馬霞++張國(guó)祖++郭振環(huán)

摘要：觀察了黃連解毒散超微粉對(duì)人工誘發(fā)雞大腸桿菌病的治療效果。通過(guò)人工誘發(fā)建立雞大腸桿菌病模型，用黃連解毒散超微粉進(jìn)行治療，同時(shí)設(shè)黃連解毒散散劑對(duì)照和氟苯尼考西藥對(duì)照，觀察臨床癥狀、體質(zhì)量變化及血清超氧化物歧化酶活性和內(nèi)毒素含量變化。結(jié)果表明，黃連解毒散超微粉、黃連解毒散散劑和西藥氟苯尼考的治愈率和有效率差異不顯著；黃連解毒散超微粉和黃連解毒散散劑降低血清內(nèi)毒素含量，提高超氧化物歧化酶活性，增加體質(zhì)量的作用顯著優(yōu)于西藥氟苯尼考。黃連解毒散超微粉對(duì)人工雞大腸桿菌病有很好的療效，與其散劑比較，使用劑量可以節(jié)省一半。

關(guān)鍵詞：黃連解毒散；超微粉；雞；大腸桿菌病；療效；劑量

中圖分類號(hào)： S858.315.1+2文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2014）10-0204-03

收稿日期：2013-12-21

基金項(xiàng)目：河南省重點(diǎn)科技攻關(guān)項(xiàng)目（編號(hào)：122102110185、122102110224）；河南省科技成果轉(zhuǎn)化項(xiàng)目（編號(hào)：132201310002）。

作者簡(jiǎn)介：馬霞（1978—），女，山東泰安人，博士，講師，主要從事中獸藥新制劑研究。 E-mail：maxia801010@126.com。雞大腸桿菌病的發(fā)病率和死亡率很高，不同品種不同日齡的雞均可發(fā)病，給養(yǎng)雞業(yè)造成極大的損失[1-3]?？咕帉?duì)該病雖有一定的治療和預(yù)防作用，但由于其反復(fù)和大量應(yīng)用，極易產(chǎn)生抗藥性，而且易造成藥物殘留影響食品安全[4]。中藥具有療效可靠、毒副作用小、不易產(chǎn)生有害殘留等優(yōu)勢(shì)[5]，河南省康星藥業(yè)股份有限公司研制開發(fā)了黃連解毒散超微粉，本試驗(yàn)通過(guò)人工誘發(fā)雞大腸桿菌病，然后用黃連解毒散超微粉進(jìn)行治療，旨在確認(rèn)該藥對(duì)雞大腸桿菌病的療效，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)藥物

黃連解毒散超微粉，河南省康星藥業(yè)有限公司制備，規(guī)格：100 g；批號(hào)：11110502；黃連解毒散，河南省康星藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品，規(guī)格：每袋100 g；批號(hào)：12060101；氟苯尼考粉，河南省康星藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，規(guī)格：100 g ∶10 g；批號(hào)：11110101。

1.2檢測(cè)試劑

內(nèi)毒素和超氧化物歧化酶ELISA檢測(cè)試劑盒，R&D Systems Inc.，Minneapolis公司產(chǎn)品，批號(hào)分別為12-03和12-01。

1.3主要儀器

酶標(biāo)儀，離心機(jī)，超凈工作臺(tái)，分析天平，恒溫?fù)u床等。

1.4攻毒菌種與人工發(fā)病預(yù)試驗(yàn)

雞大腸桿菌O78株（C83890），購(gòu)自中國(guó)獸藥監(jiān)察所。

菌種復(fù)活與鑒定：先將菌種接種到GN增菌液中，放置 37 ℃ 恒溫?fù)u床（180 r/min）培養(yǎng)8 h，然后無(wú)菌操作接種于麥康凱瓊脂平板上，37 ℃培養(yǎng)16 h，呈邊緣整齊、光滑、隆起的紅色菌落。從麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上挑取單個(gè)的菌落用革蘭氏染色后，在油鏡下觀察，有許多短桿狀、單個(gè)散落的紅色細(xì)菌。

菌種培養(yǎng)：挑取經(jīng)鑒定過(guò)的單個(gè)菌落接種于GN增菌液中，放置37 ℃恒溫?fù)u床（180 r/min）培養(yǎng)8 h。然后無(wú)菌操作接種于麥康凱瓊脂平板上，37 ℃培養(yǎng)16 h。4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

攻毒預(yù)試：挑取麥康凱瓊脂平板上單個(gè)菌落于GN增菌液中放置37 ℃恒溫?fù)u床（180 r/min）培養(yǎng)8 h。用麥?zhǔn)媳葷岱ㄕ{(diào)整菌液濃度為1×107 CFU/mL、1×108 CFU/mL、1×109 CFU/mL、1×1010 CFU/mL和1×1011 CFU/mL；取60日齡羅曼蛋公雞180羽隨機(jī)均分為6組，每組30羽?？瞻讓?duì)照組隔離飼養(yǎng)并胸肌注射0.5 mL GN增菌液。其余5組，分別用稀釋的大腸桿菌菌液胸肌注射0.5mL攻毒。各組死亡率在0～100%之間（表1），因正式試驗(yàn)時(shí)需要觀察用藥效果，死亡率太高不利于觀察用藥效果，死亡率太低又不利于比較不同劑量的藥物治療效果，所以選擇1×109 CFU/mL菌液濃度（死亡率為36.7%）為正式試驗(yàn)的攻毒菌液濃度。

2結(jié)果

2.1總體療效

2.4試驗(yàn)前后體質(zhì)量變化

在試驗(yàn)開始時(shí)，各組間體質(zhì)量差異不顯著（P>0.05）。 在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)（28 d），各攻毒組體質(zhì)量顯著低于空白對(duì)照組，黃連解毒散超微粉組和黃連解毒散散劑對(duì)照組間的體質(zhì)量差異不顯著（P>0.05），但顯著高于西藥對(duì)照組，西藥對(duì)照組顯著高于陽(yáng)性對(duì)照組（P<0.05） （表6）。

表6各組體質(zhì)量的變化

組別體質(zhì)量（g/羽）0 d28 d黃連解毒散超微粉組875±30a1 137±35b黃連解毒散散劑對(duì)照875±25a1 140±39b西藥氟苯尼考對(duì)照868±27a1 080±33c陽(yáng)性對(duì)照861±26a995±37d空白對(duì)照867±28a1 255±38a注：同列數(shù)據(jù)后標(biāo)不同字母者差異顯著（P<0.05）。

3討論

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，黃連解毒散超微粉組、黃連解毒散散劑對(duì)照組和西藥對(duì)照組的治愈率和有效率差異不顯著，但顯著高于陽(yáng)性對(duì)照組；黃連解毒散超微粉和黃連解毒散散劑降低血清內(nèi)毒素含量、提高超氧化物歧化酶濃度、增加體質(zhì)量作用的效果差異不顯著，但顯著優(yōu)于西藥對(duì)照組。表明，黃連解毒散超微粉對(duì)雞大腸桿菌病有較好的療效，與其粉散劑比較，達(dá)到治療等效的使用劑量可以減少一半。

黃連解毒散為《中華人民共和國(guó)獸藥典》2010版二部中收錄方劑，由黃連、黃芩、黃柏、梔子四味中藥組方而成。具有瀉火解毒之功效。主治三焦實(shí)熱，瘡黃腫毒。方中黃連瀉上焦心火兼瀉中焦火，為君藥；黃芩瀉上焦肺火，為臣藥；黃柏瀉下焦腎火，為佐藥；梔子通瀉三焦之火，導(dǎo)熱下行從膀胱而出，為使藥[8]。孫守芳采用給家兔靜脈注射大腸桿菌內(nèi)毒素的方法成功復(fù)制中醫(yī)溫病氣分證模型，該氣分證階段是溫病衛(wèi)氣營(yíng)血傳變過(guò)程中期階段，此時(shí)正盛邪實(shí)，正邪相爭(zhēng)激烈，三焦壯熱。用白虎湯、黃連解毒散等清寒方劑進(jìn)行治療，取得了很好的效果，并且發(fā)現(xiàn)清寒方劑具有清除氣分證模型家兔血清內(nèi)毒素和提高超氧化物歧化酶濃度的作用[9]。

本試驗(yàn)中我們用大腸桿菌攻毒雛雞后，雛雞表現(xiàn)為病雞精神沉郁，羽毛松亂，食欲不振，呼吸困難，喘氣，呼吸鑼音，張口伸頸，拉黃白色稀糞。剖檢變化為，肝臟腫大，有時(shí)見到淡黃色壞死灶，肝包膜略有增厚，不透明呈黃白色，易剝脫。心包增厚不透明，心包積有淡黃色液體；氣囊炎也是常見的變化，胸、腹等氣囊囊壁增厚呈灰黃色。病程經(jīng)歷氣分證階段，最后至營(yíng)血分證而死亡。應(yīng)用黃連解毒散進(jìn)行治療就是對(duì)三焦實(shí)熱的氣分證進(jìn)行對(duì)證治療，把好氣分關(guān)，防止傳入營(yíng)血分而導(dǎo)致雛雞更多死亡。

超微粉碎拔術(shù)是20世紀(jì)70年代為適應(yīng)高科技的發(fā)展而形成的一種新技術(shù)，在發(fā)達(dá)國(guó)家被廣泛應(yīng)用于冶金、食品、醫(yī)藥、化妝品、航天航空等國(guó)民經(jīng)濟(jì)部門及軍事領(lǐng)域。中藥超微粉碎技術(shù)又稱中藥細(xì)胞級(jí)粉碎技術(shù)，通過(guò)超微粉碎，中藥材的顆粒從傳統(tǒng)工藝的60目左右提高到300目以上，粉碎后中藥粒子的中心粒徑在5～10 μm。這項(xiàng)新技術(shù)應(yīng)用于不同質(zhì)地的中藥材，通過(guò)細(xì)胞破壁打破了細(xì)胞壁的屏障可使其中有效成分直接暴露出來(lái)，從而使藥物起效更加迅速、充分[10-11]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，1%劑量黃連解毒散超微粉與2%劑量黃連解毒散散劑對(duì)人工攻毒模型雞大腸桿菌病的治療效果差異不顯著，這意味著黃連解毒散經(jīng)超微粉碎后用于疾病防治可以節(jié)省一半的用藥量。

參考文獻(xiàn)：

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本試驗(yàn)中我們用大腸桿菌攻毒雛雞后，雛雞表現(xiàn)為病雞精神沉郁，羽毛松亂，食欲不振，呼吸困難，喘氣，呼吸鑼音，張口伸頸，拉黃白色稀糞。剖檢變化為，肝臟腫大，有時(shí)見到淡黃色壞死灶，肝包膜略有增厚，不透明呈黃白色，易剝脫。心包增厚不透明，心包積有淡黃色液體；氣囊炎也是常見的變化，胸、腹等氣囊囊壁增厚呈灰黃色。病程經(jīng)歷氣分證階段，最后至營(yíng)血分證而死亡。應(yīng)用黃連解毒散進(jìn)行治療就是對(duì)三焦實(shí)熱的氣分證進(jìn)行對(duì)證治療，把好氣分關(guān)，防止傳入營(yíng)血分而導(dǎo)致雛雞更多死亡。

超微粉碎拔術(shù)是20世紀(jì)70年代為適應(yīng)高科技的發(fā)展而形成的一種新技術(shù)，在發(fā)達(dá)國(guó)家被廣泛應(yīng)用于冶金、食品、醫(yī)藥、化妝品、航天航空等國(guó)民經(jīng)濟(jì)部門及軍事領(lǐng)域。中藥超微粉碎技術(shù)又稱中藥細(xì)胞級(jí)粉碎技術(shù)，通過(guò)超微粉碎，中藥材的顆粒從傳統(tǒng)工藝的60目左右提高到300目以上，粉碎后中藥粒子的中心粒徑在5～10 μm。這項(xiàng)新技術(shù)應(yīng)用于不同質(zhì)地的中藥材，通過(guò)細(xì)胞破壁打破了細(xì)胞壁的屏障可使其中有效成分直接暴露出來(lái)，從而使藥物起效更加迅速、充分[10-11]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，1%劑量黃連解毒散超微粉與2%劑量黃連解毒散散劑對(duì)人工攻毒模型雞大腸桿菌病的治療效果差異不顯著，這意味著黃連解毒散經(jīng)超微粉碎后用于疾病防治可以節(jié)省一半的用藥量。

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本試驗(yàn)中我們用大腸桿菌攻毒雛雞后，雛雞表現(xiàn)為病雞精神沉郁，羽毛松亂，食欲不振，呼吸困難，喘氣，呼吸鑼音，張口伸頸，拉黃白色稀糞。剖檢變化為，肝臟腫大，有時(shí)見到淡黃色壞死灶，肝包膜略有增厚，不透明呈黃白色，易剝脫。心包增厚不透明，心包積有淡黃色液體；氣囊炎也是常見的變化，胸、腹等氣囊囊壁增厚呈灰黃色。病程經(jīng)歷氣分證階段，最后至營(yíng)血分證而死亡。應(yīng)用黃連解毒散進(jìn)行治療就是對(duì)三焦實(shí)熱的氣分證進(jìn)行對(duì)證治療，把好氣分關(guān)，防止傳入營(yíng)血分而導(dǎo)致雛雞更多死亡。

超微粉碎拔術(shù)是20世紀(jì)70年代為適應(yīng)高科技的發(fā)展而形成的一種新技術(shù)，在發(fā)達(dá)國(guó)家被廣泛應(yīng)用于冶金、食品、醫(yī)藥、化妝品、航天航空等國(guó)民經(jīng)濟(jì)部門及軍事領(lǐng)域。中藥超微粉碎技術(shù)又稱中藥細(xì)胞級(jí)粉碎技術(shù)，通過(guò)超微粉碎，中藥材的顆粒從傳統(tǒng)工藝的60目左右提高到300目以上，粉碎后中藥粒子的中心粒徑在5～10 μm。這項(xiàng)新技術(shù)應(yīng)用于不同質(zhì)地的中藥材，通過(guò)細(xì)胞破壁打破了細(xì)胞壁的屏障可使其中有效成分直接暴露出來(lái)，從而使藥物起效更加迅速、充分[10-11]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，1%劑量黃連解毒散超微粉與2%劑量黃連解毒散散劑對(duì)人工攻毒模型雞大腸桿菌病的治療效果差異不顯著，這意味著黃連解毒散經(jīng)超微粉碎后用于疾病防治可以節(jié)省一半的用藥量。

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