孫安民，王 偉

（1.開封市中心醫(yī)院 檢驗科，河南 開封475000；2.新鄉(xiāng)市新醫(yī)三附院 檢驗科，河南 新鄉(xiāng)453000）

內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌菌體中存在的毒性物質(zhì)的總稱。是革蘭氏陰性菌細胞壁成分，由菌體裂解后釋出的毒素，又稱之為“熱原”。其化學(xué)成分是磷脂多糖－蛋白質(zhì)復(fù)合物，其毒性部分主要為類脂質(zhì)A[1]。內(nèi)毒素位于細胞壁的最外層、覆蓋于細胞壁的黏肽上。各種細菌內(nèi)毒素的毒性作用較弱，作用機理大致相同，可引起發(fā)熱、微循環(huán)障礙、內(nèi)毒素休克及播散性血管內(nèi)凝血等。革蘭氏陰性菌菌血癥占相當(dāng)大的比例，越來越引起人們的重視，對菌血癥實驗室診斷的傳統(tǒng)方法是細菌培養(yǎng)，這種方法準(zhǔn)確率和特異性都很高，但較費時，容易延誤病情。近年來發(fā)展起來的內(nèi)毒素檢測具有速度快，敏感度高，特異性強，是一種能夠早期快速診斷革蘭氏陰性菌敗血癥理想的實驗室檢測方法[2]。

1 資料與方法

1.1 一般資料 采集我院臨床上疑似敗血癥患者200例?；颊呔衅鸩〖斌E、畏寒或寒戰(zhàn)、煩躁不安、神志不清、呼吸急促、心率加快、血壓下降等典型的敗血癥癥狀，其中男120例，女80例，平均年齡（42±15）歲。正常對照組200例，來自我院正常職工體檢，男122例，女78例，平均年齡（40±16）歲。

1.2 標(biāo)本采集 用專用無熱原抗凝管采血2ml，搖勻，3 000r／min離心1分鐘。如果不能馬上測定，可以先吸出富含血小板的血漿至別一無熱原小瓶中，放入－30℃的冰箱中保存，標(biāo)本無溶血、黃疸和乳糜。同時采10ml血液加入血培養(yǎng)瓶，輕輕搖勻，放入血培養(yǎng)箱孵育。

1.3 方法 內(nèi)毒素在 MB－80微生物檢測儀上測定[3]，吸取0.1ml富含血小板血漿至0.9ml標(biāo)本處理液中，搖勻，放入70℃干熱器中溫育10分鐘，再轉(zhuǎn)入冰浴槽冷卻5分鐘。取冷卻后的處理液0.2 ml加入反應(yīng)主劑中，輕搖后吸取0.2ml加入平底透明玻璃管中，放入MB－80微生物檢測儀上進行檢測，正常參考值＜10pg／ml。血培養(yǎng)孵箱溫度為37℃，血培養(yǎng)瓶有細菌生長時自動報警，陽性瓶涂片革蘭氏染色，油鏡下查找細菌，記錄鏡檢結(jié)果。無細菌生長者繼續(xù)培養(yǎng)，第5天發(fā)陰性報告。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采取SPSS15統(tǒng)計學(xué)軟件處理，配對計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，非配對計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s），組間均數(shù)比較采用非配對t檢驗，P＜0.05，差別具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 內(nèi)毒素測定和血培養(yǎng)結(jié)果，見表1。

表1 內(nèi)毒素測定和血培養(yǎng)結(jié)果

2.2 血培養(yǎng)陽性者經(jīng)血涂片染色鏡檢分為G–菌組和非G–菌組，內(nèi)毒素及血培養(yǎng)結(jié)果見表2。

表2 血培養(yǎng)陽性者內(nèi)毒素測定結(jié)果

2.3 從表1和表2可知，疑似敗血癥組內(nèi)毒素測定值、細菌培養(yǎng)陽性數(shù)與正常對照組比較有明顯差異（P＜0.01），具有統(tǒng)計學(xué)意義。在疑似敗血癥組中，細菌培養(yǎng)陽性者共185例，分成G－菌組與非G－菌組，二者內(nèi)毒素測定值存在明顯差異（P＜0.01），具有統(tǒng)計學(xué)意義，其G－菌占111例。

3 討論

3.1 敗血癥是指致病菌或條件致病菌侵入血循環(huán)，并在血中生長繁殖，產(chǎn)生毒素而發(fā)生的急性全身性感染。臨床上主要表現(xiàn)為寒戰(zhàn)、高熱，心動過速，呼吸急促，皮疹，關(guān)節(jié)腫痛和肝脾腫大等，嚴重者可出現(xiàn)急性器官功能障礙，稱之為重型敗血癥[4]。引起敗血癥的細菌多為革蘭氏陰性桿菌和革蘭氏陽性球菌，還有部分厭氧菌。本實驗中革蘭氏陰性桿菌占60%，是引起敗血癥的主要細菌[5]。

3.2 內(nèi)毒素是革蘭氏陰性細菌細胞壁中的一種成分，稱為脂多糖。內(nèi)毒素只有當(dāng)細菌死亡溶解或用人工方法破壞菌細胞后才釋放出來，所以叫做內(nèi)毒素，其毒性成分主要為類脂質(zhì)A。正常健康人體內(nèi)毒素含量甚微，定性測定為陰性，定量測定＜10pg／ml，一旦有細菌進入血液，引起菌血癥或敗血癥，就有可能引起內(nèi)毒素血癥，本實驗疑似敗血癥組內(nèi)毒素為（183.25±41.05）pg／ml，明顯高于正常對照組。

3.3 內(nèi)毒素血癥分為內(nèi)源性和外源性兩大類[6]。內(nèi)毒素血癥臨床癥狀主要決定于宿主對內(nèi)毒素的抵抗力。全身網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)功能障礙，免疫機能下降，腸道吸收的內(nèi)毒素過多而超過機體清除能力，引起內(nèi)源性內(nèi)毒素血癥；人體免疫力正常，局部組織或器官由于創(chuàng)傷感染導(dǎo)致內(nèi)毒素入血，引起外源性內(nèi)毒素血癥。內(nèi)源性內(nèi)毒素血癥較多見，本實驗所研究的敗血癥病例全部為內(nèi)源性內(nèi)毒素血癥。

3.4 引起敗血癥的細菌主要有以下幾類[7]，革蘭氏陰性菌，革蘭氏陽性菌，厭氧菌和真菌，只有革蘭氏陰性菌和部分非芽胞厭氧菌產(chǎn)生內(nèi)毒素，所以對內(nèi)毒素的測定主要針對革蘭氏陰性菌和部分厭氧菌[8]。

3.5 對內(nèi)毒素的檢測主要包括兩大類：一是凝膠法，二是光度測定法，以凝膠法為準(zhǔn)[9]。本實驗內(nèi)毒素測定采用凝膠測定法，原理是鱟實驗[10]：鱟血液中的細胞溶解物可以與內(nèi)毒素形成凝膠反應(yīng)，反應(yīng)速度和凝膠的堅固程度與內(nèi)毒素的濃度有關(guān)。

3.6 本實驗中非G－菌組內(nèi)毒素為（24.30±9.32）pg／ml，明顯高于正常對照組，是由于革蘭氏陽性菌致病因子的協(xié)同效應(yīng)引起[11]。以金黃色葡萄球菌為代表的革蘭氏陽性菌細胞壁成分十分復(fù)雜，其中PepG和LTA具有很強的“內(nèi)毒素樣”生物活性，所以革蘭氏陽性菌不產(chǎn)生內(nèi)毒素，但也會使血中內(nèi)毒素測定結(jié)果輕度增高并引起相應(yīng)癥狀。

[1]霍啟錄，邵紅霞.內(nèi)毒素的鱟試驗法檢測與臨床應(yīng)用[J].國外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊，2004，25（1）：94.

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