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        波紋巴非蛤活性肽的體外抗氧化活性

        2014-11-22 20:01:16林麗云
        江蘇農業(yè)科學 2014年10期

        摘要:研究波紋巴非蛤活性肽體外清除自由基的作用,以實驗室自制的波紋巴非蛤活性肽(27 406~69 000 u)為原料,測定其對羥自由基、超氧自由基、過氧化氫和亞硝酸根離子的清除能力。結果表明,當波紋巴非蛤活性肽的相對分子質量在40 000~45 000 u時,清除超氧自由基、過氧化氫、羥自由基和亞硝酸根的能力均達到最高峰。

        關鍵詞:生物活性肽;波紋巴非蛤;抗氧化活性

        中圖分類號: TS202.3文獻標志碼: A文章編號:1002-1302(2014)10-0298-02

        收稿日期:2013-12-06

        基金項目:韓山師范學院青年科學基金(編號:LQ200811)。

        作者簡介:林麗云(1982—),女,廣東潮州人,碩士,實驗師,從事食品生物技術研究。E-mail:leayun_lin@126.com??寡趸瘎┠軌虮Wo食物免受氧化損傷而變質,并且在人體的消化道內具有抗氧化作用,可以防止消化道發(fā)生氧化損傷;被人體吸收后,抗氧化劑可在機體其他組織器官內發(fā)揮作用。天然抗氧化劑具有較強的抗氧化活性和良好的食用安全性,因此在食品、保健品、藥品等領域已經展現出良好的應用前景。隨著海洋生物研究的深入和研究技術的提高,從海洋生物中尋找新的天然抗氧化劑已經成為海洋食品、藥物、保健品研究的重要目標之一。

        波紋巴非蛤(俗稱花甲)是我國重要的海洋貝類資源,營養(yǎng)豐富、肉質鮮美,同時具有很高的食療和藥用價值。本試驗以筆者所在實驗室自制的波紋巴非蛤活性肽為原料,通過測定波紋巴非蛤活性肽清除亞硝酸根、過氧化氫、超氧自由基和羥自由基4種物質的能力,以期測定其抗氧化活性,從而進一步檢驗波紋巴非蛤活性肽的抗氧化能力,以期為波紋巴非蛤活性肽的后續(xù)研究提供理論依據。

        1材料與方法

        1.1材料與試劑

        波紋巴非蛤活性肽,為筆者所在實驗室自制。

        主要試劑有茚三酮、酚酞、羅丹明B液、H2SO4、FeSO4、鄰苯三酚、Tis-HCl緩沖溶液(pH值8.0)、濃鹽酸、丙酮、NaNO2 標準溶液、0.01 mol/L藏紅T溶液、靛藍胭脂紅、銅(Ⅱ)溶液等,均為分析純。

        1.2試驗儀器

        UV-2102/PC/PCS型紫外分光光度計,上海尤尼科儀器有限公司;pHS-3C精密酸度計,上海虹益儀器有限公司;KA-1000飛鴿牌高速離心機;氣浴恒溫振蕩器,江蘇省金壇市宏華儀器廠;電子天平,北京賽多利斯儀器系統有限公司;分析天平,潮州凱譽生物有限公司。

        1.3試驗方法

        1.3.1波紋巴非蛤活性肽清除羥自由基(·HO)的能力

        1.3.1.1羥自由基的測定取2支10 mL的刻度試管,在1支管中分別加入2.5 mL羅丹明B液、0.8 mL硫酸溶液、1.5 mL FeSO4溶液、1.0 mL H2O2溶液,加蒸餾水稀釋至刻度處,搖勻并放置5 min后,置于1 cm比色皿中,用紫外分光光度計測定其吸收峰,確定其最大吸收波長為558 nm。然后用紫外分光光度計在558 nm處測定吸光度,計算其與空白參比的吸光度之差ΔD羥自由基。

        1.3.1.2羥自由基清除率的測定在10 mL具塞刻度試管中依次加入2.5 mL羅丹明B溶液、0.8 mL硫酸溶液、1.5 mL FeSO4溶液、1.0 mL H2O2溶液,搖勻并放置5 min后,加入 1 mL 波紋巴非蛤活性肽溶液(濃度10 mg/mL),加蒸餾水稀釋至刻度處,測定其吸光度D1;對照以溶劑代替,其余步驟同上,測定對照蒸餾水吸光度D對照1、空白體系(羅丹明B和H2SO4溶液)吸光度D空白1,計算清除率P1[1-6]:

        P1=D1-D對照1D空白1-D對照1×100%。

        1.3.2波紋巴非蛤活性肽清除超氧自由基能力的測定取5 mL 0.05 mol/L(pH值 8.0)的 Tis-HCl緩沖溶液,置于 25 ℃ 水浴中預熱20 min,然后分別加入波紋巴非蛤活性肽樣品液(蛋白濃度10 mg/mL)和0.4 mL 25 mol/L鄰苯三酚溶液,混勻后置于25 ℃水浴中反應4 min,再加入8 mol/L HCl終止反應,于299 nm處測定溶液的吸光度(D2)??瞻讓φ战M以相同體積的丙酮代替待測樣品,測定吸光度D空白2,計算清除率P2[2,5]:

        P2=D空白2-D2D空白2×100%。

        1.3.3波紋巴非蛤活性肽清除亞硝酸根離子能力的測定

        2.2波紋巴非蛤活性肽對超氧自由基離子的清除率

        由圖2可知,波紋巴非蛤活性肽具有較強的清除超氧自由基離子的能力,清除效果明顯,當相對分子質量在 43 000 u 左右時,達到最高峰,清除率達74%。

        2.3波紋巴非蛤活性肽清除亞硝酸根離子的能力

        由圖3可知,波紋巴非蛤活性肽清除亞硝酸根離子的能力較弱,相對分子質量在31 000~54 000 u時,清除率在10%以上;相對分子質量在43 000 u左右時,達到最高峰,清除率達25%。

        2.4波紋巴非蛤活性肽清除過氧化氫離子的能力

        由圖4可知,波紋巴非蛤活性肽清除過氧化氫離子的能力強,各階段的清除率均在10%以上,相對分子質量在 43 000 u 左右時達到最高峰,清除率在60%以上。

        2.5波紋巴非蛤活性肽清除4種離子的能力對比

        由圖5可知,波紋巴非蛤活性肽清除各種離子的能力為:超氧自由基>過氧化氫>羥自由基>亞硝酸根。波紋巴非蛤多肽液的相對分子質量在40 000~45 000 u時,清除4種離子的能力最強;當相對分子質量小于40 000 u時,隨著相對分子質量的增大,抗氧化活性增大;當相對分子質量大于 45 000 u 時,隨著相對分子質量的增大,抗氧化活性減小。

        3結論

        波紋巴非蛤活性肽應用于體外清除自由基的試驗中效果

        明顯。波紋巴非蛤活性肽對超氧自由基清除率最高達74%,對過氧化氫清除率最高達61.5%,對羥自由基清除率最高達45%,對亞硝酸根離子的清除率最高達24%。當波紋巴非蛤活性肽分子量在40 000~45 000 u時,其清除超氧自由基、過氧化氫、羥自由基和亞硝酸根的能力均達到最大。

        參考文獻:

        [1]范秀萍,吳紅棉,王婭楠,等. 波紋巴非蛤糖蛋白的分離提取及體外清除羥自由基活性的研究[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè),2008,34(1):138-140.

        [2]楊永芳,楊最素,丁國芳,等. 菲律賓蛤仔酶解寡肽的分離及體外抗氧化作用研究[J]. 中華中醫(yī)藥學刊,2011,29(5):1069-1072.

        [3]郁迪,許新建,楊最素,等. 菲律賓蛤仔木瓜蛋白酶水解物抗氧化活性研究[J]. 浙江海洋學院學報:自然科學版,2011,30(6):515-519.

        [4]白林山,王獻釗,李津晶. 靛藍胭脂紅-銅(Ⅱ)體系催化光度法測定雨水中微量過氧化氫[J]. 安徽工業(yè)大學學報:自然科學版,2007,24(2):159-162.

        [5]游麗君. 泥鰍蛋白抗氧化肽的分離純化及抗疲勞、抗癌功效研究[D]. 廣州:華南理工大學,2010:64-70.

        [6]閻欲曉,粟桂嬌,李小梅,等. 文蛤蛋白抗氧化活性肽的研究[J]. 食品工業(yè)科技,2007,28(12):121-123.

        摘要:研究波紋巴非蛤活性肽體外清除自由基的作用,以實驗室自制的波紋巴非蛤活性肽(27 406~69 000 u)為原料,測定其對羥自由基、超氧自由基、過氧化氫和亞硝酸根離子的清除能力。結果表明,當波紋巴非蛤活性肽的相對分子質量在40 000~45 000 u時,清除超氧自由基、過氧化氫、羥自由基和亞硝酸根的能力均達到最高峰。

        關鍵詞:生物活性肽;波紋巴非蛤;抗氧化活性

        中圖分類號: TS202.3文獻標志碼: A文章編號:1002-1302(2014)10-0298-02

        收稿日期:2013-12-06

        基金項目:韓山師范學院青年科學基金(編號:LQ200811)。

        作者簡介:林麗云(1982—),女,廣東潮州人,碩士,實驗師,從事食品生物技術研究。E-mail:leayun_lin@126.com??寡趸瘎┠軌虮Wo食物免受氧化損傷而變質,并且在人體的消化道內具有抗氧化作用,可以防止消化道發(fā)生氧化損傷;被人體吸收后,抗氧化劑可在機體其他組織器官內發(fā)揮作用。天然抗氧化劑具有較強的抗氧化活性和良好的食用安全性,因此在食品、保健品、藥品等領域已經展現出良好的應用前景。隨著海洋生物研究的深入和研究技術的提高,從海洋生物中尋找新的天然抗氧化劑已經成為海洋食品、藥物、保健品研究的重要目標之一。

        波紋巴非蛤(俗稱花甲)是我國重要的海洋貝類資源,營養(yǎng)豐富、肉質鮮美,同時具有很高的食療和藥用價值。本試驗以筆者所在實驗室自制的波紋巴非蛤活性肽為原料,通過測定波紋巴非蛤活性肽清除亞硝酸根、過氧化氫、超氧自由基和羥自由基4種物質的能力,以期測定其抗氧化活性,從而進一步檢驗波紋巴非蛤活性肽的抗氧化能力,以期為波紋巴非蛤活性肽的后續(xù)研究提供理論依據。

        1材料與方法

        1.1材料與試劑

        波紋巴非蛤活性肽,為筆者所在實驗室自制。

        主要試劑有茚三酮、酚酞、羅丹明B液、H2SO4、FeSO4、鄰苯三酚、Tis-HCl緩沖溶液(pH值8.0)、濃鹽酸、丙酮、NaNO2 標準溶液、0.01 mol/L藏紅T溶液、靛藍胭脂紅、銅(Ⅱ)溶液等,均為分析純。

        1.2試驗儀器

        UV-2102/PC/PCS型紫外分光光度計,上海尤尼科儀器有限公司;pHS-3C精密酸度計,上海虹益儀器有限公司;KA-1000飛鴿牌高速離心機;氣浴恒溫振蕩器,江蘇省金壇市宏華儀器廠;電子天平,北京賽多利斯儀器系統有限公司;分析天平,潮州凱譽生物有限公司。

        1.3試驗方法

        1.3.1波紋巴非蛤活性肽清除羥自由基(·HO)的能力

        1.3.1.1羥自由基的測定取2支10 mL的刻度試管,在1支管中分別加入2.5 mL羅丹明B液、0.8 mL硫酸溶液、1.5 mL FeSO4溶液、1.0 mL H2O2溶液,加蒸餾水稀釋至刻度處,搖勻并放置5 min后,置于1 cm比色皿中,用紫外分光光度計測定其吸收峰,確定其最大吸收波長為558 nm。然后用紫外分光光度計在558 nm處測定吸光度,計算其與空白參比的吸光度之差ΔD羥自由基。

        1.3.1.2羥自由基清除率的測定在10 mL具塞刻度試管中依次加入2.5 mL羅丹明B溶液、0.8 mL硫酸溶液、1.5 mL FeSO4溶液、1.0 mL H2O2溶液,搖勻并放置5 min后,加入 1 mL 波紋巴非蛤活性肽溶液(濃度10 mg/mL),加蒸餾水稀釋至刻度處,測定其吸光度D1;對照以溶劑代替,其余步驟同上,測定對照蒸餾水吸光度D對照1、空白體系(羅丹明B和H2SO4溶液)吸光度D空白1,計算清除率P1[1-6]:

        P1=D1-D對照1D空白1-D對照1×100%。

        1.3.2波紋巴非蛤活性肽清除超氧自由基能力的測定取5 mL 0.05 mol/L(pH值 8.0)的 Tis-HCl緩沖溶液,置于 25 ℃ 水浴中預熱20 min,然后分別加入波紋巴非蛤活性肽樣品液(蛋白濃度10 mg/mL)和0.4 mL 25 mol/L鄰苯三酚溶液,混勻后置于25 ℃水浴中反應4 min,再加入8 mol/L HCl終止反應,于299 nm處測定溶液的吸光度(D2)??瞻讓φ战M以相同體積的丙酮代替待測樣品,測定吸光度D空白2,計算清除率P2[2,5]:

        P2=D空白2-D2D空白2×100%。

        1.3.3波紋巴非蛤活性肽清除亞硝酸根離子能力的測定

        2.2波紋巴非蛤活性肽對超氧自由基離子的清除率

        由圖2可知,波紋巴非蛤活性肽具有較強的清除超氧自由基離子的能力,清除效果明顯,當相對分子質量在 43 000 u 左右時,達到最高峰,清除率達74%。

        2.3波紋巴非蛤活性肽清除亞硝酸根離子的能力

        由圖3可知,波紋巴非蛤活性肽清除亞硝酸根離子的能力較弱,相對分子質量在31 000~54 000 u時,清除率在10%以上;相對分子質量在43 000 u左右時,達到最高峰,清除率達25%。

        2.4波紋巴非蛤活性肽清除過氧化氫離子的能力

        由圖4可知,波紋巴非蛤活性肽清除過氧化氫離子的能力強,各階段的清除率均在10%以上,相對分子質量在 43 000 u 左右時達到最高峰,清除率在60%以上。

        2.5波紋巴非蛤活性肽清除4種離子的能力對比

        由圖5可知,波紋巴非蛤活性肽清除各種離子的能力為:超氧自由基>過氧化氫>羥自由基>亞硝酸根。波紋巴非蛤多肽液的相對分子質量在40 000~45 000 u時,清除4種離子的能力最強;當相對分子質量小于40 000 u時,隨著相對分子質量的增大,抗氧化活性增大;當相對分子質量大于 45 000 u 時,隨著相對分子質量的增大,抗氧化活性減小。

        3結論

        波紋巴非蛤活性肽應用于體外清除自由基的試驗中效果

        明顯。波紋巴非蛤活性肽對超氧自由基清除率最高達74%,對過氧化氫清除率最高達61.5%,對羥自由基清除率最高達45%,對亞硝酸根離子的清除率最高達24%。當波紋巴非蛤活性肽分子量在40 000~45 000 u時,其清除超氧自由基、過氧化氫、羥自由基和亞硝酸根的能力均達到最大。

        參考文獻:

        [1]范秀萍,吳紅棉,王婭楠,等. 波紋巴非蛤糖蛋白的分離提取及體外清除羥自由基活性的研究[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè),2008,34(1):138-140.

        [2]楊永芳,楊最素,丁國芳,等. 菲律賓蛤仔酶解寡肽的分離及體外抗氧化作用研究[J]. 中華中醫(yī)藥學刊,2011,29(5):1069-1072.

        [3]郁迪,許新建,楊最素,等. 菲律賓蛤仔木瓜蛋白酶水解物抗氧化活性研究[J]. 浙江海洋學院學報:自然科學版,2011,30(6):515-519.

        [4]白林山,王獻釗,李津晶. 靛藍胭脂紅-銅(Ⅱ)體系催化光度法測定雨水中微量過氧化氫[J]. 安徽工業(yè)大學學報:自然科學版,2007,24(2):159-162.

        [5]游麗君. 泥鰍蛋白抗氧化肽的分離純化及抗疲勞、抗癌功效研究[D]. 廣州:華南理工大學,2010:64-70.

        [6]閻欲曉,粟桂嬌,李小梅,等. 文蛤蛋白抗氧化活性肽的研究[J]. 食品工業(yè)科技,2007,28(12):121-123.

        摘要:研究波紋巴非蛤活性肽體外清除自由基的作用,以實驗室自制的波紋巴非蛤活性肽(27 406~69 000 u)為原料,測定其對羥自由基、超氧自由基、過氧化氫和亞硝酸根離子的清除能力。結果表明,當波紋巴非蛤活性肽的相對分子質量在40 000~45 000 u時,清除超氧自由基、過氧化氫、羥自由基和亞硝酸根的能力均達到最高峰。

        關鍵詞:生物活性肽;波紋巴非蛤;抗氧化活性

        中圖分類號: TS202.3文獻標志碼: A文章編號:1002-1302(2014)10-0298-02

        收稿日期:2013-12-06

        基金項目:韓山師范學院青年科學基金(編號:LQ200811)。

        作者簡介:林麗云(1982—),女,廣東潮州人,碩士,實驗師,從事食品生物技術研究。E-mail:leayun_lin@126.com??寡趸瘎┠軌虮Wo食物免受氧化損傷而變質,并且在人體的消化道內具有抗氧化作用,可以防止消化道發(fā)生氧化損傷;被人體吸收后,抗氧化劑可在機體其他組織器官內發(fā)揮作用。天然抗氧化劑具有較強的抗氧化活性和良好的食用安全性,因此在食品、保健品、藥品等領域已經展現出良好的應用前景。隨著海洋生物研究的深入和研究技術的提高,從海洋生物中尋找新的天然抗氧化劑已經成為海洋食品、藥物、保健品研究的重要目標之一。

        波紋巴非蛤(俗稱花甲)是我國重要的海洋貝類資源,營養(yǎng)豐富、肉質鮮美,同時具有很高的食療和藥用價值。本試驗以筆者所在實驗室自制的波紋巴非蛤活性肽為原料,通過測定波紋巴非蛤活性肽清除亞硝酸根、過氧化氫、超氧自由基和羥自由基4種物質的能力,以期測定其抗氧化活性,從而進一步檢驗波紋巴非蛤活性肽的抗氧化能力,以期為波紋巴非蛤活性肽的后續(xù)研究提供理論依據。

        1材料與方法

        1.1材料與試劑

        波紋巴非蛤活性肽,為筆者所在實驗室自制。

        主要試劑有茚三酮、酚酞、羅丹明B液、H2SO4、FeSO4、鄰苯三酚、Tis-HCl緩沖溶液(pH值8.0)、濃鹽酸、丙酮、NaNO2 標準溶液、0.01 mol/L藏紅T溶液、靛藍胭脂紅、銅(Ⅱ)溶液等,均為分析純。

        1.2試驗儀器

        UV-2102/PC/PCS型紫外分光光度計,上海尤尼科儀器有限公司;pHS-3C精密酸度計,上海虹益儀器有限公司;KA-1000飛鴿牌高速離心機;氣浴恒溫振蕩器,江蘇省金壇市宏華儀器廠;電子天平,北京賽多利斯儀器系統有限公司;分析天平,潮州凱譽生物有限公司。

        1.3試驗方法

        1.3.1波紋巴非蛤活性肽清除羥自由基(·HO)的能力

        1.3.1.1羥自由基的測定取2支10 mL的刻度試管,在1支管中分別加入2.5 mL羅丹明B液、0.8 mL硫酸溶液、1.5 mL FeSO4溶液、1.0 mL H2O2溶液,加蒸餾水稀釋至刻度處,搖勻并放置5 min后,置于1 cm比色皿中,用紫外分光光度計測定其吸收峰,確定其最大吸收波長為558 nm。然后用紫外分光光度計在558 nm處測定吸光度,計算其與空白參比的吸光度之差ΔD羥自由基。

        1.3.1.2羥自由基清除率的測定在10 mL具塞刻度試管中依次加入2.5 mL羅丹明B溶液、0.8 mL硫酸溶液、1.5 mL FeSO4溶液、1.0 mL H2O2溶液,搖勻并放置5 min后,加入 1 mL 波紋巴非蛤活性肽溶液(濃度10 mg/mL),加蒸餾水稀釋至刻度處,測定其吸光度D1;對照以溶劑代替,其余步驟同上,測定對照蒸餾水吸光度D對照1、空白體系(羅丹明B和H2SO4溶液)吸光度D空白1,計算清除率P1[1-6]:

        P1=D1-D對照1D空白1-D對照1×100%。

        1.3.2波紋巴非蛤活性肽清除超氧自由基能力的測定取5 mL 0.05 mol/L(pH值 8.0)的 Tis-HCl緩沖溶液,置于 25 ℃ 水浴中預熱20 min,然后分別加入波紋巴非蛤活性肽樣品液(蛋白濃度10 mg/mL)和0.4 mL 25 mol/L鄰苯三酚溶液,混勻后置于25 ℃水浴中反應4 min,再加入8 mol/L HCl終止反應,于299 nm處測定溶液的吸光度(D2)。空白對照組以相同體積的丙酮代替待測樣品,測定吸光度D空白2,計算清除率P2[2,5]:

        P2=D空白2-D2D空白2×100%。

        1.3.3波紋巴非蛤活性肽清除亞硝酸根離子能力的測定

        2.2波紋巴非蛤活性肽對超氧自由基離子的清除率

        由圖2可知,波紋巴非蛤活性肽具有較強的清除超氧自由基離子的能力,清除效果明顯,當相對分子質量在 43 000 u 左右時,達到最高峰,清除率達74%。

        2.3波紋巴非蛤活性肽清除亞硝酸根離子的能力

        由圖3可知,波紋巴非蛤活性肽清除亞硝酸根離子的能力較弱,相對分子質量在31 000~54 000 u時,清除率在10%以上;相對分子質量在43 000 u左右時,達到最高峰,清除率達25%。

        2.4波紋巴非蛤活性肽清除過氧化氫離子的能力

        由圖4可知,波紋巴非蛤活性肽清除過氧化氫離子的能力強,各階段的清除率均在10%以上,相對分子質量在 43 000 u 左右時達到最高峰,清除率在60%以上。

        2.5波紋巴非蛤活性肽清除4種離子的能力對比

        由圖5可知,波紋巴非蛤活性肽清除各種離子的能力為:超氧自由基>過氧化氫>羥自由基>亞硝酸根。波紋巴非蛤多肽液的相對分子質量在40 000~45 000 u時,清除4種離子的能力最強;當相對分子質量小于40 000 u時,隨著相對分子質量的增大,抗氧化活性增大;當相對分子質量大于 45 000 u 時,隨著相對分子質量的增大,抗氧化活性減小。

        3結論

        波紋巴非蛤活性肽應用于體外清除自由基的試驗中效果

        明顯。波紋巴非蛤活性肽對超氧自由基清除率最高達74%,對過氧化氫清除率最高達61.5%,對羥自由基清除率最高達45%,對亞硝酸根離子的清除率最高達24%。當波紋巴非蛤活性肽分子量在40 000~45 000 u時,其清除超氧自由基、過氧化氫、羥自由基和亞硝酸根的能力均達到最大。

        參考文獻:

        [1]范秀萍,吳紅棉,王婭楠,等. 波紋巴非蛤糖蛋白的分離提取及體外清除羥自由基活性的研究[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè),2008,34(1):138-140.

        [2]楊永芳,楊最素,丁國芳,等. 菲律賓蛤仔酶解寡肽的分離及體外抗氧化作用研究[J]. 中華中醫(yī)藥學刊,2011,29(5):1069-1072.

        [3]郁迪,許新建,楊最素,等. 菲律賓蛤仔木瓜蛋白酶水解物抗氧化活性研究[J]. 浙江海洋學院學報:自然科學版,2011,30(6):515-519.

        [4]白林山,王獻釗,李津晶. 靛藍胭脂紅-銅(Ⅱ)體系催化光度法測定雨水中微量過氧化氫[J]. 安徽工業(yè)大學學報:自然科學版,2007,24(2):159-162.

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