李歡，史龍梅，周建科

(河北大學(xué)理化分析中心，河北省分析科學(xué)技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北保定，071002)

磺酰脲類除草劑因具有良好的除草效果被廣泛用于田間除草［1］。苯甲酰脲類的殺蟲劑因具有獨(dú)特的作用機(jī)制、廣譜高效的殺蟲活性，被人們譽(yù)為第三代殺蟲劑并被廣泛利用［2］。有關(guān)這兩類農(nóng)藥單獨(dú)測定的報道較多［3－5］。

色譜分析中，樣品前處理方法主要有固相萃取、固相微萃取、超臨界流體萃取、微波輔助萃取和基質(zhì)固相分散萃取等［6］。低溫萃?。?－8］是近年來出現(xiàn)的一種新的樣品處理方法。利用低溫條件，使原本溶于有機(jī)相的部分水冷凍分離，易于待測組分富集［9］。本實(shí)驗(yàn)采用此方法處理樣品，以乙腈為萃取劑，建立了液相色譜法測定乳味飲料中5種農(nóng)藥的方法，具體考察了鹽效應(yīng)、冷凍時間、萃取劑與樣品比例等條件對萃取效果的影響。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

LC-10AT高效液相色譜儀配SPD-10A紫外檢測器(島津公司);7125型手動進(jìn)樣閥;N-2000雙通道色譜工作站(浙江大學(xué)智能信息工程研究所);XW-80A渦旋混合器(上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠);800電動離心機(jī)(金壇市晶玻實(shí)驗(yàn)儀器廠);簡易過濾裝置(自制);BCD-201新飛冰箱。

苯磺隆、氟嘧磺隆、氟鈴脲、氟苯脲、殺鈴脲標(biāo)準(zhǔn)品，購于DIKMA公司;乙腈，為色譜純;NaCl和無水MgSO4，為分析純;實(shí)驗(yàn)用水為二次蒸餾水;樣品乳酸飲料購于當(dāng)?shù)爻小?/p>

標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液:準(zhǔn)確稱取5種標(biāo)準(zhǔn)品各4 mg于2 mL刻度磨口具塞錐形玻璃小管，用乙腈溶解，配成2 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，低溫儲存?zhèn)溆谩?/p>

標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:用乙腈逐級稀釋儲備液。

1.2 色譜條件

色譜柱:Diamonsil C18柱(5 μm，250mm × 4.6 mm i.d.);柱溫:室溫;流動相∶V(甲醇)∶V(水)=73∶27;流速:1.0 mL/min;檢測波長:前 10min 240 nm，后30min 254 nm;進(jìn)樣量:10.0 μL。采用色譜峰的保留時間定性，外標(biāo)法峰面積定量。

1.3 樣品處理

取2 mL乳味飲料于容量為15 mL離心管中，加入5 mL乙腈，渦旋振蕩混合1 min。加入0.2 g NaCl和0.2 g無水MgSO4，立即再次渦旋振蕩1 min，放入離心機(jī)中，以3 000 r/min離心10 min。最后放入冰箱－18℃冷凍4h，回收乙腈萃取液，取1 mL經(jīng) 0.45 μm有機(jī)膜過濾，濾液用微氮?dú)饬鳚饪s至干，用微量進(jìn)樣器取50 μL乙腈溶解殘?jiān)?，?0 μL進(jìn)樣分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜分離條件優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)考察不同比例的甲醇-水體系作為流動相的分離情況。當(dāng)甲醇-水體積比為73∶27時，2種除草劑和3種殺蟲劑分離效果比較好，保留時間在30 min內(nèi)。分別檢測了200～280 nm下的紫外吸收情況，在240 nm處，2種除草劑組分響應(yīng)較大，基線較穩(wěn)定，而3種殺蟲劑的最佳吸收波長為254 nm。因?yàn)槌輨┡c殺蟲劑的峰在9 min左右無峰出現(xiàn)，所以在9 min時，利用儀器自身轉(zhuǎn)換波長的功能，將波長由240 nm變到254 nm。5種標(biāo)準(zhǔn)物的色譜圖見圖1。

2.2 萃取條件優(yōu)化

2.2.1 無機(jī)鹽對萃取效果的影響

圖1 標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖Fig.1 Chromatograms of standard solution

無機(jī)鹽的加入對萃取結(jié)果的影響是不確定的。本實(shí)驗(yàn)考察了NaCl和無水MgSO4這2種無機(jī)鹽對萃取效果的影響。不加入無機(jī)鹽，萃取率極低且在2～6 min處會有一平頂雜峰;單獨(dú)加入NaCl或無水MgSO4中的一種，各組分的回收率會有所增大，但雜峰仍有干擾;2種無機(jī)鹽都適量加入，萃取回收率會明顯增大，有小雜峰但是不影響待測組分的測定。

控制NaCl的質(zhì)量為0.1 g，其他實(shí)驗(yàn)條件不變，只改變無水MgSO4的量，各組分的回收效率見圖2。

圖2 無水MgSO4的質(zhì)量對萃取效率的影響Fig.2 Effect of weight of Anhydrous magnesium on extraction efficiency

控制無水MgSO4的質(zhì)量為0.2 g及其他實(shí)驗(yàn)條件不變。只改變NaCl的質(zhì)量，各組分的回收效率如圖3所示。

2.2.2 冷凍時間

對比未冷凍萃取液與冷凍4h的冷凍萃取液的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象可知，在低溫條件下萃取，可以很大程度上減少雜質(zhì)峰的干擾，達(dá)到凈化與提高萃取效率的同步;但在低溫下萃取溶劑的活性會受到一定的影響，一般需要的萃取時間都相對較長。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，冷凍時間大于4h后，萃取效率增速變緩，各組分的回收率都大于90%，所以綜合考慮方法的簡便省時性，最終確定冷凍時間為4h。

2.2.3 萃取劑體積對萃取效果的影響

圖3 NaCl的質(zhì)量對萃取效率的影響Fig.3 Effect of weight of Sodium on extraction efficiency

萃取劑乙腈體積對待測組分回收率影響很大。萃取劑體積從2～5 mL，各組分的回收率逐漸增大;繼續(xù)增大萃取劑體積回收率不再變化。故最終確定乙腈的體積為5 mL(如圖4所示)。

圖4 萃取劑體積對萃取效果的影響Fig.4 Effect of solvent volume on extraction efficiency

2.3 線性方程及相關(guān)系數(shù)和方法檢出限

在2.5～200 μg/mL范圍內(nèi)做苯磺隆、氟嘧磺隆、氟鈴脲、殺鈴脲、氟苯脲的標(biāo)準(zhǔn)曲線。最佳條件下，儀器響應(yīng)與樣品濃度線性關(guān)系良好。各組分的線性方程和相關(guān)系數(shù)，及根據(jù)儀器檢出限、取樣和進(jìn)樣量、富集倍數(shù)，可算出各組分的方法檢出限，見表1。

表1 線性方程及檢出限Table 1 Linear equations and correlation coefficients

2.4 加標(biāo)回收率和精密度

在2 mL乳酸飲料中加入標(biāo)準(zhǔn)品10 μg，按照上述前處理方法，在最優(yōu)條件下測定5個組分的回收率，平行測定6個樣品。測定結(jié)果見表2。

表2 樣品回收率和精密度(n=6)Table 2 The recoveries and precision(n=6)

2.5 實(shí)際樣品的測定

取2 mL乳味飲料樣品，在最佳樣品處理?xiàng)l件和色譜條件下進(jìn)行測定，苯磺隆、氟嘧磺隆、氟鈴脲、殺鈴脲、氟苯脲五組分均未檢出。實(shí)際樣品加標(biāo)和實(shí)際樣品空白色譜圖見圖5和圖6。

圖5 實(shí)際樣品加標(biāo)色譜圖Fig.5 Chromatogram of the spiked sample

圖6 實(shí)際樣品色譜圖Fig.6 Chromatogram of the real sample

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了低溫冷凍萃取-高效液相色譜測定了乳味飲料中2種磺酰脲類除草劑和3種苯甲酰脲類殺蟲劑的方法，樣品前處理技術(shù)對乳狀樣品的萃取、凈化為一體，簡單快速、綠色環(huán)保，適用于這兩類除農(nóng)藥在此類樣品中的測定。

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