肖雪紅

（寶雞職業(yè)技術(shù)學院 化學工程系，陜西 寶雞 721013）

硫酸沙丁胺醇是一種長效β2-受體激動劑，臨床上用于緩解由支氣管哮喘、急性支氣管炎、喘息性支氣管炎或肺氣腫等氣道阻塞性疾病引起的呼吸困難等癥狀.目前，硫酸沙丁胺醇的檢測方法主要以采用紫外檢測器或二極管陣列檢測器的液相色譜法為主［1-7］.本文作者使用反相-高效液相色譜-電化學法檢測（RPHPLC-ECD）測定了片劑中的硫酸沙丁胺醇的含量.

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

安科TCL-16C離心機（上海蘭科儀器有限公司）；HP-1100高效液相色譜儀（美國Agilent公司），包括四元梯度泵（G1311A），二極管陣列檢測器（G1315A）和電化學檢測器（1049A），色譜數(shù)據(jù)通過HP工作站采集獲得；DL-180型超聲清洗器（象山縣石浦海天電子儀器廠）；IX-501型pH計（北京大學化學系）；WG-2003臺式干燥箱（重慶試驗設(shè)備廠一分廠）；Milli-QG超純水制備儀（美國Millipore公司）.

硫酸沙丁胺醇購自美國Sigma公司，純度≥99%；甲醇為色譜純；冰醋酸為分析純；所用水為超純水；硫酸沙丁胺醇片由江蘇亞邦愛普森搖曳有限公司生產(chǎn).

1.2 溶液制備

1.2.1 對照品溶液的制備

準確稱取硫酸沙丁胺醇對照品適量，置于25mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容，振蕩均勻后得硫酸沙丁胺醇（3.70×102mg·L-1）的單一對照品儲備液.其他不同濃度的各對照品溶液由單一儲備液稀釋得到.

1.2.2 供試品溶液的制備

稱取適量散裝硫酸沙丁胺醇藥片，研細，取其粉末0.040 0g置于50mL錐形瓶中，準確加入甲醇25.00 mL，稱定其重量.用頻率為35%±5%kHz，功率為180W超聲儀超聲10min，取出，放至室溫后再稱定重量，然后用甲醇補足減失的重量，振蕩均勻.取出3mL溶液于5mL離心試管中，3 000r·min-1下離心5 min，吸取上清液并用0.45μm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液.

1.3 色譜條件

采用長度為150mm、外徑為4.6mm和內(nèi)徑為5.0μm的Zorbax SB-C18色譜柱（美國Agilent公司）；流動相包括（A）甲醇、（B）水-冰醋酸（pH＝3.00）.采用梯度洗脫，其洗脫程序如下：0min時A-B（體積比10∶90），10min時A-B（體積比40∶60），流速為1.0mL·min-1；ECD的工作電位為1.0V，柱溫為30℃.按上述條件獲得的對照品（a）和樣品（b）的色譜圖見圖1.硫酸沙丁胺醇的保留時間為4.41min.

圖1 硫酸沙丁胺醇對照品（a）和樣品（b）色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of salbutamol sulfate（a）and sample（b）

2 結(jié)果與討論

2.1 線性關(guān)系考察

準確移取“1.2.1”項下所配制的一定體積的硫酸沙丁胺醇對照品儲備液于10mL容量瓶中，用甲醇定容，配制硫酸沙丁胺醇濃度分別為0.944，8.44，16.9，33.8mg·L-1的系列對照品溶液，用0.45μm的微孔濾膜過濾.取對照品溶液10.0μL，按所選色譜條件進樣，平行測定3次，以平均峰面積積分值Y對質(zhì)量濃度w（mg·L-1）進行線性回歸，獲得硫酸沙丁胺醇的回歸方程.其相關(guān)參數(shù)、相關(guān)系數(shù)、線性范圍見表1.結(jié)果表明：硫酸沙丁胺醇在0.944～33.8mg·L-1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好.

表1 硫酸沙丁胺醇的斜率、截距、相關(guān)系數(shù)、線性范圍和檢出限（n＝3）Table 1 Slope，intercept，linear ranges and limit of detection of salbutamol sulfate（n＝3）

2.2 加樣回收率實驗

準確稱取已知含量的硫酸沙丁胺醇粉末9份，每份10mg，將其分別置于25mL容量瓶中，每3份為一組.向三組硫酸沙丁胺醇樣品中分別準確加入濃度為2.7×102mg·L-1的硫酸沙丁胺醇對照品溶液0.6 mL，0.1mL和0.02mL.按照已選定好的方法制備溶液后，按照本實驗中所描述的色譜條件進樣，進樣量為10.0μL，重復(fù)進樣3次，采用外標法計算加入對照品后供試品溶液中硫酸沙丁胺醇的含量，三種不同濃度的樣品加樣回收率及相對標準偏差如表2所示.

表2 硫酸沙丁胺醇的加標回收率（n＝3）Table 2 Recoveries of salbutamol sulfate（n＝3）

2.3 精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性實驗

精密量取一定體積的“1.2.1”項下所配制的硫酸沙丁胺醇對照品儲備液加入10mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成對照品溶液，用0.45μm的微孔濾膜過濾.按照本實驗中所描述的對照品溶液的制備方法和所選擇的色譜條件進樣，連續(xù)測定6次，每次10.0μL，計算硫酸沙丁胺醇的含量的RSD為4.6%.

準確稱取硫酸沙丁胺醇片劑粉末（0.010 0g）5份，根據(jù)“1.2.2”項所述方法制備溶液后，依照“1.3”項色譜條件下進行分析，計算硫酸沙丁胺醇的含量的RSD為2.1%.

對供試品溶液在8h之內(nèi)每隔1h進樣10.0μL，記錄色譜峰面積，測得硫酸沙丁胺醇的含量的RSD為1.2%；對供試品溶液在8d內(nèi)每隔24h進樣10.0μL，記錄色譜峰面積，測得硫酸沙丁胺醇的峰面積積分值的RSD為3.5%.

2.4 樣品分析

分別稱取不同批號的藥片三份，依照“1.2.2”項方法制備供試品溶液，移取10.0μL，按照選定好的色譜條件測定硫酸沙丁胺醇的峰面積，采用標準曲線法計算其含量，結(jié)果見表3.

表3 樣品中硫酸沙丁胺醇含量測定結(jié)果Table 3 Determination results of salbutamol sulfate in sample /（mg·g-1，n＝3）

2.5 提取條件的選擇

考察了水、25%甲醇、50%甲醇、75%甲醇和甲醇作為提取溶劑對提取效率的影響.按照“1.2溶液制備”中“1.2.2”項所述操作進行提取，然后按照“1.3”項中的色譜條件測定.結(jié)果表明，隨著甲醇濃度的增加，硫酸沙丁胺醇的峰面積逐漸增加.同時，考察了提取時間為10，20，30，40和50min時對被測物質(zhì)提取效率的影響.結(jié)果表明，隨著超聲提取時間的增加，硫酸沙丁胺醇的峰面積并未明顯增加.實驗中，選擇甲醇為提取溶劑，超聲提取時間為10min.

2.6 醋酸水溶液pH的影響

實驗中，考察了醋酸水溶液pH為2.62，3.00，3.50，4.00，5.02和7.00時，對硫酸沙丁胺醇色譜分離效果的影響.結(jié)果表明，隨著pH的增加，容量因子幾乎無任何變化，硫酸沙丁胺醇的保留時間也無明顯變化.同時，考慮到色譜柱所能承受的最高酸度，實驗中采用醋酸水溶液的pH為3.00.

2.7 工作電位的選擇

吸取硫酸沙丁胺醇的對照品儲備液500μL于10mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，按照“1.3”項所述色譜條件，分別進樣10.0μL，考察電位范圍為0.3～1.1 V時硫酸沙丁胺醇在電極上的響應(yīng)情況，獲得相應(yīng)的電流電位曲線（見圖2）.由圖2可見，隨著電位的增加，硫酸沙丁胺醇的電化學響應(yīng)一直在增加.同時，考慮到電壓過大，基線噪音增加，信噪比降低，實驗中選擇的工作電位為1.0V（相對于Ag/AgCl參比電極）.

圖2 硫酸沙丁胺醇的電流電位曲線Fig.2 Curves of current versus potential for the oxidation salbutamol sulfate

3 結(jié)論

建立了市售片劑中硫酸沙丁胺醇的高效液相色譜-電化學測定新方法.與文獻報道［2-3］的方法相比，本法具有線性范圍寬的優(yōu)點.

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典，二部［M］.北京：化學工業(yè)出版社，2005：734.

［2］劉 偉，劉 玲.高效液相色譜法測定沙丁胺醇膠囊的含量［J］.中國藥業(yè)，2006，15（14）：26-26.

［3］蘇 茜.HPLC測定復(fù)方硫酸沙丁胺醇雙層片含量的研究［J］.現(xiàn)代食品與藥品雜志，2006，16（4）：19-21.

［4］范 理，王 彤，田 靜，等.固相萃取-GC-MS法測定飼料中的沙丁胺醇［J］.分析測試學報，2004，23（S1）：244-248.

［5］尚紅霞，盧業(yè)玉，黃寶華，等.固相萃取-高效液相色譜法同時測定克倫特羅和沙丁胺醇［J］.分析科學學報，2003，19（2）：145-147.

［6］ZHANG J L，XU Y X，DI X，et al.Quantitation of salbutamol in human urine by liquid chromatography-electrospray ionization mass spectrometry［J］.J Chromatogr B，2006，831（1/2）：328-332.

［7］DOL I，KNOCHEN M.Flow-injection spectrophotometric determination of salbutamol with 4-aminoantipyrine［J］.Talanta，2004，64（5）：1233-1236.