炎和抗病毒等作用［5］。作者的前期實驗研究表明，青蒿琥酯和熊果酸復(fù)方可有效降低模型動物血清中三酰甘油和膽固醇的水平［6］，具備開發(fā)成一種新型降脂復(fù)方藥物的潛力。本研究對青蒿琥酯和熊果酸復(fù)方進行了普通藥理學和初步的毒性實驗研究，為該復(fù)方的進一步研發(fā)提供了實驗依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 供試品及其配制 青蒿琥酯（含量98.5%，批號000129，廣州漢方藥業(yè)）；熊果酸（含量98.6%，批號XC091225，西安小草植物科技有限責任公司）。配制方法：吐溫助溶，溶于生理鹽水，配成所需的濃度。

1.2 動物和儀器 ICR小鼠和SD大鼠由復(fù)旦大學動物中心提供，許可證號SCXK滬2009－0019，雌雄兼用。轉(zhuǎn)棒儀（山東益延醫(yī)療器械公司）；AT－738PLUS生化分析儀（上海安泰分析儀器有限公司）；血常規(guī)分析儀（日本Nihon Kohden公司）；JA1003N電子天平（上海精密科學儀器有限公司）；MPA－2000M型多道生物信號分析系統(tǒng)（上海奧爾科特生物科技有限公司）。

2 方法和結(jié)果

2.1 對小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響

2.1.1 動物分組及給藥劑量 實驗前稱重小鼠，按體重編號，應(yīng)用隨機數(shù)字表，完全隨機化分為6組，分別灌胃給藥：對照組給予生理鹽水；青蒿琥酯組給予青蒿琥酯50mg／kg；熊果酸組給予熊果酸50mg／kg；復(fù)方低、中、高劑量組分別給予25、50、100mg／kg復(fù)方（青蒿琥酯∶熊果酸＝1∶1）。

2.1.2 對小鼠一般行為表現(xiàn)的影響 ICR小鼠60只，按體重隨機分為6組。按2.1.1項分組情況給藥，給藥容量均為10ml／kg，分別同法觀察和記錄給藥前、給藥后15、30、60、120、180min各組小鼠的一般行為表現(xiàn)，如瞳孔變化、姿勢、步態(tài)，有無流涎、肌顫等情況。結(jié)果表明，給藥后15、30、60、120、180min，各組小鼠的一般行為表現(xiàn)，如瞳孔、姿勢、步態(tài)無異常情況，無流涎、肌顫等現(xiàn)象。

2.1.3 開場實驗觀察對小鼠自主活動的影響 ICR小鼠60只，按2.1.1項方法分組，灌胃給藥后，0.5、1、2、4h進行開場實驗測試，共4次。觀察并記錄小鼠在5min內(nèi)活動總路程、平均速度和中央活動時間。結(jié)果顯示，青蒿琥酯對小鼠自主活動無影響，熊果酸組和復(fù)方組均可提高小鼠活動的總路程，顯示對中樞神經(jīng)有一定的興奮作用（見表1），但對平均速度和中央活動時間無影響。

表1 開場實驗總路程結(jié)果Table 1 The results of overall length of open－field test（n＝10，l／cm）

2.1.4 對戊巴比妥鈉閾劑量致小鼠睡眠時間的影響 ICR小鼠60只，按2.1.1項分組，灌胃給藥后0.5h開始實驗，實驗在22～24℃條件下進行。小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉水溶液（50mg／kg）。以翻正反射消失至恢復(fù)活動時間作為睡眠時間，觀察并記錄其數(shù)值。戊巴比妥閾劑量致小鼠睡眠時間分別為：對照組（158±19）s，青蒿琥酯組（148±50）s，熊果酸組（188±55）s，復(fù)方低劑量組（182±41）s，復(fù)方中劑量組（179±42）s，復(fù)方高劑量組（160±58）s，各組間無顯著差異，表明青蒿琥酯和熊果酸對戊巴比妥閾劑量致小鼠睡眠時間無顯著影響。

2.1.5 對小鼠機體協(xié)調(diào)能力的影響 ICR小鼠60只，隨機分為6組。轉(zhuǎn)棒實驗在22～24℃條件下進行。轉(zhuǎn)速為25r／min，各組動物分別灌胃給藥后1h開始檢測，測定每只小鼠在勻速轉(zhuǎn)動木棍上停留的時間，每只測定3次，取其平均值。轉(zhuǎn)棒實驗結(jié)果顯示，各組間無顯著差異，表明青蒿琥酯和熊果酸對小鼠的機體協(xié)調(diào)能力均無顯著影響。

2.2 對大鼠呼吸和心血管系統(tǒng)的影響 實驗在（24±2）℃下進行。SD大鼠60只，雌雄兼用，稱重后按體重編號，應(yīng)用隨機數(shù)字表分為6組。禁食6h后，腹腔注射1200mg／kg 20%烏拉坦麻醉，仰臥位固定于手術(shù)臺上，切開頸部皮膚，分離頸總動脈并插管，再連接壓力傳感器測血壓，氣管插管連接到張力傳感器測定呼吸頻率及幅度，四肢插針形電極測定標準Ⅱ?qū)?lián)心電圖；傳感器及針型電極再與連接到計算機上的多功能生物信號分析系統(tǒng)連接，實時監(jiān)測血壓（平均動脈壓），心率，呼吸頻率、幅度，以及標準Ⅱ?qū)?lián)心電圖。手術(shù)結(jié)束后穩(wěn)定30min，記錄各項數(shù)據(jù)，然后給藥：分別灌胃給予青蒿琥酯和熊果酸復(fù)方溶液（70、35、17.5mg／kg），青蒿琥酯溶液（35mg／kg），熊果酸溶液（35mg／kg）或0.9%氯化鈉注射液，給藥容積均為1ml／只，在給藥后0.5、1、2及4h記錄存儲數(shù)據(jù)。結(jié)果表明，青蒿琥酯、熊果酸及其復(fù)方各劑量組對大鼠呼吸系統(tǒng)無影響，對血壓和心電圖波形無影響。

2.3 初步毒性實驗

2.3.1 小鼠急性毒性實驗 ICR小鼠40只，雌雄各半，給藥劑量為2g／kg（青蒿琥酯∶熊果酸＝1∶1），實驗前禁食8h，給藥后連續(xù)觀察小鼠反應(yīng)，并記錄1、2、4h，1、2、3～14d等時間內(nèi)小鼠死亡數(shù)，并對死亡小鼠進行解剖，觀察主要臟器情況，存活小鼠在第14天進行解剖。結(jié)果顯示，灌胃給予青蒿琥酯和熊果酸復(fù)方2g／kg后，小鼠出現(xiàn)趴下、靜臥、運動能力減退癥狀，4h后癥狀逐漸緩解，恢復(fù)正常。14d內(nèi)未見小鼠死亡和毒副反應(yīng)。實驗結(jié)束后尸檢，肉眼未見明顯病理改變。

2.3.2 大鼠1個月初步毒性實驗 SD大鼠60只，雌雄各半，按體重隨機分為3組：對照組給予生理鹽水；復(fù)方低、高劑量組分別給予100、400mg／kg復(fù)方（青蒿琥酯∶熊果酸＝1∶1）。給藥1個月，在末次給藥后，禁食12h，不禁水，麻醉后腹腔動脈取血5ml供檢測用。稱量體重，摘取大鼠的主要臟器（心、肝、脾、肺、腎、腦、腎上腺、胃、胸腺、子宮、卵巢、睪丸、膀胱、前列腺），稱量，根據(jù)體重和臟器重量計算臟器系數(shù)。經(jīng)過1個月的長期給藥，大鼠的血常規(guī)和血生化中多項數(shù)據(jù)與正常對照組比較有顯著性差異（見表2、3），堿性磷酸酶、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的升高表明給藥組大鼠肝功能受到一定損傷，但經(jīng)過兩周恢復(fù)后，血常規(guī)和血生化各項指標都恢復(fù)正常（相關(guān)數(shù)據(jù)未列出），顯示該損傷是可逆的。主要臟器病理切片結(jié)果也表明給藥組大鼠各器官無實質(zhì)性損傷。

2.4 統(tǒng)計學處理 采用t檢驗進行統(tǒng)計學處理。

表2 大鼠一個月初步毒性實驗中部分血常規(guī)數(shù)據(jù)Table 2 Some blood routine data in preliminary toxicity test for one month in rats（n＝8）

表3 大鼠1個月初步毒性實驗中部分血生化數(shù)據(jù)Table 3 Some biochemical data in preliminary toxicity test for one month in rats（n＝8）

3 討 論

普通藥理學實驗結(jié)果顯示，青蒿琥酯和熊果酸復(fù)方對大鼠呼吸和心血管系統(tǒng)無明顯影響。在研究對小鼠神經(jīng)系統(tǒng)影響的實驗中，轉(zhuǎn)棒實驗和戊巴比妥閾劑量致小鼠睡眠實驗中各組間也無顯著差異，只有在開場實驗中青蒿琥酯和熊果酸復(fù)方能顯著增加小鼠運動的總路程，與正常對照組比較有顯著性差異，顯示出一定的中樞神經(jīng)興奮作用。運動量的增加有利于血脂水平的降低，該藥理作用與其降血脂的主要藥效可能有一定的關(guān)聯(lián)。

通過初步的急性毒性和長期毒性實驗表明，青蒿琥酯和熊果酸在實驗劑量中未有明顯的毒副作用，長期毒性實驗中對血生化和血常規(guī)指標有一定的影響，但均可通過停藥恢復(fù)。該結(jié)果為下一步正規(guī)的毒性實驗中劑量的設(shè)定提供了實驗依據(jù)。

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