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        消渴丸對(duì)GK大鼠心、腎影響的研究

        2014-11-21 12:18:12劉菊妍吳燕梅
        世界中醫(yī)藥 2014年8期
        關(guān)鍵詞:格列本超微結(jié)構(gòu)組分

        鄒 琦 劉菊妍 吳燕梅 周 杰

        (1廣州白云山中一藥業(yè)有限公司,廣州,510530;2廣州醫(yī)藥集團(tuán)有限公司,廣州,510530)

        消渴丸為口服降糖藥,具有益氣養(yǎng)陰、清熱生津的功效,臨床主要用于2型糖尿病,大量研究表明消渴丸對(duì)糖尿病具有良好的控制作用[1-3]。消渴丸由格列本脲和中藥組分組成,格列本脲為磺脲類降糖藥,降糖作用已被研究證實(shí),然而中藥組分在組方中發(fā)揮著何種作用卻未見相關(guān)報(bào)道,為此,筆者選用自發(fā)性2型糖尿病大鼠-GK大鼠為研究對(duì)象進(jìn)行了系列的研究,旨在發(fā)現(xiàn)消渴丸中藥組分在消渴丸組方中發(fā)揮的作用。

        1 材料

        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Wistar大鼠:13只,SPF級(jí),雄性,180~220 g,GK 大鼠:90 只,SPF 級(jí),雄性,180 ~220 g,均從上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司購入,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào):0066092、0066093。

        1.2 受試品 消渴丸、消渴丸中藥組分、格列本脲,廣州白云山中一藥業(yè)有限公司提供,批號(hào)M01084,消渴丸由葛根、地黃、黃芪、天花粉、玉米須、南五味子、山藥、格列本脲組成,每10丸含格列本脲2.5 mg。消渴丸中藥組分由葛根、地黃、黃芪、天花粉、玉米須、南五味子、山藥組成,不含格列本脲。

        1.3 試劑 血脂測定試劑盒(購自北京利得曼生化技術(shù)有限公司904281HY);血糖試紙(日本 ARKRAY Factory Inc生產(chǎn))。

        1.4 主要儀器 GT-1640型血糖儀(日本京都);ASP 300全密封自動(dòng)脫水機(jī)(Leica公司);石蠟包埋機(jī)(Leica公司);Microm HM400平推式切片機(jī)(德國MICROM)。JVC TK-C1381攝像儀(日本 JVC);電鏡(日立HITACHI電子顯微鏡)。

        2 方法

        2.1 劑量設(shè)計(jì) 消渴丸高、中、低劑量分別設(shè)定為2.8、1.4、0.7 g(11.2、5.6、2.8 丸)/kg,相當(dāng)于成人臨床使用量[7.5 g/(人·d)]的4、2、1倍。消渴丸中藥組分高、中劑量組分別設(shè)定為2.8、1.4 g(11.2、5.6、2.8丸)/kg、格列本脲高、中劑量組分別設(shè)定為2.8、1.4 mg/kg,相當(dāng)于成人臨床使用量[7.5 mg/(人·d)]的4、2倍。為便于表述消渴丸中藥組分在以下敘述中稱之為“消渴丸A”。

        2.2 分組、實(shí)驗(yàn) 選取檢疫合格的Wistar大鼠13只,GK大鼠90只,8~10周齡。GK大鼠先用高脂飼料飼養(yǎng)2周誘發(fā)高血糖,挑選隨機(jī)血糖高于11.1 mmol/L的GK大鼠80只用于本實(shí)驗(yàn),剩余10只GK大鼠淘汰;Wistar大鼠常規(guī)飼養(yǎng)。2周后選取Wistar大鼠為空白組,GK大鼠根據(jù)隨機(jī)血糖濃度分為8組,即模型組、消渴丸高、中、低劑量組,消渴丸A高、中劑量組、格列本脲高、中劑量組,每組10只GK大鼠。分組后各試驗(yàn)組按設(shè)定劑量每天灌胃給藥1次,連續(xù)24周,給藥容積10 mL/kg,空白組、模型組按相同條件灌服等容積的0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)。于給藥第24周末所有大鼠處死后取大鼠心臟、腎臟,取出的心臟、腎臟用于組織形態(tài)學(xué)檢查和電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察[4-6]。

        3 結(jié)果

        3.1 消渴丸、消渴丸A、格列本脲對(duì)GK大鼠心臟、腎臟組織形態(tài)學(xué)的影響 試驗(yàn)結(jié)果表明:1)空白組及模型組各動(dòng)物心肌纖維排列整齊,結(jié)構(gòu)清晰完整,染色均勻,閏盤和橫紋清晰可見,核呈卵圓形居中,間質(zhì)血管未見擴(kuò)張,亦未見炎細(xì)胞浸潤及間質(zhì)纖維組織增生。各藥物組心肌結(jié)構(gòu)與空白組、模型組相比均未見明顯異常。2)空白組各動(dòng)物腎臟被膜完整,腎小球未見增大或縮小及滲出等變化,腎小管上皮細(xì)胞未見水腫性變化,管腔內(nèi)未見滲出物及管型。腎間質(zhì)血管未見擴(kuò)張及炎細(xì)胞浸潤。模型組各動(dòng)物腎臟被膜稍增厚,被膜下疏松,腎小球體積略增大,腎小囊未見明顯擴(kuò)張或萎縮;其他各組動(dòng)物腎臟均有不同程度的改變,主要表現(xiàn)為透明管型的形成、被膜增厚,個(gè)別動(dòng)物腎小球及腎小管間少量炎細(xì)胞浸潤等變化。與模型組比較,除格列本脲組外其他各給藥組試驗(yàn)動(dòng)物病變程度均有一定程度減輕,其中消渴丸中劑量組、消渴丸低劑量組、消渴丸A高劑量組腎臟的變化程度稍輕,消渴丸高劑量組稍明顯。

        3.2 消渴丸、消渴丸A、格列本脲對(duì)GK大鼠心臟、腎臟超微結(jié)構(gòu)的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:1)各給藥組動(dòng)物的心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)與模型對(duì)照組比較,心肌超微結(jié)構(gòu)的異常變化都有不同程度地減輕;而消渴丸高劑量組、消渴丸A高劑量組減輕的程度比較明顯。2)與模型組相比,各藥物組除格列本脲組外均有不同程度的保護(hù)作用;而消渴丸高劑量組、消渴丸A高劑量組、消渴丸中劑量組較明顯,消渴丸高劑量組尤為顯著。見圖1、圖2。

        圖1 消渴丸、消渴丸A、格列本脲對(duì)GK大鼠心臟超微結(jié)構(gòu)的影響

        圖2 消渴丸、消渴丸A、格列本脲對(duì)GK大鼠腎臟超微結(jié)構(gòu)的影響

        4 討論

        GK大鼠是1975年 Goto等人[5]從211個(gè) Wistar大鼠中經(jīng)口服糖耐量實(shí)驗(yàn)選出18個(gè)輕度糖耐量減退的大鼠,經(jīng)反復(fù)篩選培養(yǎng)形成的與人類2型糖尿病相似的自發(fā)性非肥胖2型糖尿病大鼠。該鼠主要表現(xiàn)為葡萄糖刺激的胰島素分泌受損、β細(xì)胞功能受損等,長期患病后,出現(xiàn)各種并發(fā)癥和神經(jīng)系統(tǒng)疾病。Willa Hsueh研究表明[7]GK大鼠是研究2型糖尿病的一種較為理想的國際公認(rèn)的動(dòng)物模型。本研究對(duì)消渴丸進(jìn)行了初步的拆方研究,主要考察消渴丸、消渴丸中藥組分(消渴丸A)、消渴丸化藥組分(格列本脲)對(duì)2型糖尿病GK大鼠血心臟和腎臟的影響。

        本研究結(jié)果表明光鏡觀察各實(shí)驗(yàn)組心肌細(xì)胞未見明顯差別;光鏡觀察腎臟被膜增厚,腎小球體積略增大,皮質(zhì)部小灶性腎小管變性,腎小管間炎細(xì)胞浸潤;電鏡觀察心肌細(xì)胞發(fā)現(xiàn)肌纖維明顯減少,模糊、排列疏松,Z線模糊;線粒體聚集,嵴斷裂、消失或不發(fā)達(dá);電鏡觀察腎小球毛細(xì)血管袢結(jié)構(gòu)基本清晰,基底膜節(jié)段性均質(zhì)增厚,部分較明顯;毛細(xì)血管周圍足細(xì)胞足突部分融合,形態(tài)短小模糊,表明2型糖尿病大鼠誘發(fā)成功,并且還并發(fā)了心、腎并發(fā)癥。

        心、腎組織形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)研究結(jié)果表明,消渴丸中藥組分、消渴丸對(duì)GK大鼠心腎超微結(jié)構(gòu)和腎臟的組織形態(tài)均具有明顯的保護(hù)作用,而格列本脲對(duì)上述臟器的保護(hù)作用不明顯,早有研究表明糖尿病患者久病并發(fā)糖尿病心肌病和糖尿病腎病的比例非常高[8],因此,根據(jù)本研究結(jié)果可判斷,消渴丸中藥組分在消渴丸組方中發(fā)揮著預(yù)防糖尿病心、腎并發(fā)癥發(fā)生的作用。

        綜上所述,消渴丸中藥組分、消渴丸均具有改善GK大鼠心臟、腎臟超微結(jié)構(gòu)的作用,而格列本脲對(duì)上述測定指標(biāo)的影響不明顯。根據(jù)本研究結(jié)果可推斷,消渴丸中藥組分在消渴丸組方中主要發(fā)揮著預(yù)防糖尿病心、腎并發(fā)癥的作用,但其具體的作用機(jī)制尚不清晰,值得深入研究。

        [1]方琦,胡順金.消渴丸對(duì)優(yōu)降糖繼發(fā)性失效的2型糖尿病的療效觀察及機(jī)理探討[J].安徽中醫(yī)臨床雜志,2008,12(4):280-281.

        [2]劉峘,謝雁鳴.消渴丸上市后臨床再評(píng)價(jià)文獻(xiàn)綜述[J].中國中藥雜志,2011,36(20):2851.

        [3]張惠珍.消渴丸治療2型糖尿病86例臨床觀察[J].中醫(yī)藥研究,1999,15(4):19-20.

        [4]Goto Y,Kakizaki M,Masaki N.Spontaneous diabetes produced by selective breeding of normal Wistar rats[J].Proc Japan Acad,1975,51:80-85.

        [5]Janssen U,Phillips AO.Rodent models of nephropathy associated with typeⅡ diabetes[J].Nephrol,1999,12(3):159- 172.

        [6]Golfman LS,Wilson CR.Activation of PPAR gamma enhances myocardial glucose oxidation and improves contractile function in isolated working hearts of ZDF rats[J].Am J Physiol Endocrinol Metab,2005,289(2):328-336.

        [7]Willa Hsueh,E.Dale Abel,Maeda N,et al.Recipes for Creating Animal Models of Diabetic Cardiovas- cular Disease[J].Circulation Research,2007,100:1415-1427.

        [8]Garcia MJ,McNamara PM,Gordon T,et al.Morbidity and mortality in diabetics in the Framingham population:sixteen-year follow-up study[J].Diabetes,1974,23(2):105-111.

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