陳珣+楊鎮(zhèn)+肖軍等

摘要：從遼寧省西北地區(qū)根系土壤中分離得到No015號(hào)和No016號(hào)兩株內(nèi)生真菌，對(duì)其進(jìn)行液體培養(yǎng)，從第5天開始，連續(xù)13 d進(jìn)行次生代謝產(chǎn)物干物質(zhì)重的測(cè)量。結(jié)果表明，液體培養(yǎng)10 d為兩株內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的高峰期。

關(guān)鍵詞：內(nèi)生真菌；次生代謝產(chǎn)物；培養(yǎng)時(shí)間；高峰期

中圖分類號(hào)：Q948.12 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）18-4286-02

植物內(nèi)生菌（Endophyte）是一定階段或全部階段生活于健康植物的組織和器官內(nèi)部的真菌或細(xì)菌，其與宿主植物在長期的共進(jìn)化過程中形成了一種穩(wěn)定的互利共生關(guān)系[1]。植物內(nèi)生菌能產(chǎn)生豐富多樣的次級(jí)代謝產(chǎn)物，而且具有多種生理活性，如抗菌、抗病毒、殺蟲、抗氧化等活性。因此，植物內(nèi)生菌作為一種新的微生物資源引起了廣泛的關(guān)注，從植物內(nèi)生菌次級(jí)代謝產(chǎn)物中尋找和發(fā)現(xiàn)新的活性化合物已成為植物內(nèi)生菌研究的一個(gè)熱點(diǎn)[2]。但內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物存在含量較低的問題，本試驗(yàn)通過兩株內(nèi)生真菌No015和No016的次級(jí)代謝產(chǎn)物量與培養(yǎng)時(shí)間的關(guān)系研究，旨在找到No015和No016兩株內(nèi)生真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的高峰期，以期獲得更多的次級(jí)代謝產(chǎn)物，為兩株內(nèi)生真菌的進(jìn)一步研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

內(nèi)生真菌No015和No016由遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物工程中心從遼寧西北地區(qū)采集的根系土壤中分離并保存。

PA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，水定容至1 000 mL，pH自然。

1.2 方法

1.2.1 內(nèi)生真菌的分離純化 參照文獻(xiàn)[3]方法進(jìn)行內(nèi)生真菌的分離純化。

1.2.2 內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物的制備與干物質(zhì)測(cè)量 將活化的內(nèi)生真菌菌種No015和No016接種于裝有100 mL PA培養(yǎng)基的三角瓶中，置于28 ℃、200 r/min的搖床培養(yǎng)，5 d后，連續(xù)13 d取樣，抽提菌絲體代謝物，將菌絲體代謝物中加入等體積的20%乙醇，浸提24 h，過濾，濾液保存。將各濾液吸取1 mL，風(fēng)干后測(cè)量干物質(zhì)量。

2 結(jié)果與分析

2.1 No015內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物的干物質(zhì)測(cè)量

由圖1可知，內(nèi)生真菌No015液體培養(yǎng)10 d時(shí)產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物量最高，5～10 d產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物呈逐漸上升趨勢(shì)，10～17 d產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物呈逐漸下降趨勢(shì)。這說明內(nèi)生真菌No015液體培養(yǎng)10 d時(shí)是產(chǎn)生次級(jí)代謝產(chǎn)物的高峰時(shí)期。

2.2 No016內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物的干物質(zhì)測(cè)量

由圖2可知，內(nèi)生真菌No016也是液體培養(yǎng)10 d時(shí)產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物量最高，同時(shí)，5～10 d產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物也呈逐漸上升趨勢(shì)，10～17 d產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物也呈逐漸下降趨勢(shì)。這說明內(nèi)生真菌No016液體培養(yǎng)10 d時(shí)也是次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的高峰時(shí)期。

3 小結(jié)與討論

內(nèi)生真菌生活在健康植物組織中，其群落生境特殊；而大量的植物又生活在特殊的環(huán)境（如高鹽、干旱）中；因此，現(xiàn)在內(nèi)生真菌已被視為一種開發(fā)天然產(chǎn)物的有效資源，而且已發(fā)現(xiàn)了多種對(duì)人類生活和健康有益的化合物。

內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物十分豐富，在人類的生產(chǎn)生活中具有廣闊的應(yīng)用范圍[3]。Schulz等[4]的研究表明，內(nèi)生真菌和那些受其代謝產(chǎn)物和環(huán)境影響的生物兩者互相影響，會(huì)產(chǎn)生更多的次級(jí)代謝產(chǎn)物。但由于內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物含量較低，并且有些內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物存在生物活性，這就對(duì)次生代謝產(chǎn)物的提取提出了新的要求[5]。

本試驗(yàn)通過研究兩株內(nèi)生真菌No015和No016的次級(jí)代謝產(chǎn)物量與培養(yǎng)時(shí)間的關(guān)系，從而找到No015和No016兩株內(nèi)生真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的高峰期，獲得更多的次級(jí)代謝產(chǎn)物，為后期次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究提供更多的數(shù)量保證。兩株內(nèi)生真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物提取過程中，雖然5～10 d和10～17 d次級(jí)代謝產(chǎn)物增加和減少的程度不同，但都呈現(xiàn)先逐級(jí)增長后逐級(jí)減少的趨勢(shì)。兩株內(nèi)生真菌均表現(xiàn)為在液體培養(yǎng)10 d時(shí)產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物最多，這說明兩株內(nèi)生真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的高峰期均為10 d。兩株內(nèi)生真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物量和培養(yǎng)時(shí)間的關(guān)系摸索后，今后可以在液體培養(yǎng)10 d后進(jìn)行兩株內(nèi)生真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物的提取工作。

參考文獻(xiàn)：

[1] 鄒文欣，譚仁祥.植物內(nèi)生菌研究新進(jìn)展[J].植物學(xué)報(bào)，2001，49（3）：881-892.

[2] 阮麗軍，尚新艷，戈 梅，等.植物內(nèi)生真菌HCCB00189代謝產(chǎn)物研究[J].植物新藥雜志，2007，16（1）：52-55.

[3] HAWKSORTH D L， KIRK P M， SUTTON B C， et al.Ainsworth & Bisbys Dictionary of the fungi[M]. CAB International UK：Cambridge University Press，1995.

[4] SCHULZ B，BOYLE C，DRAEGER S，et al.Endophytic fungi：a source of novel biological active secondary metabolites[J].Myclogical Research，2002，106（9）：996-892.

[5] 金 鑫，呂長利，孫守慧，等.林木次生代謝產(chǎn)物提取方法的研究進(jìn)展[J].中國森林病蟲，2008，27（1）：31-34.

摘要：從遼寧省西北地區(qū)根系土壤中分離得到No015號(hào)和No016號(hào)兩株內(nèi)生真菌，對(duì)其進(jìn)行液體培養(yǎng)，從第5天開始，連續(xù)13 d進(jìn)行次生代謝產(chǎn)物干物質(zhì)重的測(cè)量。結(jié)果表明，液體培養(yǎng)10 d為兩株內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的高峰期。

關(guān)鍵詞：內(nèi)生真菌；次生代謝產(chǎn)物；培養(yǎng)時(shí)間；高峰期

中圖分類號(hào)：Q948.12 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）18-4286-02

植物內(nèi)生菌（Endophyte）是一定階段或全部階段生活于健康植物的組織和器官內(nèi)部的真菌或細(xì)菌，其與宿主植物在長期的共進(jìn)化過程中形成了一種穩(wěn)定的互利共生關(guān)系[1]。植物內(nèi)生菌能產(chǎn)生豐富多樣的次級(jí)代謝產(chǎn)物，而且具有多種生理活性，如抗菌、抗病毒、殺蟲、抗氧化等活性。因此，植物內(nèi)生菌作為一種新的微生物資源引起了廣泛的關(guān)注，從植物內(nèi)生菌次級(jí)代謝產(chǎn)物中尋找和發(fā)現(xiàn)新的活性化合物已成為植物內(nèi)生菌研究的一個(gè)熱點(diǎn)[2]。但內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物存在含量較低的問題，本試驗(yàn)通過兩株內(nèi)生真菌No015和No016的次級(jí)代謝產(chǎn)物量與培養(yǎng)時(shí)間的關(guān)系研究，旨在找到No015和No016兩株內(nèi)生真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的高峰期，以期獲得更多的次級(jí)代謝產(chǎn)物，為兩株內(nèi)生真菌的進(jìn)一步研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

內(nèi)生真菌No015和No016由遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物工程中心從遼寧西北地區(qū)采集的根系土壤中分離并保存。

PA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，水定容至1 000 mL，pH自然。

1.2 方法

1.2.1 內(nèi)生真菌的分離純化 參照文獻(xiàn)[3]方法進(jìn)行內(nèi)生真菌的分離純化。

1.2.2 內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物的制備與干物質(zhì)測(cè)量 將活化的內(nèi)生真菌菌種No015和No016接種于裝有100 mL PA培養(yǎng)基的三角瓶中，置于28 ℃、200 r/min的搖床培養(yǎng)，5 d后，連續(xù)13 d取樣，抽提菌絲體代謝物，將菌絲體代謝物中加入等體積的20%乙醇，浸提24 h，過濾，濾液保存。將各濾液吸取1 mL，風(fēng)干后測(cè)量干物質(zhì)量。

2 結(jié)果與分析

2.1 No015內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物的干物質(zhì)測(cè)量

由圖1可知，內(nèi)生真菌No015液體培養(yǎng)10 d時(shí)產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物量最高，5～10 d產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物呈逐漸上升趨勢(shì)，10～17 d產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物呈逐漸下降趨勢(shì)。這說明內(nèi)生真菌No015液體培養(yǎng)10 d時(shí)是產(chǎn)生次級(jí)代謝產(chǎn)物的高峰時(shí)期。

2.2 No016內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物的干物質(zhì)測(cè)量

由圖2可知，內(nèi)生真菌No016也是液體培養(yǎng)10 d時(shí)產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物量最高，同時(shí)，5～10 d產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物也呈逐漸上升趨勢(shì)，10～17 d產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物也呈逐漸下降趨勢(shì)。這說明內(nèi)生真菌No016液體培養(yǎng)10 d時(shí)也是次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的高峰時(shí)期。

3 小結(jié)與討論

內(nèi)生真菌生活在健康植物組織中，其群落生境特殊；而大量的植物又生活在特殊的環(huán)境（如高鹽、干旱）中；因此，現(xiàn)在內(nèi)生真菌已被視為一種開發(fā)天然產(chǎn)物的有效資源，而且已發(fā)現(xiàn)了多種對(duì)人類生活和健康有益的化合物。

內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物十分豐富，在人類的生產(chǎn)生活中具有廣闊的應(yīng)用范圍[3]。Schulz等[4]的研究表明，內(nèi)生真菌和那些受其代謝產(chǎn)物和環(huán)境影響的生物兩者互相影響，會(huì)產(chǎn)生更多的次級(jí)代謝產(chǎn)物。但由于內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物含量較低，并且有些內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物存在生物活性，這就對(duì)次生代謝產(chǎn)物的提取提出了新的要求[5]。

本試驗(yàn)通過研究兩株內(nèi)生真菌No015和No016的次級(jí)代謝產(chǎn)物量與培養(yǎng)時(shí)間的關(guān)系，從而找到No015和No016兩株內(nèi)生真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的高峰期，獲得更多的次級(jí)代謝產(chǎn)物，為后期次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究提供更多的數(shù)量保證。兩株內(nèi)生真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物提取過程中，雖然5～10 d和10～17 d次級(jí)代謝產(chǎn)物增加和減少的程度不同，但都呈現(xiàn)先逐級(jí)增長后逐級(jí)減少的趨勢(shì)。兩株內(nèi)生真菌均表現(xiàn)為在液體培養(yǎng)10 d時(shí)產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物最多，這說明兩株內(nèi)生真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的高峰期均為10 d。兩株內(nèi)生真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物量和培養(yǎng)時(shí)間的關(guān)系摸索后，今后可以在液體培養(yǎng)10 d后進(jìn)行兩株內(nèi)生真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物的提取工作。

參考文獻(xiàn)：

[1] 鄒文欣，譚仁祥.植物內(nèi)生菌研究新進(jìn)展[J].植物學(xué)報(bào)，2001，49（3）：881-892.

[2] 阮麗軍，尚新艷，戈 梅，等.植物內(nèi)生真菌HCCB00189代謝產(chǎn)物研究[J].植物新藥雜志，2007，16（1）：52-55.

[3] HAWKSORTH D L， KIRK P M， SUTTON B C， et al.Ainsworth & Bisbys Dictionary of the fungi[M]. CAB International UK：Cambridge University Press，1995.

[4] SCHULZ B，BOYLE C，DRAEGER S，et al.Endophytic fungi：a source of novel biological active secondary metabolites[J].Myclogical Research，2002，106（9）：996-892.

[5] 金 鑫，呂長利，孫守慧，等.林木次生代謝產(chǎn)物提取方法的研究進(jìn)展[J].中國森林病蟲，2008，27（1）：31-34.

摘要：從遼寧省西北地區(qū)根系土壤中分離得到No015號(hào)和No016號(hào)兩株內(nèi)生真菌，對(duì)其進(jìn)行液體培養(yǎng)，從第5天開始，連續(xù)13 d進(jìn)行次生代謝產(chǎn)物干物質(zhì)重的測(cè)量。結(jié)果表明，液體培養(yǎng)10 d為兩株內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的高峰期。

關(guān)鍵詞：內(nèi)生真菌；次生代謝產(chǎn)物；培養(yǎng)時(shí)間；高峰期

中圖分類號(hào)：Q948.12 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）18-4286-02

植物內(nèi)生菌（Endophyte）是一定階段或全部階段生活于健康植物的組織和器官內(nèi)部的真菌或細(xì)菌，其與宿主植物在長期的共進(jìn)化過程中形成了一種穩(wěn)定的互利共生關(guān)系[1]。植物內(nèi)生菌能產(chǎn)生豐富多樣的次級(jí)代謝產(chǎn)物，而且具有多種生理活性，如抗菌、抗病毒、殺蟲、抗氧化等活性。因此，植物內(nèi)生菌作為一種新的微生物資源引起了廣泛的關(guān)注，從植物內(nèi)生菌次級(jí)代謝產(chǎn)物中尋找和發(fā)現(xiàn)新的活性化合物已成為植物內(nèi)生菌研究的一個(gè)熱點(diǎn)[2]。但內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物存在含量較低的問題，本試驗(yàn)通過兩株內(nèi)生真菌No015和No016的次級(jí)代謝產(chǎn)物量與培養(yǎng)時(shí)間的關(guān)系研究，旨在找到No015和No016兩株內(nèi)生真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的高峰期，以期獲得更多的次級(jí)代謝產(chǎn)物，為兩株內(nèi)生真菌的進(jìn)一步研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

內(nèi)生真菌No015和No016由遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物工程中心從遼寧西北地區(qū)采集的根系土壤中分離并保存。

PA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，水定容至1 000 mL，pH自然。

1.2 方法

1.2.1 內(nèi)生真菌的分離純化 參照文獻(xiàn)[3]方法進(jìn)行內(nèi)生真菌的分離純化。

1.2.2 內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物的制備與干物質(zhì)測(cè)量 將活化的內(nèi)生真菌菌種No015和No016接種于裝有100 mL PA培養(yǎng)基的三角瓶中，置于28 ℃、200 r/min的搖床培養(yǎng)，5 d后，連續(xù)13 d取樣，抽提菌絲體代謝物，將菌絲體代謝物中加入等體積的20%乙醇，浸提24 h，過濾，濾液保存。將各濾液吸取1 mL，風(fēng)干后測(cè)量干物質(zhì)量。

2 結(jié)果與分析

2.1 No015內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物的干物質(zhì)測(cè)量

由圖1可知，內(nèi)生真菌No015液體培養(yǎng)10 d時(shí)產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物量最高，5～10 d產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物呈逐漸上升趨勢(shì)，10～17 d產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物呈逐漸下降趨勢(shì)。這說明內(nèi)生真菌No015液體培養(yǎng)10 d時(shí)是產(chǎn)生次級(jí)代謝產(chǎn)物的高峰時(shí)期。

2.2 No016內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物的干物質(zhì)測(cè)量

由圖2可知，內(nèi)生真菌No016也是液體培養(yǎng)10 d時(shí)產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物量最高，同時(shí)，5～10 d產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物也呈逐漸上升趨勢(shì)，10～17 d產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物也呈逐漸下降趨勢(shì)。這說明內(nèi)生真菌No016液體培養(yǎng)10 d時(shí)也是次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的高峰時(shí)期。

3 小結(jié)與討論

內(nèi)生真菌生活在健康植物組織中，其群落生境特殊；而大量的植物又生活在特殊的環(huán)境（如高鹽、干旱）中；因此，現(xiàn)在內(nèi)生真菌已被視為一種開發(fā)天然產(chǎn)物的有效資源，而且已發(fā)現(xiàn)了多種對(duì)人類生活和健康有益的化合物。

內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物十分豐富，在人類的生產(chǎn)生活中具有廣闊的應(yīng)用范圍[3]。Schulz等[4]的研究表明，內(nèi)生真菌和那些受其代謝產(chǎn)物和環(huán)境影響的生物兩者互相影響，會(huì)產(chǎn)生更多的次級(jí)代謝產(chǎn)物。但由于內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物含量較低，并且有些內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物存在生物活性，這就對(duì)次生代謝產(chǎn)物的提取提出了新的要求[5]。

本試驗(yàn)通過研究兩株內(nèi)生真菌No015和No016的次級(jí)代謝產(chǎn)物量與培養(yǎng)時(shí)間的關(guān)系，從而找到No015和No016兩株內(nèi)生真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的高峰期，獲得更多的次級(jí)代謝產(chǎn)物，為后期次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究提供更多的數(shù)量保證。兩株內(nèi)生真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物提取過程中，雖然5～10 d和10～17 d次級(jí)代謝產(chǎn)物增加和減少的程度不同，但都呈現(xiàn)先逐級(jí)增長后逐級(jí)減少的趨勢(shì)。兩株內(nèi)生真菌均表現(xiàn)為在液體培養(yǎng)10 d時(shí)產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物最多，這說明兩株內(nèi)生真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的高峰期均為10 d。兩株內(nèi)生真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物量和培養(yǎng)時(shí)間的關(guān)系摸索后，今后可以在液體培養(yǎng)10 d后進(jìn)行兩株內(nèi)生真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物的提取工作。

參考文獻(xiàn)：

[1] 鄒文欣，譚仁祥.植物內(nèi)生菌研究新進(jìn)展[J].植物學(xué)報(bào)，2001，49（3）：881-892.

[2] 阮麗軍，尚新艷，戈 梅，等.植物內(nèi)生真菌HCCB00189代謝產(chǎn)物研究[J].植物新藥雜志，2007，16（1）：52-55.

[3] HAWKSORTH D L， KIRK P M， SUTTON B C， et al.Ainsworth & Bisbys Dictionary of the fungi[M]. CAB International UK：Cambridge University Press，1995.

[4] SCHULZ B，BOYLE C，DRAEGER S，et al.Endophytic fungi：a source of novel biological active secondary metabolites[J].Myclogical Research，2002，106（9）：996-892.

[5] 金 鑫，呂長利，孫守慧，等.林木次生代謝產(chǎn)物提取方法的研究進(jìn)展[J].中國森林病蟲，2008，27（1）：31-34.