楊修鎮(zhèn)

(山東省獸藥質(zhì)量檢驗所;山東省畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測與風險評估重點實驗室，濟南250022)

止痢散收載于《中華人民共和國獸藥典》二○一○年版二部，具有清熱解毒，化濕止痢的功能［1］。處方中含有雄黃，雄黃屬有毒中藥材，主要成分是二硫化二砷，其中夾雜有劇毒可溶性砷鹽三氧化二砷［2］。三價砷可能與多種重要的巰基酶結(jié)合，導致酶失活，從而阻止細胞的正常呼吸和代謝，造成細胞損害［3］。含雄黃制劑在加工處理過程中二硫化二砷在80℃以上會部分轉(zhuǎn)化為三氧化二砷［4］，雄黃粉碎的較好方法為水飛法［5］，但有些獸藥廠仍采用直接干粉碎法來加工含雄黃制劑，致使其三氧化二砷含量較高。止痢散標準中雖有三氧化二砷檢查法，但該檢查法為古蔡氏法，無法精確定量且當樣品所顯砷斑與標準砷斑較為接近時僅憑肉眼是難以判定的。為了更好的控制本品質(zhì)量，研究對止痢散中三氧化二砷的含量測定方法進行了探索。

1 儀器和材料

Afs－930雙道原子熒光光度計(北京吉天儀器有限公司)，1000 μg/mL砷標準儲備液(國家有色金屬及電子材料分析測試中心，12530－1)。止痢散(批號 2013080110、2013080111、2013080112 山東華爾康生物技術有限公司生產(chǎn)，批號201301112、201301113、201301114山東恒利生物制藥有限公司生產(chǎn)，批號 131201、131202、131203濰坊永昌藥業(yè)有限公司，批號 130801、130802、130803淄博昊威獸藥有限公司生產(chǎn))。鹽酸為優(yōu)級純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 儀器條件 根據(jù)參考文獻方法［6］，載流為3.0%鹽酸溶液，還原劑為含0.5%氫氧化鉀的1%硼氫化鉀溶液，氬氣載氣流量為600 mL/min，砷空心陰極燈電流為60 mA。

2.2 供試品溶液制備 根據(jù)參考文獻方法［1］，取止痢散約 1.4 g，精密稱定，加稀鹽酸(取鹽酸234 mL，加水稀釋至1000 mL，即得)20 mL，不斷攪拌30 min，濾過，殘渣用稀鹽酸洗滌2次，每次10 mL，攪拌10 min。洗液與濾液合并，置100 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置200 mL量瓶中加入硫脲2 g，加3.0%鹽酸溶液至刻度，搖勻，放置30 min以上，即得。

2.3 空白樣品溶液制備 按止痢散標準制法項根據(jù)處方制備不含雄黃的散劑并按供試品溶液制備方法制備空白樣品溶液。

2.4 工作曲線的繪制 取砷標準儲備液，用3.0%的鹽酸溶液逐級稀釋成含砷 0、10、20、40、80、100 ng/mL的系列工作標準溶液，每100 mL砷工作標準溶液加入硫脲1 g，搖勻，放置 30 min以上［6］，在上述儀器條件下進行測定，以熒光強度值(y)為縱坐標，砷工作標準溶液(x，ng/mL)為橫坐標，進行線性回歸分析，回歸方程為:y=141.77x －4.4368(r=0.9999)，結(jié)果表明砷元素進樣濃度在0～100 ng/mL范圍內(nèi)與熒光強度值呈良好的線性關系(圖1)。

圖1 砷元素進樣濃度與熒光強度值曲線圖

2.5 精密度試驗

2.5.1 儀器精密度試驗 取10 ng/mL砷工作標準溶液，注入原子熒光光度計，在上述儀器條件下進行測定，連續(xù)測定11次，熒光強度值RSD為1.1%，表明有儀器有良好的精密度。

2.5.2 重復性試驗 分別稱取同一止痢散樣品，按供試品溶液制備項制備樣品溶液，制備6份，分別注入原子熒光光度計，在上述儀器條件下進行測定，三氧化二砷含量(以砷計)RSD為1.6%，表明重復性好。

2.6 回收率試驗 分別取已知三氧化二砷含量的止痢散約0.7 g，精密稱定，加入 1000 μg/mL 砷標準儲備液0.25 mL，自“加稀鹽酸20 mL，不斷攪拌30 min”起按供試品溶液制備項制備樣品溶液，平行6份，注入原子熒光光度計，在上述儀器條件下進行測定，三氧化二砷(以砷計)平均回收率為95.3%，RSD 為1.9%，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗

2.7 檢出限與定量限 取空白樣品溶液，注入原子熒光光度計，在上述儀器條件下進行測定，連續(xù)測定11次，計算3倍11次空白樣品溶液測量值的標準偏差與工作曲線的斜率的比值［7］，得砷的檢出限為0.10 ng/mL。計算10倍11次空白樣品溶液測量值的標準偏差與工作曲線的斜率的比值，得砷的定量限為0.32 ng/mL。

2.8 耐用性試驗

2.8.1 供試品溶液的穩(wěn)定性 取同一供試品溶液，于制備后0、1、2、4、8、16、24、48 h 分別注入原子熒光光度計，在上述儀器條件下進行測定，熒光強度值的RSD為1.4%，表明樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8.2 儀器條件的微小變動 取同一供試品溶液，將載流調(diào)整為2.5%、3.5%鹽酸溶液;還原劑調(diào)整為含0.45%氫氧化鉀的0.95%硼氫化鉀溶液、含0.55%氫氧化鉀的1.05%硼氫化鉀溶液;將載氣流量調(diào)整為590、610 mL/min;砷空心陰極燈電流調(diào)整為55、65 mA，分別進行測定，三氧化二砷(以砷計)含量的相對相差為1.8%，表明儀器條件的微小變動對測量結(jié)果無明顯影響。

2.8.3 供試品溶液制備條件的微小變動 取同一止痢散樣品將稀鹽酸用量調(diào)整±5%，攪拌時間調(diào)整±5%，制備供試品溶液，分別進行測定，三氧化二砷(以砷計)含量的相對相差為1.5%，表明供試品溶液制備條件的微小變動對測量結(jié)果無明顯影響。

2.9 12 批樣品含量測定 取不同批號的止痢散，按供試品溶液制備方法制備樣品溶液，注入原子熒光光度計，在上述儀器條件下進行測定，計算止痢散中三氧化二砷的含量(以砷計)。12批止痢散中三氧化二砷(以砷計)含量在0.15～0.64 mg/g之間，結(jié)果見表2。

表2 12批樣品含量測定結(jié)果

3 討論與小結(jié)

測定止痢散中三氧化二砷的含量應首先排除二硫化二砷的干擾，傳統(tǒng)的干消解法、濕消解法以及微波消解法都無法有效實現(xiàn)三氧化二砷與二硫化二砷的分離，利用三氧化二砷易溶于稀鹽酸二硫化二砷不溶于稀鹽酸的性質(zhì)，參考止痢散標準中三氧化二砷檢查法制備供試品溶液避免了消解不完全、趕酸不徹底等因素的干擾，回收率大大提高。

古蔡氏法系以碘化鉀、氯化亞錫將高價砷還原為三價砷然后與鋅粒和鹽酸產(chǎn)生的新生態(tài)氫生成砷化氫氣體，再與溴化汞試紙生成黃色至橙色的色斑，色斑的深淺與砷的量呈一定的關系。該方法易于操作，但無法精確定量且用肉眼觀察難免受主觀影響。氫化物發(fā)生－原子熒光光譜法測砷系在鹽酸介質(zhì)中，硼氫化鉀將砷轉(zhuǎn)化為砷化氫，以氬氣作載氣將砷化氫導入石英爐原子化器中進行原子化，以砷特種空心陰極燈激發(fā)出熒光，熒光強度在一定范圍內(nèi)與砷的含量成正比。該方法可精確定量且簡便、準確、重現(xiàn)性好。止痢散標準中三氧化二砷檢查法規(guī)定供試品所顯砷斑顏色不得深于標準砷斑，但130803批樣品在使用古蔡氏法檢查時樣品所顯砷斑與標準砷斑較為接近難以判定結(jié)果。采用氫化物發(fā)生－原子熒光光譜法測定12批止痢散中三氧化二砷(以砷計)含量在0.15～0.64 mg/g之間，根據(jù)標準換算止痢散中三氧化二砷含量(以砷計)不得超過0.71 mg/g，130803批樣品三氧化二砷(以砷計)含量為0.64 mg/g，并未超過標準的要求。

試驗建立的氫化物發(fā)生－原子熒光光譜法測定止痢散中三氧化二砷的含量的方法，為進一步控制止痢散的質(zhì)量提供了依據(jù)。

［1］中國獸藥典委員會﹒中華人民共和國獸藥典二○一○年版二部［S］.

［2］劉小蘭﹒中國藥典雄黃炮制方法與中成藥三氧化二砷含量［J］.北京中醫(yī)，2000，19(1):42－44.

［3］徐智，黃可龍﹒砷的代謝及毒性機制的相關性研究［J］.藥學專論，2009，18(12):19 －21.

［4］潘雪英﹒探討溫度對雄黃中三氧化二砷含量的影響［J］.中國藥師，2005，8(9):797 －799.

［5］原思通，張廣強﹒雄黃炮制新工藝的探討［J］.中成藥，1996，18(1):22－23.

［6］方躍強，馬冰潔，徐群英，等.氫化物原子熒光法測定生活飲用水中砷的不確定度評價［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2008，18(3):542－543.

［7］王 濱，王耀成，江永圣.氫化物發(fā)生原子熒光法測定食品中無機砷［J］.理化檢驗 －化學分冊，2004，40(11):687 －688.