劉玲麗 (海南省人民醫(yī)院檢驗科，海南 海口 570311)

星形膠質瘤依據(jù)細胞分化和異型性的不同可分為Ⅰ～Ⅳ級，隨級別升高，膠質瘤呈逐漸惡性進展的趨勢〔1〕。正確判斷其病理分級，是合理治療的前提。某些蛋白的表達情況可反映腫瘤的良惡程度及預后。S100蛋白是一種主要表達于中樞神經(jīng)系統(tǒng)星形膠質細胞及腫瘤細胞的酸性鈣結合蛋白〔2〕。Survivin屬于凋亡抑制蛋白，具有抑制細胞凋亡和促進細胞分裂的功能〔3〕。Ki-67是與細胞增殖關系密切的核蛋白，可準確反映腫瘤細胞增殖活性狀態(tài)，預測患者的預后〔4〕。本文探討S100、Survivin和 Ki-67在星形膠質瘤腫瘤細胞中的表達情況及在判斷星形膠質瘤臨床病理級別中的作用。

1 資料與方法

1.1一般資料 我院收治的星形膠質瘤患者68例，其中男37例，女31例，年齡60～66〔平均(64.1±1.2)〕歲。均接受手術治療，手術后標本病理檢查結果依據(jù)世界衛(wèi)生組織腫瘤臨床病例分級標準，低級別星形膠質瘤(Ⅰ～Ⅱ級)30例，高級別(Ⅲ～Ⅳ級)38例。另選取20例正常腦組織標本作為對照組，男11例，女9例，年齡60～65〔平均(62.1±1.1)〕歲。兩組性別、年齡等差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

1.2檢測方法 手術標本經(jīng)10%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋切片，進行HE染色和SP法免疫組化染色，免疫組化操作步驟參考說明書執(zhí)行，經(jīng)脫蠟后，抗原修復，加一抗孵育過夜后沖洗，滴加二抗，DAB顯色，蘇木素復染，脫水透明，封片。每批染色均設立陽性和陰性對照。鼠抗人S100單克隆抗體，型號:ES-SM-003，規(guī)格:0.2 ml濃縮液，購自上海億欣生物科技有限公司。兔抗人Survivin多克隆抗體，型號SC-10811，工作濃度為1∶175，購自 Santa Cruz Biochemology，Inc。鼠 Ki-67 單克隆抗體，型號SC-23900，規(guī)格:200 μg/ml，購自上海優(yōu)寧維生物科技有限公司。

1.3免疫組化結果判斷 S100免疫組化結果以腫瘤細胞細胞質或細胞核中出現(xiàn)棕色顆粒為陽性。Survivin染色陽性以胞核和胞質內出現(xiàn)棕色顆粒為陽性;Ki-67免疫組化陽性染色定位于腫瘤細胞細胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。依照參照文獻〔5〕報道的方法，綜合染色強度和陽性細胞百分比的得分結果進行綜合評分。(1)染色強度:無著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色者為3分。(2)陽性細胞百分比:隨機選取10個高倍視野(×200)，每個視野計數(shù)1 000個細胞，無陽性細胞為0分，陽性細胞數(shù)≤10%為1分，11% ～50%為2分，51% ～75%為3分，＞75%為4分。將兩項得分相乘，0分為-，1～2分為+，3～6分為?，8～12分為?，其中?和?判為陽性。

1.4統(tǒng)計學處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計學軟件進行χ2檢驗。

2 結果

2.1各組S100表達情況 隨腫瘤惡性程度增高，S100陽性率明顯降低(χ2=12.79，P＜0.05)。正常腦組織中S100陽性率高于低級別星形膠質瘤組織，差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.40，P＞0.05);也明顯高于高級別星形膠質瘤組織(χ2=11.59，P＜0.05)。低級別星形膠質瘤中S100陽性率明顯高于高級別(χ2=8.88，P＜0.05)。見表1。

2.2各組Survivin表達情況 隨腫瘤惡性程度增高，Survivin陽性率明顯升高(χ2=14.41，P＜0.05)。高級別膠質瘤組織中Survivin陽性率高于低級別和正常腦組織(χ2=4.02、χ2=12.58，均P＜0.05);低級別星形膠質瘤中Survivin陽性率明顯高于正常腦組織(χ2=5.45，P＜0.05)。見表2。

2.3各組Ki-67表達情況 隨腫瘤惡性程度增高，Ki-67陽性率明顯升高(χ2=12.69，P＜0.05)。高級別膠質瘤組織中Ki-67陽性率高于低級別和正常腦組織(χ2=3.95、χ2=10.95，均P＜0.05);低級別星形膠質瘤中Ki-67陽性率明顯高于正常腦組織(χ2=4.01，P＜0.05)。見表3。

2.4星形膠質瘤中Survivin和Ki-67的相關性 Survivin表達與 Ki-67呈高度正相關關系(r=0.31，P＜0.05)。見表4。

表1 各組S100表達情況(n)

表2 各組Survivin表達情況(n)

表3 各組Ki-67表達情況(n)

表4 星形膠質瘤中Survivin和Ki-67的相關性(n)

3 討論

文獻報道〔6〕，星形膠質瘤占顱內腫瘤的13% ～26%，占膠質瘤21.2%～51.6%?？蓱糜谛切文z質瘤腫瘤特性的免疫組化標記物較多〔7〕。S100蛋白是一種在正常腦組織細胞中穩(wěn)定表達的細胞，參與正常細胞的周期調控和增殖分化等多種生理過程。S100蛋白與腫瘤增殖呈負相關，有研究報道〔8〕，S100在低級別膠質瘤組織中高表達，隨著惡性程度提高，S100表達水平降低，在高級別膠質瘤組織中呈低表達狀態(tài)。本研究結果提示，星形膠質瘤細胞形成和惡性程度增高與S100表達下調或缺失有關，S100可作為診斷星形膠質瘤異常增生的一種特異性蛋白標記。

Survivin屬于凋亡抑制蛋白中的一種，在腫瘤組織中表達但在正常組織中不表達。Survivin的這一特點提示其與腫瘤的病程進展有密切相關。有文獻報道〔9〕，Survivin可能通過干擾腫瘤細胞的凋亡和增殖平衡促進腫瘤發(fā)生和發(fā)展。本研究結果提示，Survivin蛋白的表達水平隨星形膠質瘤惡性程度的升高而增高，Survivin表達上調抑制了膠質瘤細胞的凋亡。

Ki-67是與細胞增殖關系密切的核蛋白，在正常組織中表達水平極低，可準確反映腫瘤細胞增殖活性狀態(tài)〔10〕，預測患者的預后，是腫瘤增殖的標志物之一。本研究結果提示Ki-67蛋白的表達與星形膠質瘤惡性程度呈正相關，Ki-67表達升高反映星形膠質瘤呈高度增殖狀態(tài)。Survivin蛋白在抑制腫瘤細胞的凋亡，可促進轉化細胞的異常增殖。

綜上，S100低表達、Survivin和Ki-67高表達提示星形膠質瘤的惡性程度較高。三者可反映星形膠質瘤的增殖狀態(tài)，有助于鑒別腫瘤的惡性程度。

1 Lassman AB.Molecular biology of gliomas〔J〕.Curr Neurol Neurosci Reports，2004;4(3):228-33.

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3 Ryan BM，O＇Donovan N，Duffy MJ.Survivin:a new target for anti-cancer therapy〔J〕.Cancer Treatment Rev，2009;35(7):553-62.

4 Nishimura R，Osako T，Okumura Y，et al.Clinical significance of Ki-67 in neoadjuvant chemotherapy for primary breast cancer as a predictor for chemosensitivity and for prognosis〔J〕.Breast Cancer，2010;17(4):269-75.

5 許良中，楊文濤.免疫組織化學反應結果的判斷標準〔J〕.中國癌癥雜志，1996;6(4):229-31.

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7 張曉娟，樸月善，盧德宏.膠質瘤診治相關分子標志物的研究進展〔J〕.中華神經(jīng)外科雜志，2012;28(11):1179-81.

8 陳宏剛，唐運濤，劉倫波，等.膠質瘤中S100，Survivin和Ki-67的表達及其生物學意義〔J〕.局解手術學雜志，2011;20(3):287-9.

9 賈云峰，韋 瑋，胡國良，等.神經(jīng)膠質瘤Ki-67，PTEN和Survivin表達的臨床研究〔J〕.局解手術學雜志，2012;21(4):343-5.

10 姜振富，李 梅，韋 鴻，等.腦膠質瘤中Ki-67，Kras和 Braf蛋白的表達及臨床意義〔J〕.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學，2013;21(3):507-10.