賈春志，史 麗，姜騰軒，高 燕

（沈陽軍區(qū)總醫(yī)院，沈陽 110016）

小腸缺血再灌注（IR）不僅可以引起腸道組織的局部損害，還可以使腸內(nèi)細(xì)菌和毒素轉(zhuǎn)移到體循環(huán)，從而導(dǎo)致相關(guān)介質(zhì)和細(xì)胞因子的大量釋放，嚴(yán)重的可發(fā)生多器官功能障礙綜合征［1］。生長抑素可以通過與小腸黏膜粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞上的生長抑素受體結(jié)合，參與對免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)。2013年5～8月，我們采用腸系膜上動脈（SMA）夾閉—松夾閉的方法建立大鼠小腸IR模型，觀察生長抑素對大鼠小腸IR的保護(hù)作用?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 健康雄性SD大鼠40只，體質(zhì)量250～300 g，由沈陽藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。水合氯醛購于東北制藥集團(tuán)股份有限公司，生長抑素（思他寧）購于瑞士雪蘭諾公司，γ-放射免疫計(jì)數(shù)儀（FJ-2008ps）購于西安核儀器廠，Soniprep150型超聲波發(fā)生器購于上海寧商超聲儀有限公司，酶聯(lián)免疫試劑盒購于上海恒遠(yuǎn)生化試劑有限公司。

1.2 方法

1.2.1 造模與分組處理 將大鼠隨機(jī)分成IR組、缺血組、再灌注組和假手術(shù)組各10只，于實(shí)驗(yàn)前10 h禁食，不禁水。腹腔注射水合氯醛0.2 mL/kg麻醉后，仰臥位固定，頸靜脈消毒插管。IR組、缺血組和再灌注組均采用SMA夾閉—松夾閉的方法建立大鼠小腸IR模型:腹部消毒后開腹，確認(rèn)SMA的主要分支;游離血管后用血管夾阻斷血運(yùn)，常規(guī)縫合關(guān)閉腹腔;1 h后拆開縫線，去掉血管夾;再次將腹壁常規(guī)縫合，經(jīng)1 h再灌注后拆線，取出全部小腸。假手術(shù)組僅麻醉、剖腹、關(guān)腹，2 h后取標(biāo)本［2］。其中缺血組于缺血期、再灌注組于再灌注期均持續(xù)泵入生長抑素3.5 μg/（kg·h），IR 組和假手術(shù)組均不泵入生長抑素。

1.2.2 小腸通透性檢測 參照Wattanasirichaigoon等［3］和 Sims等［4］的方法并加以改良。各組取出全部小腸后，取回腸末端7 cm。腸管一端用4-0絲線結(jié)扎，輕柔翻轉(zhuǎn)腸腔;另一端連接注射器并結(jié)扎固定，緩慢從注射器向腸囊袋注入1.5 mL PBS緩沖液（pH 7.4），使腸管充分?jǐn)U張。將腸囊袋懸浮于37℃、溶有125I標(biāo)記胰島素（分子質(zhì)量5 000 Da）的100 mL PBS緩沖液中（胰島素濃度0.8 mIU/L），孵育30 min后從腸囊袋內(nèi)取出1 mL液體，采用γ-放射計(jì)數(shù)儀測定胰島素從腸黏膜到漿膜的每分計(jì)數(shù)（CPM）。

1.2.3 小腸組織 TNF-α、IL-1、IL-6檢測 采用ELISA法。各組取小腸組織標(biāo)本1 000 mg，去除腸道內(nèi)容物，用37℃生理鹽水清洗腸組織后，于-70℃凍存。取腸組織300 mg在4℃生理鹽水中漂洗，濾紙吸干水分，取組織塊9倍體積的生理鹽水作為勻漿介質(zhì)。采用Soniprep150型超聲波發(fā)生器以振幅14 μm超聲處理30 s，使細(xì)胞破裂。取10%的組織勻漿用低溫低速離心機(jī)以3 000 r/min離心15 min，取上清后采用ELISA法檢測腸組織勻漿中的 TNF-α、IL-1、IL-6。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用方差檢驗(yàn)。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

各組小腸組織TNF-α、IL-1、IL-6水平和CPM比較，IR組、再灌注組 ＞缺血組 ＞假手術(shù)組，P均 ＜0.05;IR組與再灌注組比較，P均＞0.05。見表1。

表1 各組小腸組織勻漿中TNF-α、IL-1、IL-6和CPM比較（n=10，±s）

表1 各組小腸組織勻漿中TNF-α、IL-1、IL-6和CPM比較（n=10，±s）

注:與假手術(shù)組比較，*P ＜0.05;與再灌注組比較，#P ＜0.05;與缺血組比較，△P ＜0.05

組別 TNF（pg/g） IL-1（pg/g） IL-6（pg/g）CPM IR 組 1 642.23±136.13＊△ 1 899.65±164.64＊△ 1 635.68± 94.56＊△ 46.36±3.16＊△缺血組 1 066.17 ±105.13*# 1 106.47 ±128.80*# 1 097.83 ±159.05*# 22.58 ±1.53*#再灌注組 1 535.04 ± 76.54* 1 897.89 ±264.50* 1 580.48 ±133.32* 45.99 ±3.05*假手術(shù)組 687.78 ± 35.40 702.81 ± 78.22 205.98 ± 29.68 17.27 ±1.85

3 討論

研究表明，小腸IR不僅可以引起腸道組織的局部損傷，同時也可以造成肝、肺、腎等器官的損害［5，6］?？赡苁且?yàn)槟c管缺血導(dǎo)致正常黏膜屏障功能喪失，腸內(nèi)細(xì)菌、內(nèi)毒素移位，進(jìn)而激活體內(nèi)單核/巨噬細(xì)胞系統(tǒng)，合成一系列細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)。而細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)的大量釋放是導(dǎo)致膿毒癥和多器官障礙綜合征（MODS）的重要原因［7］，同時細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)又可以破壞腸黏膜屏障，進(jìn)一步加劇這一病理過程。呂藝等［8］發(fā)現(xiàn)，在正常情況下，大鼠小腸組織中TNF-α和IL-1、IL-6等僅少量表達(dá)，腸組織缺血1～1.5 h表達(dá)開始增加，再灌注0.5～1 h表達(dá)至峰值。同肝、肺組織比較，小腸組織損傷是TNF-α和IL-1、IL-6最先表達(dá)升高且幅度最大的部位。由此推斷，小腸是早期炎癥發(fā)生的重要器官，在MODS啟動中起重要作用［9］。

生長抑素是具有多種生物學(xué)效應(yīng)的肽類激素，分布于內(nèi)外分泌腺、腦、胃腸道等組織。生長抑素通過與靶細(xì)胞上相應(yīng)的受體結(jié)合，發(fā)揮其多樣性的生物學(xué)效應(yīng)［10］。小腸黏膜固有層中含有豐富的生長抑素肽能神經(jīng)纖維，這些肽能神經(jīng)纖維與上皮層及固有層的巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞相鄰，直接調(diào)節(jié)腸道的免疫功能［11］。小腸黏膜中粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞上表達(dá)多種生長抑素受體，生長抑素通過與這些細(xì)胞上的受體結(jié)合，影響它們的成熟分化及其對抗原刺激的反應(yīng)性，進(jìn)而參與對免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)，能夠抑制多種炎癥細(xì)胞釋放TNF-α 和 IL-1、IL-6 等炎癥介質(zhì)［12，13］。本研究結(jié)果顯示，各組小腸組織 TNF-α、IL-1、IL-6水平和 CPM比較，IR組、再灌注組＞缺血組＞假手術(shù)組（P均＜0.05），IR組與再灌注組比較則無顯著差異（P均＞0.05）。由此可見，小腸組織缺血發(fā)生后，單核/巨噬細(xì)胞系統(tǒng)被激活，開始釋放大量TNF-α，然后誘導(dǎo)IL-1、IL-6等生成;由于炎性介質(zhì)的大量釋放，致使缺血小腸組織的通透性增高。而生長抑素的應(yīng)用可以抑制由內(nèi)毒素誘導(dǎo)的TNF-α和IL-1、IL-6等炎癥介質(zhì)分泌，降低腸組織的通透性，保護(hù)了腸黏膜屏障。同時，在缺血期應(yīng)用生長抑素對腸黏膜具有較好的保護(hù)作用，其效果優(yōu)于再灌注期?？赡苄∧c缺血期已大量分泌炎癥介質(zhì)，引起的黏膜屏障和通透性損害已經(jīng)形成，即便再灌注期組織血供恢復(fù)并應(yīng)用生長抑素干預(yù)調(diào)節(jié)，其保護(hù)作用也極其有限。

綜上所述，缺血期應(yīng)用生長抑素可有效降低大鼠小腸IR組織TNF-α和IL-1、IL-6水平，進(jìn)而減輕炎癥反應(yīng)，降低細(xì)菌易位率，減輕內(nèi)毒素血癥;同時可以降低小腸缺血引起的腸黏膜通透性增加，進(jìn)而改善微循環(huán)，有利于促進(jìn)IR的恢復(fù)。

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