徐冰鈺

(昆明圣火藥業(yè)集團(tuán)有限公司, 云南 昆明 650217)

鉤苞大丁草(GerberadelavayiFranch.)為菊科大丁屬植物。又名鉤苞燈草、火草、小一支箭、大火草[1]。具有清熱利濕，消積殺蟲。主治痢疾，胃痛，消化不良，蛔蟲癥[2]。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，發(fā)現(xiàn)沒(méi)有控制其藥材質(zhì)量的文獻(xiàn)報(bào)道。采用薄層色譜法對(duì)其進(jìn)行了薄層鑒別研究，對(duì)其質(zhì)量控制有一定的意義。

1 儀器、試驗(yàn)材料、對(duì)照品、樣品

儀器：賽多利斯BP221S萬(wàn)分之一電子天平；賽多利斯BS2000S百分之一電子天平；100×100 mm雙槽薄層色譜展開缸；試驗(yàn)材料：乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、甲苯、氯仿、甲酸等試劑均為分析純；硅膠G板、硅膠GF254板、硅膠H板(規(guī)格：50×100 mm、100×100 mm；厚度：0.20～0.25 mm)，青島海洋化工廠出品。以上試驗(yàn)材料均購(gòu)自昆明市化玻供應(yīng)站；對(duì)照品：大丁苷，批號(hào)：20080501，化學(xué)組制備提供；樣品：鉤苞大丁草：批號(hào)：20070301、20080401、20080501，由昆明圣火藥業(yè)(集團(tuán))有限公司提供；

2 方法與結(jié)果

2.1 試驗(yàn)條件的考察 影響薄層鑒別的因素包括有效成分的提取方法、薄層板的種類、展開系統(tǒng)的組成、顯色劑、點(diǎn)樣量等。通過(guò)試驗(yàn)對(duì)以上因素進(jìn)行了考察，便于獲得理想的薄層色譜條件。

2.1.1 提取方法的考察 方法一：取本品5.02 g，加濃度為95%乙醇50 mL，回流提取2 h，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)訚舛葹?5%乙醇5 mL使溶解，作為供試品溶液。

方法二：取本品5.07 g，加甲醇50 mL，回流提取2 h，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液。方法三：取本品4.97 g，加濃度為95%乙醇50 mL，回流提取2 h，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)铀?5 mL分次洗滌，合并洗液，用氯仿25、25、25 mL萃取3，棄去氯仿液，水液用正丁醇50、25、25 mL萃取3，合并正丁醇液，置水浴上蒸干，放冷，殘?jiān)?5%乙醇乙醇5 mL使溶解，作為供試品溶液。

結(jié)論：對(duì)3提取方法進(jìn)行比較，方法一、二斑點(diǎn)情況無(wú)明顯差異，方法三、雖然能去除部分雜質(zhì)，但在對(duì)大丁苷的分離無(wú)明顯影響，鑒于以上情況，從簡(jiǎn)單可行、安全易得的方面考慮，確定方法一為供試品溶液的制備方法。

2.1.2 展開劑的選擇 采用(1)氯仿-甲醇-水(7：3：1)；(2)氯仿-甲醇-水(30：10：3)的下層溶液每5 mL加甲酸0.1 mL；(3)甲苯-醋酸乙酯-甲酸-乙醇(3：4：1)；(4)甲苯-醋酸乙酯-甲酸-乙醇(3：4：1：2)；(5)正丁醇-醋酸-水(4：1：1)等條件為展開劑展開，發(fā)現(xiàn)以(2)、(4)、(5)為展開劑所得色譜斑點(diǎn)圓整，Rf值適中，其中展開劑(2)的分離效果最佳，故展開劑定為：氯仿-甲醇-水(30：10：3)的下層溶液每5 mL加甲酸0.1 mL。

2.1.3 薄層板的選擇 采用硅膠G板、硅膠GF254板、硅膠H板作為固定相，發(fā)現(xiàn)硅膠G板、硅膠GF254板分離效果好，其中以硅膠GF254板為吸附劑所得色譜在紫外光365 nm、254 nm下均有熒光或暗斑。故吸附劑選擇硅膠GF254，既能滿足分離需要，又便于觀察。

2.1.4 顯色劑的選擇 曾采用氨熏、碘蒸氣熏、重氮化試劑、異羥肟酸鐵試劑、硫酸乙醇試劑、熒光觀察進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn)用氨熏、硫酸乙醇試劑能使大丁苷顯色，但氨熏的供試品色譜中，由于其他物質(zhì)也顯色，背景干擾大，大丁苷與其他物質(zhì)界線不明，而硫酸乙醇試劑無(wú)背景干擾，但斑點(diǎn)顏色(藍(lán)紫色)較淡，退色快，經(jīng)用不同濃度的硫酸乙醇進(jìn)行考察，斑點(diǎn)顏色無(wú)明顯改變。結(jié)合薄層板的選擇情況，確定為在365nm熒光下觀察。

2.1.5 點(diǎn)樣量的選擇 選取本品5 g，加乙醇50 mL，回流提取2 h，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液。分別吸取2、5、10 μL點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿-甲醇-水(30：10：3)的下層溶液每5 mL加甲酸0.1 mL為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視，以5 μL點(diǎn)樣量的斑點(diǎn)最清晰，圓整，故點(diǎn)樣量定為5 μL。

2.1.6 陰性對(duì)照試驗(yàn) 取大丁苷對(duì)照品、鉤苞大丁草、陰性對(duì)照，制備對(duì)照藥材溶液、供試品溶液、空白溶液進(jìn)行薄層鑒別，結(jié)果表明空白無(wú)干擾。

2.2 試驗(yàn)結(jié)果 根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，鉤苞大丁草的鑒別方法定為：取本品5 g，加乙醇50 mL，回流提取2 h，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液。取大丁苷對(duì)照品，加乙醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典)版附錄Ⅵ B)吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿-甲醇-水(30：10：3)的下層溶液每5 mL加甲酸0.1 mL為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

3 討論

通過(guò)對(duì)鉤苞大丁草薄層鑒別的研究，發(fā)現(xiàn)采用薄層色譜

對(duì)鉤苞大丁草進(jìn)行鑒別方法簡(jiǎn)便易行，專屬性強(qiáng)，陰性無(wú)干擾，可為鉤苞大丁草質(zhì)量控制提供了參考。但因鉤苞大丁草樣本量有限，需對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步累積研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]王正坤，哀牢本草[M].太原：山西省科學(xué)技術(shù)出版社，1991：22.

[2]全國(guó)中草藥匯編寫組，全國(guó)中草藥匯編[M].上冊(cè)，北京：人民衛(wèi)生出版社，1975：