張軍喜　段廣才　郭愛葉　柴健　馬穎輝　董瑋

【摘要】 目的：探討IL-1B基因多態(tài)性與胃癌易感性的關(guān)系。方法：以聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）分析法檢測65例胃癌患者和130例非胃癌患者的IL-1B基因位點多態(tài)性。結(jié)果：IL-1B-31及IL-1B-511均有3種基因型，分別是C/C、C/T和T/T；病例組Hp陽性感染率（70.8%）高于對照組（55.4%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（字2=5.6，P<0.05）。Hp感染時，IL-1B-511和IL-1B-31的T/T均能增加胃癌發(fā)病的風(fēng)險，OR分別為8.1（95%CI： 2.4-10.1）和11.5（95%CI： 1.9-13.1）。結(jié)論：IL-lB-31和-511 TT基因多態(tài)性與河南地區(qū)胃癌的發(fā)生有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 白細(xì)胞介素-1； 基因多態(tài)性； 胃癌

胃癌（Gastric cancer，GC）是我國常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重危害著人們的身體健康。多數(shù)研究表明，胃癌的發(fā)生是由遺傳、環(huán)境和幽門螺桿菌感染等因素相互作用的結(jié)果。近年來，有學(xué)者認(rèn)為幽門螺桿菌感染可致慢性胃炎、消化性潰瘍等疾病的發(fā)生[1-2]。人體感染幽門螺桿菌是否是胃癌發(fā)病獨立危險因素尚未定論[3-4]。白細(xì)胞介素-1是一種重要的炎癥介質(zhì)，有研究表明：IL-1B和IL-1RN基因多態(tài)性可能與胃癌易感性有關(guān)[5-6]。本研通過對河南漢族人群中HP及IL-1B基因的檢測和分析，初步探討了感染幽門螺桿菌（Hp）后IL-1基因多態(tài)性與胃癌的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 病例組來河南省腫瘤醫(yī)院、鄭州大學(xué)一附院、河南省第一人民醫(yī)院就診并確診為非賁門胃癌的患者，診斷由縣級以上醫(yī)院胃鏡和手術(shù)病理切片（組織蠟塊）確診，臨床癥狀、體征或其他檢查符合胃癌診斷標(biāo)準(zhǔn)。對照組要求與病例組同地區(qū)、同民族、同性別，年齡相差不超過5歲，能清楚回答問題并排除胃癌家族史和消化系統(tǒng)疾病及免疫系統(tǒng)疾病的非胃癌患者。病例組65例，男49例，女16例，平均年齡（59.00±13.64）歲；對照組130例，男94例，女36例，平均年齡（60.00±12.15）歲。兩組患者的年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=-0.88， P=0.38），性別、吸煙、飲酒等因素比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。兩組患者的年齡、性別等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 實驗方法

1.2.1 基因組DNA的提取 采用改良的NaCl-酚/氯仿抽提法提取基因組DNA。抽取200 μL血細(xì)胞混懸液于1.5 mL EP管中，經(jīng)過消化、裂解、酚/氯仿抽、無水乙醇沉淀提等步驟提取基因組DNA。

1.2.2 目的片段擴(kuò)增 應(yīng)用Primer 5.0軟件自行設(shè)計引物：IL-1B-31 F：5' -AGAAGCTTCCA CCAA TACTC-3和R：5'-AGCACCTAGTTGTAAGGAAG-3；IL-1B-511 F：5'-CACTTTG CTGGTGTC TCGGT-3和R：5'-GTGGGACAA AGTGGA AGACA-3（北京賽百盛基因技術(shù)有限公司）；擴(kuò)增反應(yīng)體系（50 μL）：5μL 10×PCR緩沖液，2 μL引物（10 μmol/L），1 μL dNTP（10 mmol/L），0.5 μL TaqDNA聚合酶（北京天為時代科技有限公司，2.5 U/μL），4μL模板DNA，35.5μL去離子水；PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件：95 ℃變性5 min；退火溫度依次為51 ℃和54 ℃，各1 min；72 ℃延伸1 min，35個循環(huán)后72 ℃延伸10 min。

1.2.3 IL-1B基因多態(tài)性檢測 IL-1B基因多態(tài)性檢測用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性。酶切反應(yīng)體系為20μL，包括10μL PCR產(chǎn)物，0.5 μL限制性內(nèi)切酶（10 U/μL，MBI公司），2 μL 10×buffer，

7.5 μL去離子水?；靹蚝?7 ℃恒溫消化6 h。3%的瓊脂糖凝膠電泳分析基因酶切產(chǎn)物。

1.2.4 HP檢測 采用ELISA法檢測血清中Hp IgG抗體，試劑盒購自深圳賽爾生物公司。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計量資料以（x±s）表示，計數(shù)資料比較和基因型Hardy-Weinberg平衡檢驗采用 字2檢驗，α=0.05，風(fēng)險因素OR值及95%的可信區(qū)間采用Logistic回歸分析，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IL-1B基因多態(tài)性檢測結(jié)果 IL-1B-31及IL-1B-511各有3種基因型，均為C/C、C/T和T/T，如圖1～圖2。

圖1 IL-1B-31基因擴(kuò)增產(chǎn)物酶切電泳圖

圖2 IL-1B-511基因擴(kuò)增產(chǎn)物酶切電泳圖

2.2 兩組IL-1B基因型的分布 IL-1B-31、IL-1B-511基因型頻率符合Hardy-Weinberg平衡（ 字2=0.04、0.32，P>0.05），見表1。

2.3 兩組HP感染情況的比較 病例組Hp陽性感染率為70.8%（46/65），高于對照組的55.4%（72/130），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（ 字2=5.6，P<0.05）。

2.4 基因多態(tài)性與胃癌關(guān)系 Hp感染時，IL-1B-511T/T能增加胃癌發(fā)病的風(fēng)險，OR=8.1（95%CI：2.4-10.1）；IL-1B-31T/T能增加胃癌發(fā)病的風(fēng)險，OR=11.5（95%CI：1.9-13.1），見表2。

3 討論

IL-1B是IL-1基因族在430 kb區(qū)域內(nèi)的3個基因之一，其功能是編碼和調(diào)控IL-1β，IL-1β不僅在炎癥的免疫損傷過程中起著重要作用，而且還有較強(qiáng)抑制胃酸分泌功能[7]。研究發(fā)現(xiàn)，IL-1B基因多態(tài)性會影響IL-1β的表達(dá)水平[8]。2001年，El-Omar等[9]發(fā)現(xiàn)IL-1B-511 T/IL-1B-31C基因型（OR值分別為7.5和2.1）和IL-1RNII/II等位基因（OR值為2.9）是低胃酸分泌的胃癌患的獨立危險因素。隨后，Machado等[10]在上述研究的基礎(chǔ)上發(fā)現(xiàn)：IL-1B-511 T基因攜帶者和IL-1RNII/II基因型增加腸型胃癌的發(fā)病風(fēng)險；Kudo等[11]報道IL-1B-511 TT基因型與Hp感染后發(fā)生胃癌的高危險有關(guān)；然而，最近有學(xué)者報道IL-1B-511、IL-1B-31 T/T基因型與胃癌無關(guān)[12-13]?？紤]與研究樣本量和種族有關(guān)，本研究以患有非幽門螺桿菌感染疾病的同期住院患者作對照，研究發(fā)現(xiàn)患者感染幽門螺桿菌后攜帶IL-1B-31和IL-1B-511 T/T基因型者較非T/T型攜帶者發(fā)生胃癌機(jī)會增高，OR值分別為11.5和8.1。提示：感染幽門螺桿菌后，患者IL-1B-31和IL-1B-511兩位點T/T基因型可能與胃癌發(fā)生密切有關(guān)。推測可能的機(jī)制是：IL-1B-31和511基因位點突變后，白細(xì)胞介素-1β因子分泌增加，抑制胃酸分泌，使胃內(nèi)長期處于低胃酸狀態(tài)，從而引發(fā)慢性胃炎的發(fā)生，再者胃內(nèi)酸度降低也可導(dǎo)致某些細(xì)菌在胃內(nèi)生長繁殖，進(jìn)一步造成胃內(nèi)亞硝胺類致癌物質(zhì)物質(zhì)合成增加，造成胃黏膜的損害、黏膜上皮化生，最終演化為胃癌，因此，如果患者檢測到攜帶有IL-1B-31和511 T/T突變基因型，且合并有幽門螺桿菌感染，應(yīng)引起臨床醫(yī)生足夠的重視。endprint

我國正常人群中Hp感染率在50%～60%之間，研究發(fā)現(xiàn)河南漢族人群中Hp-IgG陽性率高達(dá)55.4%，與國內(nèi)田淑梅等[14]研究結(jié)果基本相符。另一項國外研究發(fā)現(xiàn)，一般人群中Hp感染雖然較高，但胃炎、胃癌等與HP感染高度相關(guān)的消化道疾病發(fā)病率則處于相對較低水平，分析認(rèn)為可能與Hp菌株毒力基因分布及宿主炎癥因子某些基因位點突變相關(guān)[15]。因此，筆者在研究宿主炎癥因子某些突變熱點的同時，也要充分考慮人群中感染HP毒力基因的分子特征，運用分子流行病學(xué)研究方法分析二者在普通人群和患病人群中交互作用，這對揭示胃癌患者中HP感染、炎癥因子基因位點突變在疾病發(fā)生機(jī)制中的作用有著重要的價值。

綜上所述，Hp感染后，攜帶IL-1B-31和IL-1B-511 T/T基因型與胃癌發(fā)病密切有關(guān)。目前IL-1B-31和511基因位點突變與胃癌發(fā)生仍存在爭議。在今后研究中，應(yīng)充分考慮研究的樣本量大小、研究人群的種族、Hp感染情況及Hp菌株毒力基因分子特征等因素。

參考文獻(xiàn)

[1] Hnatyszyn A，Wielgus K，Kaczmarek-Rys M，et al.Interleukin-1 gene polymorphisms in chronic gastritis patients infected with Helicobacter pylori as risk factors of gastric cancer development[J].Arch Immunol Ther Exp （Warsz），2013，61（6）：503-512.

[2]秦慶穎，陳柱花，秦慶顏.消化性潰瘍與幽門螺桿菌感染相關(guān)性分析[J]. 中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2013，10（11）：130-131.

[3] Tahara T，Shibata T，Yamashita H，et al.Synergistic effect of IL-1β and TNF-α polymorphisms on the H. pylori-related gastric pre-malignant condition[J].Hepato Gastroenterology，2012，59（120）：2416-2420.

[4]林麥連.幽門螺桿菌感染與胃癌臨床病理特征、細(xì)胞凋亡的關(guān)系分析[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2011，8（16）：72-73.

[5] Zhao J D，Geng P L，Li Z Q，et al.Associations between interleukin-1 polymorphisms and gastric cancers among three ethnicities[J].World J Gastroenterol，2012，18（47）：7093-7099.

[6] He B S，Pan Y Q，Xu Y F，et al.Polymorphisms in interleukin-1B （IL-1B） and interleukin 1 receptor antagonist （IL-1RN） genes associate with gastric cancer risk in the Chinese population[J].Dig Dis Sci，2011，56（7）：2017-2023.

[7] Tu S，Bhagat G，Cui G，et al.Over expression of interleukin-1[beta] induces gastric inflammation and cancer and mobilizes myeloid-derived suppressor cells in mice[J].Cancer Cell，2008，14（8）：408-419.

[8] Yoo E J，Park S Y，Cho N Y，et al.Influence of IL-1B polymorphism on CpG island hypermethylation in Helicobacter pylori-infected gastric cancer[J].Virchows Arch，2010，456（6）：647-652.

[9] EL-Omar E M.The importance of interleukin l beta in Helicobacter pylori associated disease[J].Gut，2001，48（6）：743-747.

[10] Machado J C，Pharoah P，Sousa S，et al.Interleukin-lB and interleukin-1RN polymorphism are associated with increased risk of gastric carcinoma[J].Gastroenterology，2001，121（4）：82.

[11] Kudo T，Kane T，F(xiàn)ujinami H，et al.Role of host genetic factors in gastric carcinogenesis[J].Nihon Rinsho，2009，67（12）：2257-2262.

[12] Wex T，Leodolter A，Bornschein J，et al.Interleukin 1 beta （IL-1B） gene polymorphisms are not associated with gastric carcinogenesis in Germany[J].Anticancer Res，2010，30（2）：505-511.

[13]賈皚，龔均，厲英超，等.IL-1β-511位點和TNF-α-308位點基因多態(tài)性與陜西漢族非賁門胃癌的關(guān)系[J].西安交通大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2009，30（1）：70-72.

[14]田淑梅，張淑靜，韓爽.生物微矩陣（芯片）方法檢測100例幽門螺桿菌抗體的臨床分析[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2011，8（17）：102-103.

[15] Martínez T，Hernández-Suárez G，Bravo M M，et al.Association of interleukin-1 genetic polymorphism and CagA positive Helicobacter pylori with gastric cancer in Colombia[J].Rev Med Chil，2011，139（10）：1313-1321.

（收稿日期：2014-04-01） （本文編輯：蔡元元）endprint

我國正常人群中Hp感染率在50%～60%之間，研究發(fā)現(xiàn)河南漢族人群中Hp-IgG陽性率高達(dá)55.4%，與國內(nèi)田淑梅等[14]研究結(jié)果基本相符。另一項國外研究發(fā)現(xiàn)，一般人群中Hp感染雖然較高，但胃炎、胃癌等與HP感染高度相關(guān)的消化道疾病發(fā)病率則處于相對較低水平，分析認(rèn)為可能與Hp菌株毒力基因分布及宿主炎癥因子某些基因位點突變相關(guān)[15]。因此，筆者在研究宿主炎癥因子某些突變熱點的同時，也要充分考慮人群中感染HP毒力基因的分子特征，運用分子流行病學(xué)研究方法分析二者在普通人群和患病人群中交互作用，這對揭示胃癌患者中HP感染、炎癥因子基因位點突變在疾病發(fā)生機(jī)制中的作用有著重要的價值。

綜上所述，Hp感染后，攜帶IL-1B-31和IL-1B-511 T/T基因型與胃癌發(fā)病密切有關(guān)。目前IL-1B-31和511基因位點突變與胃癌發(fā)生仍存在爭議。在今后研究中，應(yīng)充分考慮研究的樣本量大小、研究人群的種族、Hp感染情況及Hp菌株毒力基因分子特征等因素。

參考文獻(xiàn)

[1] Hnatyszyn A，Wielgus K，Kaczmarek-Rys M，et al.Interleukin-1 gene polymorphisms in chronic gastritis patients infected with Helicobacter pylori as risk factors of gastric cancer development[J].Arch Immunol Ther Exp （Warsz），2013，61（6）：503-512.

[2]秦慶穎，陳柱花，秦慶顏.消化性潰瘍與幽門螺桿菌感染相關(guān)性分析[J]. 中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2013，10（11）：130-131.

[3] Tahara T，Shibata T，Yamashita H，et al.Synergistic effect of IL-1β and TNF-α polymorphisms on the H. pylori-related gastric pre-malignant condition[J].Hepato Gastroenterology，2012，59（120）：2416-2420.

[4]林麥連.幽門螺桿菌感染與胃癌臨床病理特征、細(xì)胞凋亡的關(guān)系分析[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2011，8（16）：72-73.

[5] Zhao J D，Geng P L，Li Z Q，et al.Associations between interleukin-1 polymorphisms and gastric cancers among three ethnicities[J].World J Gastroenterol，2012，18（47）：7093-7099.

[6] He B S，Pan Y Q，Xu Y F，et al.Polymorphisms in interleukin-1B （IL-1B） and interleukin 1 receptor antagonist （IL-1RN） genes associate with gastric cancer risk in the Chinese population[J].Dig Dis Sci，2011，56（7）：2017-2023.

[7] Tu S，Bhagat G，Cui G，et al.Over expression of interleukin-1[beta] induces gastric inflammation and cancer and mobilizes myeloid-derived suppressor cells in mice[J].Cancer Cell，2008，14（8）：408-419.

[8] Yoo E J，Park S Y，Cho N Y，et al.Influence of IL-1B polymorphism on CpG island hypermethylation in Helicobacter pylori-infected gastric cancer[J].Virchows Arch，2010，456（6）：647-652.

[9] EL-Omar E M.The importance of interleukin l beta in Helicobacter pylori associated disease[J].Gut，2001，48（6）：743-747.

[10] Machado J C，Pharoah P，Sousa S，et al.Interleukin-lB and interleukin-1RN polymorphism are associated with increased risk of gastric carcinoma[J].Gastroenterology，2001，121（4）：82.

[11] Kudo T，Kane T，F(xiàn)ujinami H，et al.Role of host genetic factors in gastric carcinogenesis[J].Nihon Rinsho，2009，67（12）：2257-2262.

[12] Wex T，Leodolter A，Bornschein J，et al.Interleukin 1 beta （IL-1B） gene polymorphisms are not associated with gastric carcinogenesis in Germany[J].Anticancer Res，2010，30（2）：505-511.

[13]賈皚，龔均，厲英超，等.IL-1β-511位點和TNF-α-308位點基因多態(tài)性與陜西漢族非賁門胃癌的關(guān)系[J].西安交通大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2009，30（1）：70-72.

[14]田淑梅，張淑靜，韓爽.生物微矩陣（芯片）方法檢測100例幽門螺桿菌抗體的臨床分析[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2011，8（17）：102-103.

[15] Martínez T，Hernández-Suárez G，Bravo M M，et al.Association of interleukin-1 genetic polymorphism and CagA positive Helicobacter pylori with gastric cancer in Colombia[J].Rev Med Chil，2011，139（10）：1313-1321.

（收稿日期：2014-04-01） （本文編輯：蔡元元）endprint

我國正常人群中Hp感染率在50%～60%之間，研究發(fā)現(xiàn)河南漢族人群中Hp-IgG陽性率高達(dá)55.4%，與國內(nèi)田淑梅等[14]研究結(jié)果基本相符。另一項國外研究發(fā)現(xiàn)，一般人群中Hp感染雖然較高，但胃炎、胃癌等與HP感染高度相關(guān)的消化道疾病發(fā)病率則處于相對較低水平，分析認(rèn)為可能與Hp菌株毒力基因分布及宿主炎癥因子某些基因位點突變相關(guān)[15]。因此，筆者在研究宿主炎癥因子某些突變熱點的同時，也要充分考慮人群中感染HP毒力基因的分子特征，運用分子流行病學(xué)研究方法分析二者在普通人群和患病人群中交互作用，這對揭示胃癌患者中HP感染、炎癥因子基因位點突變在疾病發(fā)生機(jī)制中的作用有著重要的價值。

綜上所述，Hp感染后，攜帶IL-1B-31和IL-1B-511 T/T基因型與胃癌發(fā)病密切有關(guān)。目前IL-1B-31和511基因位點突變與胃癌發(fā)生仍存在爭議。在今后研究中，應(yīng)充分考慮研究的樣本量大小、研究人群的種族、Hp感染情況及Hp菌株毒力基因分子特征等因素。

參考文獻(xiàn)

[1] Hnatyszyn A，Wielgus K，Kaczmarek-Rys M，et al.Interleukin-1 gene polymorphisms in chronic gastritis patients infected with Helicobacter pylori as risk factors of gastric cancer development[J].Arch Immunol Ther Exp （Warsz），2013，61（6）：503-512.

[2]秦慶穎，陳柱花，秦慶顏.消化性潰瘍與幽門螺桿菌感染相關(guān)性分析[J]. 中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2013，10（11）：130-131.

[3] Tahara T，Shibata T，Yamashita H，et al.Synergistic effect of IL-1β and TNF-α polymorphisms on the H. pylori-related gastric pre-malignant condition[J].Hepato Gastroenterology，2012，59（120）：2416-2420.

[4]林麥連.幽門螺桿菌感染與胃癌臨床病理特征、細(xì)胞凋亡的關(guān)系分析[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2011，8（16）：72-73.

[5] Zhao J D，Geng P L，Li Z Q，et al.Associations between interleukin-1 polymorphisms and gastric cancers among three ethnicities[J].World J Gastroenterol，2012，18（47）：7093-7099.

[6] He B S，Pan Y Q，Xu Y F，et al.Polymorphisms in interleukin-1B （IL-1B） and interleukin 1 receptor antagonist （IL-1RN） genes associate with gastric cancer risk in the Chinese population[J].Dig Dis Sci，2011，56（7）：2017-2023.

[7] Tu S，Bhagat G，Cui G，et al.Over expression of interleukin-1[beta] induces gastric inflammation and cancer and mobilizes myeloid-derived suppressor cells in mice[J].Cancer Cell，2008，14（8）：408-419.

[8] Yoo E J，Park S Y，Cho N Y，et al.Influence of IL-1B polymorphism on CpG island hypermethylation in Helicobacter pylori-infected gastric cancer[J].Virchows Arch，2010，456（6）：647-652.

[9] EL-Omar E M.The importance of interleukin l beta in Helicobacter pylori associated disease[J].Gut，2001，48（6）：743-747.

[10] Machado J C，Pharoah P，Sousa S，et al.Interleukin-lB and interleukin-1RN polymorphism are associated with increased risk of gastric carcinoma[J].Gastroenterology，2001，121（4）：82.

[11] Kudo T，Kane T，F(xiàn)ujinami H，et al.Role of host genetic factors in gastric carcinogenesis[J].Nihon Rinsho，2009，67（12）：2257-2262.

[12] Wex T，Leodolter A，Bornschein J，et al.Interleukin 1 beta （IL-1B） gene polymorphisms are not associated with gastric carcinogenesis in Germany[J].Anticancer Res，2010，30（2）：505-511.

[13]賈皚，龔均，厲英超，等.IL-1β-511位點和TNF-α-308位點基因多態(tài)性與陜西漢族非賁門胃癌的關(guān)系[J].西安交通大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2009，30（1）：70-72.

[14]田淑梅，張淑靜，韓爽.生物微矩陣（芯片）方法檢測100例幽門螺桿菌抗體的臨床分析[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2011，8（17）：102-103.

[15] Martínez T，Hernández-Suárez G，Bravo M M，et al.Association of interleukin-1 genetic polymorphism and CagA positive Helicobacter pylori with gastric cancer in Colombia[J].Rev Med Chil，2011，139（10）：1313-1321.

（收稿日期：2014-04-01） （本文編輯：蔡元元）endprint