摘要：利用PCR-RFLP技術，檢測101頭長白豬NCOA-1基因多態(tài)性，并分析其與繁殖性狀的關系。結果表明，NCOA-1基因AA、AB、BB基因型頻率分別為0.500、0.335、0.165；NCOA-1基因中BB型在窩產仔數(shù)和窩產仔活數(shù)、初生窩重和斷奶窩重與AA型、AB型有顯著性差異（P<0.05）。

關鍵詞：長白豬；NCOA-1；繁殖；性能

中圖分類號： S828.3文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）09-0175-03

收稿日期：2013-11-20

基金項目：國家自然科學基金（編號：30901014，31060295）。

作者簡介：魯慧文（1987—），男，黑龍江綏化人，碩士，研究方向為農業(yè)推廣（養(yǎng)殖）。E-mail：lhw0417@126.com。

通信作者：黃濤，副教授，從事豬分子遺傳育種研究。E-mail：taohuang100@sina.com。豬的繁殖性能是一類重要的經濟性狀，其好壞直接影響豬場的經濟效益。繁殖性能屬于限性表達的低遺傳力性狀，運用常規(guī)的育種方法對該類性狀進行改良進展緩慢，從分子水平上尋找控制豬產仔數(shù)的主基因并應用到育種實踐中成為可能。核受體/類固醇輔激活因子1（NCOA-1/SRC-1）是p160類固醇受體輔激活因子（SRC）家族中的一員，有研究表明，SRC家族在發(fā)育、體生長、類固醇激素應答、新陳代謝、繁殖、心血管系統(tǒng)和炎性反應中有獨特的生物學功能[1-2]。NCOA-1作為轉錄輔助激活因子，是第1個被發(fā)現(xiàn)的類固醇受體[3]，核受體輔助活化因子1（NCOA-1）是細胞核激素受體的輔助激活劑，這些受體有雌性激素、孕酮受體和某些其他轉錄因子如Ets-2和PEA3[4]。NCOA-1敲除的小鼠展現(xiàn)正常的發(fā)育能力和體軀生長，但顯示部分激素抑制類固醇和甲狀腺激素、延遲浦肯野細胞的發(fā)育、降低雌激素依賴的血管保護、出現(xiàn)多種代謝異常[5-9]。另有研究發(fā)現(xiàn)，NCOA-1表達異常是引起乳腺癌的誘因[4，10]。

NCOA-1是豬繁殖性狀候選基因，研究表明，其多態(tài)性與豬的產仔數(shù)可能有關聯(lián)，定位于豬3號染色體上，豬的NCOA-1基因總共有97 681 bp，含有19個外顯子，其cDNA長度為4 451 bp。核受體輔激活蛋白通過與結合到DNA上的核受體相互作用并增強轉錄活性[11]，受到影響的雄激素受體、雌激素受體等在動物的生長發(fā)育和繁殖等生理過程起到重要作用[12]。NCOA-1蛋白不僅增強了雌激素受體的活性，而且反過來刺激特定的雌激素反應基因的轉錄，調節(jié)隨后的生理反應[13]。國外學者已經對NCOA-1基因與豬多產性的相關性進行研究，將其定位于SSC3，稱其是繁殖性狀的“開關”[14]。NCOA-1基因在對不同品種或不同地區(qū)母豬群體研究得到的結果不盡相同，本研究擬分析NCOA-1基因對新疆地區(qū)長白豬繁殖力性狀的遺傳效應，為該候選基因的選種應用積累數(shù)據(jù)，以期為分子標記輔助選擇育種提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗材料

試驗豬均來自新疆農八師142團豬場，用隨機抽樣法選擇有完整繁殖性狀記錄的長白母豬101頭進行活體采樣，同時收集試驗母豬的窩產仔數(shù)、窩產活仔數(shù)、胎次、初生窩重和斷奶窩重等資料。

1.2主要儀器和試劑

主要儀器：RT-PCR儀、DYY-4穩(wěn)流穩(wěn)壓電泳儀、恒溫水浴鍋、臺式恒溫振蕩器、電泳凝膠成像系統(tǒng)、微波爐、臺式高速離心機；主要試劑：Taq DNA聚合酶、蛋白酶K及DNA限制性內切酶RsaⅠ，均購自TaKaRa。

1.3試驗方法

1.3.1基因組DNA的提取采用酚-氯仿常規(guī)提取法提取基因組DNA。

1.3.2引物的設計與合成根據(jù)豬NCOA-1基因序列設計引物，由上海生工生物有限公司合成。引物序列為：F-5′-AGGGGCTACCCTCCTGTAAG-3′；R-5′-CTTCTCTGCCAGTTCTCCAGTC-3′。

1.3.3PCR擴增PCR反應總體系為25 μL，包括：10×buffer 2.5 μL，dNTP 2 μL，10 μmol/L上、下游引物各0.5 μL，50 ng/μL模板DNA 0.8 μL，Taq酶0.3 uL，MgCl2 3 μL，ddH2O 15.4 μL。反應條件為：94 ℃變性4 min；94 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s 35次循環(huán)；72 ℃延伸5 min，4 ℃保存。

1.3.4NCOA-1基因擴增產物的酶切8.5 μL PCR產物加入0.5 μL RsaⅠ及1 μL buffer，37 ℃水浴3 h，酶切產物用15%的瓊脂糖電泳檢測分型。

1.3.5數(shù)據(jù)處理采用Excel和SPSS軟件分析數(shù)據(jù)，并參考徐迎寧等的處理模型[15]?；蛐蛿?shù)據(jù)：NCOA-1、AA、AB、BB；繁殖性狀：窩產仔數(shù)、窩產活仔數(shù)、初生窩重、斷奶窩重；模型（基因的獨立效應模型）：yi=μ+αi+ei，其中，yi為性狀值，μ為總體平均數(shù)，αi為基因型效應值（i=AA、AB、BB），ei為隨機誤差。

2結果與分析

2.1NCOA-1基因擴增結果

NCOA-1基因PCR擴增后經1.5%瓊脂糖凝膠電泳，檢測到1條長約408 bp的清晰條帶（圖1）。

2.2PCR擴增產物酶切結果

由圖2可見，各基因型條帶清晰。

2.3NCOA-1基因的基因頻率和基因型頻率

根據(jù)檢測樣品的基因型及檢出總數(shù)，計算NCOA-1各基因型在長白豬群體中的頻率和等位基因頻率。由表1可知，NCOA-1基因的基因型頻率是AA>AB>BB，優(yōu)勢基因型頻率為AA，達到0.500；基因頻率A>B。表1NCOA-1基因的基因頻率和基因型頻率endprint

品種樣本數(shù)

（頭）基因型分布（頭）基因型頻率基因頻率AAABBBAAABBBAB長白1015034170.500 00.335 00.165 00.667 50.332 5

2.4NCOA-1基因對豬基因效應的影響

由表2可見，在初產母豬中，NCOA-1各基因型之間窩產仔數(shù)差異顯著（P<0.05），各基因型之間窩產活仔數(shù)差異顯著（P<0.05），其中，AB基因型母豬的窩產仔數(shù)、窩產活仔數(shù)最多；在經產母豬中，NCOA-1各基因型之間窩產仔數(shù)差異顯著（P<0.05），各基因型之間窩產活仔數(shù)差異顯著（P<005），其中，AA基因型母豬的窩產仔數(shù)、窩產活仔數(shù)最多；在所有胎次中，NCOA-1各基因型之間窩產仔數(shù)和窩產活仔數(shù)差異均達到顯著水平（P<0.05）；AA基因型的窩產仔數(shù)、窩產活仔數(shù)為最多。

由表3可見，初產母豬、經產母豬和所有胎次中，NCOA-1基因各基因型之間初生窩重和斷奶窩重的差異均顯著（P<0.05）；AA型母豬比AB、BB型母豬所產的初生窩重、斷奶窩重都高。

3小結與討論

通過NCOA-1分別對長白豬繁殖性狀的統(tǒng)計分析，表明NCOA-1基因對長白豬窩產仔數(shù)、窩產活仔數(shù)、初生窩重、 斷奶窩重等繁殖性狀，無論在初產、經產還是所有胎次中都有顯著影響。

核受體輔激活蛋白1（NCOA-1）基因的產物核受體輔激活蛋白與結合在DNA上的雌激素受體相互作用并加強其轉錄活性。施啟順等研究表明，NCOA-1基因RsaⅠ酶切多態(tài)性對母豬產仔性狀有顯著影響，在窩產仔數(shù)和窩產活仔數(shù)上都出現(xiàn)AA>AB>BB趨勢，基因型間差異極顯著（P<0.01）[16]，本研究結果和施啟順等報道基本一致。NCOA-1基因大部分AA和BB、AB和BB差異顯著，如該基因TNB加性效應為0.33，NBA加性效應為1.38，與Melville等報道結果[17]基本一致?？傊?，試驗結果表明，NCOA-1中AA為優(yōu)勢基因，這可以為今后的生產研究提供良好的選擇方向。

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