李卓+梁奇+趙秀紅

摘要：研究超聲波法提取發(fā)菜多糖的工藝。通過(guò)單因素試驗(yàn)研究料液比、提取溫度、提取時(shí)間和超聲波功率對(duì)提取工藝的影響，采用正交試驗(yàn)L9（34）優(yōu)化超聲波提取工藝。確定最佳提取條件為：以水為提取溶劑，料液比1∶50，超聲波功率100 W，溫度60 ℃，超聲時(shí)間20 min，連續(xù)提取2次。此條件下發(fā)菜粗多糖的提取率為7.369%，證明超聲波方法可以快速、大量提取發(fā)菜多糖。

關(guān)鍵詞：超聲波提??；發(fā)菜多糖；工藝；單因素試驗(yàn)；正交試驗(yàn)

中圖分類號(hào)：TS245 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-1161（2014）03-0054-03

發(fā)菜，學(xué)名發(fā)狀念珠藻，是一種陸生絲狀藍(lán)細(xì)菌，因其色黑而細(xì)長(zhǎng)、似人的頭發(fā)而得名。發(fā)菜口味鮮美并具有極高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，含有豐富的蛋白質(zhì)以及人體所必需的八種氨基酸和各種維生素；同時(shí)，其也是一味極好的藥材，具有平肝潛陽(yáng)、清腸止痢的功效。超聲波作為一種新型的提取技術(shù)在天然物質(zhì)的提取中已得到廣泛應(yīng)用，本文利用超聲波法進(jìn)行發(fā)菜多糖提取工藝的研究。

1 材料與方法

1.1 試劑及儀器

發(fā)菜（產(chǎn)于可可西里）；葡萄糖（AP），無(wú)水乙醇，濃硫酸（AP），6%苯酚溶液；超聲波清洗機(jī)，可見—紫外分光光度計(jì)UV2000，高速冷凍離心機(jī)AVANTI J-E。

1.2 單因素試驗(yàn)

選取提取時(shí)間、料液比、超聲波功率和提取溫度4個(gè)因素，研究它們對(duì)發(fā)菜多糖提取率的影響。

1.2.1 提取時(shí)間的影響 準(zhǔn)確稱量1.00 g發(fā)菜樣品4份，分別加入30 mL蒸餾水，置于超聲波清洗儀中，分別提取20，30，40，50 min，濾出殘?jiān)?，提?次，將提取液移置到100 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL加入無(wú)水乙醇10 mL，在5 000 r/min條件下離心20 min，取沉淀加水溶解于50 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL于比色管中，加入1 mL 6%苯酚溶液和7 mL濃硫酸，40 ℃熱水浴30 min后在冰水浴中放置5 min，測(cè)其吸光度。

1.2.2 料液比的影響 準(zhǔn)確稱量1.00 g發(fā)菜樣品5份，分別加入20，30，40，50，60 mL蒸餾水，置于超聲波清洗儀中，超聲波提取30 min，濾出殘?jiān)?，提?次，將提取液移置到100 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL加入無(wú)水乙醇10 mL，在5 000 r/min條件下離心20 min，取沉淀加水溶解于50 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL于比色管中，加入1 mL 6%苯酚溶液和7 mL濃硫酸，40 ℃熱水浴30 min后在冰水浴中放置5 min，測(cè)其吸光度。

1.2.3 超聲波功率的影響 準(zhǔn)確稱量1.00 g發(fā)菜樣品5份，分別加入40 mL蒸餾水，置于超聲波清洗儀中，在超聲波功率分別為50%，60%，70%，80%，90%條件下提取30 min，濾出殘?jiān)?，提?次，將提取液移置到100 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL加入無(wú)水乙醇10 mL，在5 000 r/min條件下離心20 min，取沉淀加水溶解于50 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL于比色管中，加入1 mL 6%苯酚溶液和7 mL濃硫酸，40 ℃熱水浴30 min后在冰水浴中放置5 min，測(cè)其吸光度。

1.2.4 提取溫度的影響 準(zhǔn)確稱量1.00 g發(fā)菜樣品5份，分別加入40 mL蒸餾水，置于超聲波清洗儀中，在40，50，60，70，80，90 ℃下分別超聲波提取30 min，濾出殘?jiān)?，提?次，移置到100 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL加入無(wú)水乙醇10 mL，在5 000 r/min條件下離心20 min，取沉淀加水溶解于50 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL于比色管中，加入1 mL 6%苯酚溶液和7 mL濃硫酸，40 ℃熱水浴30 min后在冰水浴中放置5 min，測(cè)其吸光度。

1.3 正交試驗(yàn)

1.3.1 正交設(shè)計(jì) 采用單因素試驗(yàn)的4個(gè)因素：提取溫度（A），提取時(shí)間（B），料液比（C），超聲功率（D）。每個(gè)因素設(shè)3個(gè)水平，依據(jù)L9（34）正交表（見表1）進(jìn)行試驗(yàn)。

1.3.2 樣品液的制備 分別取發(fā)菜樣品9份，每份精確稱取1 g置于具塞瓶中，按正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案，進(jìn)行超聲波提取，過(guò)濾；將濾液移置于100 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，精確量取2 mL加入無(wú)水乙醇10 mL；離心，取沉淀加水溶解，移置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，作為備用樣品液。

1.3.3 對(duì)照樣品溶液的制備 精確稱取在105 ℃干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖60 mg，置于100 mL容量瓶中加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液（每100 mL中含無(wú)水葡萄糖0.6 mg）。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精確量取對(duì)照品液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL分別置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻；精確吸取上述各溶液2 mL置具塞試管中，分別加入6%苯酚溶液1 mL混勻，再迅速加入硫酸7 mL，搖勻，于40 ℃水浴中保溫30 min后置冰水浴中5 min，取出；另精確吸取蒸餾水2.0 mL作為空白對(duì)照；在490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以濃度c（μg/mL）與吸光度作線性回歸，回歸方程為：c=0.229×A+0.094，R2=0.983。標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。

1.3.5 樣品含量測(cè)定 精確吸取樣品溶液2.0 mL，加入6%苯酚溶液1 mL混勻，再迅速加入硫酸7 mL搖勻，于40 ℃水浴中保溫30 min后置冰水浴中5 min，取出；另精確吸取蒸餾水2.0 mL作為空白對(duì)照；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣品溶液中發(fā)菜多糖含量，按干燥品計(jì)算。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取時(shí)間對(duì)發(fā)菜多糖提取率的影響

2.2 料液比對(duì)發(fā)菜多糖提取率的影響

2.3 超聲波功率對(duì)發(fā)菜多糖提取率的影響

2.4 提取溫度對(duì)發(fā)菜多糖提取率的影響

2.5 超聲波提取發(fā)菜多糖的工藝優(yōu)化

3 結(jié)論

通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化得到的超聲波法提取發(fā)菜多糖的最佳工藝條件為：提取溫度60 ℃、提取時(shí)間20 min、料液比1∶50、功率100 W，提取2次，發(fā)菜粗多糖提取率為7.369%。此工藝可以快速、大量提取發(fā)菜多糖，有利于發(fā)菜的深加工。

摘要：研究超聲波法提取發(fā)菜多糖的工藝。通過(guò)單因素試驗(yàn)研究料液比、提取溫度、提取時(shí)間和超聲波功率對(duì)提取工藝的影響，采用正交試驗(yàn)L9（34）優(yōu)化超聲波提取工藝。確定最佳提取條件為：以水為提取溶劑，料液比1∶50，超聲波功率100 W，溫度60 ℃，超聲時(shí)間20 min，連續(xù)提取2次。此條件下發(fā)菜粗多糖的提取率為7.369%，證明超聲波方法可以快速、大量提取發(fā)菜多糖。

關(guān)鍵詞：超聲波提??；發(fā)菜多糖；工藝；單因素試驗(yàn)；正交試驗(yàn)

中圖分類號(hào)：TS245 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-1161（2014）03-0054-03

發(fā)菜，學(xué)名發(fā)狀念珠藻，是一種陸生絲狀藍(lán)細(xì)菌，因其色黑而細(xì)長(zhǎng)、似人的頭發(fā)而得名。發(fā)菜口味鮮美并具有極高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，含有豐富的蛋白質(zhì)以及人體所必需的八種氨基酸和各種維生素；同時(shí)，其也是一味極好的藥材，具有平肝潛陽(yáng)、清腸止痢的功效。超聲波作為一種新型的提取技術(shù)在天然物質(zhì)的提取中已得到廣泛應(yīng)用，本文利用超聲波法進(jìn)行發(fā)菜多糖提取工藝的研究。

1 材料與方法

1.1 試劑及儀器

發(fā)菜（產(chǎn)于可可西里）；葡萄糖（AP），無(wú)水乙醇，濃硫酸（AP），6%苯酚溶液；超聲波清洗機(jī)，可見—紫外分光光度計(jì)UV2000，高速冷凍離心機(jī)AVANTI J-E。

1.2 單因素試驗(yàn)

選取提取時(shí)間、料液比、超聲波功率和提取溫度4個(gè)因素，研究它們對(duì)發(fā)菜多糖提取率的影響。

1.2.1 提取時(shí)間的影響 準(zhǔn)確稱量1.00 g發(fā)菜樣品4份，分別加入30 mL蒸餾水，置于超聲波清洗儀中，分別提取20，30，40，50 min，濾出殘?jiān)?，提?次，將提取液移置到100 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL加入無(wú)水乙醇10 mL，在5 000 r/min條件下離心20 min，取沉淀加水溶解于50 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL于比色管中，加入1 mL 6%苯酚溶液和7 mL濃硫酸，40 ℃熱水浴30 min后在冰水浴中放置5 min，測(cè)其吸光度。

1.2.2 料液比的影響 準(zhǔn)確稱量1.00 g發(fā)菜樣品5份，分別加入20，30，40，50，60 mL蒸餾水，置于超聲波清洗儀中，超聲波提取30 min，濾出殘?jiān)?，提?次，將提取液移置到100 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL加入無(wú)水乙醇10 mL，在5 000 r/min條件下離心20 min，取沉淀加水溶解于50 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL于比色管中，加入1 mL 6%苯酚溶液和7 mL濃硫酸，40 ℃熱水浴30 min后在冰水浴中放置5 min，測(cè)其吸光度。

1.2.3 超聲波功率的影響 準(zhǔn)確稱量1.00 g發(fā)菜樣品5份，分別加入40 mL蒸餾水，置于超聲波清洗儀中，在超聲波功率分別為50%，60%，70%，80%，90%條件下提取30 min，濾出殘?jiān)?，提?次，將提取液移置到100 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL加入無(wú)水乙醇10 mL，在5 000 r/min條件下離心20 min，取沉淀加水溶解于50 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL于比色管中，加入1 mL 6%苯酚溶液和7 mL濃硫酸，40 ℃熱水浴30 min后在冰水浴中放置5 min，測(cè)其吸光度。

1.2.4 提取溫度的影響 準(zhǔn)確稱量1.00 g發(fā)菜樣品5份，分別加入40 mL蒸餾水，置于超聲波清洗儀中，在40，50，60，70，80，90 ℃下分別超聲波提取30 min，濾出殘?jiān)?，提?次，移置到100 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL加入無(wú)水乙醇10 mL，在5 000 r/min條件下離心20 min，取沉淀加水溶解于50 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL于比色管中，加入1 mL 6%苯酚溶液和7 mL濃硫酸，40 ℃熱水浴30 min后在冰水浴中放置5 min，測(cè)其吸光度。

1.3 正交試驗(yàn)

1.3.1 正交設(shè)計(jì) 采用單因素試驗(yàn)的4個(gè)因素：提取溫度（A），提取時(shí)間（B），料液比（C），超聲功率（D）。每個(gè)因素設(shè)3個(gè)水平，依據(jù)L9（34）正交表（見表1）進(jìn)行試驗(yàn)。

1.3.2 樣品液的制備 分別取發(fā)菜樣品9份，每份精確稱取1 g置于具塞瓶中，按正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案，進(jìn)行超聲波提取，過(guò)濾；將濾液移置于100 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，精確量取2 mL加入無(wú)水乙醇10 mL；離心，取沉淀加水溶解，移置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，作為備用樣品液。

1.3.3 對(duì)照樣品溶液的制備 精確稱取在105 ℃干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖60 mg，置于100 mL容量瓶中加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液（每100 mL中含無(wú)水葡萄糖0.6 mg）。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精確量取對(duì)照品液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL分別置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻；精確吸取上述各溶液2 mL置具塞試管中，分別加入6%苯酚溶液1 mL混勻，再迅速加入硫酸7 mL，搖勻，于40 ℃水浴中保溫30 min后置冰水浴中5 min，取出；另精確吸取蒸餾水2.0 mL作為空白對(duì)照；在490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以濃度c（μg/mL）與吸光度作線性回歸，回歸方程為：c=0.229×A+0.094，R2=0.983。標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。

1.3.5 樣品含量測(cè)定 精確吸取樣品溶液2.0 mL，加入6%苯酚溶液1 mL混勻，再迅速加入硫酸7 mL搖勻，于40 ℃水浴中保溫30 min后置冰水浴中5 min，取出；另精確吸取蒸餾水2.0 mL作為空白對(duì)照；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣品溶液中發(fā)菜多糖含量，按干燥品計(jì)算。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取時(shí)間對(duì)發(fā)菜多糖提取率的影響

2.2 料液比對(duì)發(fā)菜多糖提取率的影響

2.3 超聲波功率對(duì)發(fā)菜多糖提取率的影響

2.4 提取溫度對(duì)發(fā)菜多糖提取率的影響

2.5 超聲波提取發(fā)菜多糖的工藝優(yōu)化

3 結(jié)論

通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化得到的超聲波法提取發(fā)菜多糖的最佳工藝條件為：提取溫度60 ℃、提取時(shí)間20 min、料液比1∶50、功率100 W，提取2次，發(fā)菜粗多糖提取率為7.369%。此工藝可以快速、大量提取發(fā)菜多糖，有利于發(fā)菜的深加工。

摘要：研究超聲波法提取發(fā)菜多糖的工藝。通過(guò)單因素試驗(yàn)研究料液比、提取溫度、提取時(shí)間和超聲波功率對(duì)提取工藝的影響，采用正交試驗(yàn)L9（34）優(yōu)化超聲波提取工藝。確定最佳提取條件為：以水為提取溶劑，料液比1∶50，超聲波功率100 W，溫度60 ℃，超聲時(shí)間20 min，連續(xù)提取2次。此條件下發(fā)菜粗多糖的提取率為7.369%，證明超聲波方法可以快速、大量提取發(fā)菜多糖。

關(guān)鍵詞：超聲波提取；發(fā)菜多糖；工藝；單因素試驗(yàn)；正交試驗(yàn)

中圖分類號(hào)：TS245 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-1161（2014）03-0054-03

發(fā)菜，學(xué)名發(fā)狀念珠藻，是一種陸生絲狀藍(lán)細(xì)菌，因其色黑而細(xì)長(zhǎng)、似人的頭發(fā)而得名。發(fā)菜口味鮮美并具有極高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，含有豐富的蛋白質(zhì)以及人體所必需的八種氨基酸和各種維生素；同時(shí)，其也是一味極好的藥材，具有平肝潛陽(yáng)、清腸止痢的功效。超聲波作為一種新型的提取技術(shù)在天然物質(zhì)的提取中已得到廣泛應(yīng)用，本文利用超聲波法進(jìn)行發(fā)菜多糖提取工藝的研究。

1 材料與方法

1.1 試劑及儀器

發(fā)菜（產(chǎn)于可可西里）；葡萄糖（AP），無(wú)水乙醇，濃硫酸（AP），6%苯酚溶液；超聲波清洗機(jī)，可見—紫外分光光度計(jì)UV2000，高速冷凍離心機(jī)AVANTI J-E。

1.2 單因素試驗(yàn)

選取提取時(shí)間、料液比、超聲波功率和提取溫度4個(gè)因素，研究它們對(duì)發(fā)菜多糖提取率的影響。

1.2.1 提取時(shí)間的影響 準(zhǔn)確稱量1.00 g發(fā)菜樣品4份，分別加入30 mL蒸餾水，置于超聲波清洗儀中，分別提取20，30，40，50 min，濾出殘?jiān)?，提?次，將提取液移置到100 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL加入無(wú)水乙醇10 mL，在5 000 r/min條件下離心20 min，取沉淀加水溶解于50 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL于比色管中，加入1 mL 6%苯酚溶液和7 mL濃硫酸，40 ℃熱水浴30 min后在冰水浴中放置5 min，測(cè)其吸光度。

1.2.2 料液比的影響 準(zhǔn)確稱量1.00 g發(fā)菜樣品5份，分別加入20，30，40，50，60 mL蒸餾水，置于超聲波清洗儀中，超聲波提取30 min，濾出殘?jiān)?，提?次，將提取液移置到100 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL加入無(wú)水乙醇10 mL，在5 000 r/min條件下離心20 min，取沉淀加水溶解于50 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL于比色管中，加入1 mL 6%苯酚溶液和7 mL濃硫酸，40 ℃熱水浴30 min后在冰水浴中放置5 min，測(cè)其吸光度。

1.2.3 超聲波功率的影響 準(zhǔn)確稱量1.00 g發(fā)菜樣品5份，分別加入40 mL蒸餾水，置于超聲波清洗儀中，在超聲波功率分別為50%，60%，70%，80%，90%條件下提取30 min，濾出殘?jiān)?，提?次，將提取液移置到100 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL加入無(wú)水乙醇10 mL，在5 000 r/min條件下離心20 min，取沉淀加水溶解于50 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL于比色管中，加入1 mL 6%苯酚溶液和7 mL濃硫酸，40 ℃熱水浴30 min后在冰水浴中放置5 min，測(cè)其吸光度。

1.2.4 提取溫度的影響 準(zhǔn)確稱量1.00 g發(fā)菜樣品5份，分別加入40 mL蒸餾水，置于超聲波清洗儀中，在40，50，60，70，80，90 ℃下分別超聲波提取30 min，濾出殘?jiān)?，提?次，移置到100 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL加入無(wú)水乙醇10 mL，在5 000 r/min條件下離心20 min，取沉淀加水溶解于50 mL容量瓶中，加水定容；取2 mL于比色管中，加入1 mL 6%苯酚溶液和7 mL濃硫酸，40 ℃熱水浴30 min后在冰水浴中放置5 min，測(cè)其吸光度。

1.3 正交試驗(yàn)

1.3.1 正交設(shè)計(jì) 采用單因素試驗(yàn)的4個(gè)因素：提取溫度（A），提取時(shí)間（B），料液比（C），超聲功率（D）。每個(gè)因素設(shè)3個(gè)水平，依據(jù)L9（34）正交表（見表1）進(jìn)行試驗(yàn)。

1.3.2 樣品液的制備 分別取發(fā)菜樣品9份，每份精確稱取1 g置于具塞瓶中，按正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案，進(jìn)行超聲波提取，過(guò)濾；將濾液移置于100 mL容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，精確量取2 mL加入無(wú)水乙醇10 mL；離心，取沉淀加水溶解，移置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，作為備用樣品液。

1.3.3 對(duì)照樣品溶液的制備 精確稱取在105 ℃干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖60 mg，置于100 mL容量瓶中加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液（每100 mL中含無(wú)水葡萄糖0.6 mg）。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精確量取對(duì)照品液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL分別置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻；精確吸取上述各溶液2 mL置具塞試管中，分別加入6%苯酚溶液1 mL混勻，再迅速加入硫酸7 mL，搖勻，于40 ℃水浴中保溫30 min后置冰水浴中5 min，取出；另精確吸取蒸餾水2.0 mL作為空白對(duì)照；在490 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以濃度c（μg/mL）與吸光度作線性回歸，回歸方程為：c=0.229×A+0.094，R2=0.983。標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。

1.3.5 樣品含量測(cè)定 精確吸取樣品溶液2.0 mL，加入6%苯酚溶液1 mL混勻，再迅速加入硫酸7 mL搖勻，于40 ℃水浴中保溫30 min后置冰水浴中5 min，取出；另精確吸取蒸餾水2.0 mL作為空白對(duì)照；從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣品溶液中發(fā)菜多糖含量，按干燥品計(jì)算。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取時(shí)間對(duì)發(fā)菜多糖提取率的影響

2.2 料液比對(duì)發(fā)菜多糖提取率的影響

2.3 超聲波功率對(duì)發(fā)菜多糖提取率的影響

2.4 提取溫度對(duì)發(fā)菜多糖提取率的影響

2.5 超聲波提取發(fā)菜多糖的工藝優(yōu)化

3 結(jié)論

通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化得到的超聲波法提取發(fā)菜多糖的最佳工藝條件為：提取溫度60 ℃、提取時(shí)間20 min、料液比1∶50、功率100 W，提取2次，發(fā)菜粗多糖提取率為7.369%。此工藝可以快速、大量提取發(fā)菜多糖，有利于發(fā)菜的深加工。