美國(guó)食品質(zhì)量保護(hù)法（FQPA）和歐盟91/414/EEC指令規(guī)定，如果農(nóng)藥在食品中存在，其含量應(yīng)該低于農(nóng)藥帶來(lái)健康風(fēng)險(xiǎn)的量。隨著農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的大規(guī)模發(fā)展，上個(gè)世紀(jì)已經(jīng)合成了數(shù)百種農(nóng)藥，并且被廣泛的用于保護(hù)農(nóng)作物。較新的農(nóng)藥被合成并持續(xù)用于農(nóng)作物，這就使得食品和環(huán)境中的目標(biāo)（或預(yù)期分析物）和非目標(biāo)的農(nóng)藥分析都非常重要。與四級(jí)桿的質(zhì)譜儀僅測(cè)定目標(biāo)分析物不同（定義選定離子的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)或MRMs），時(shí)間飛行（TOF）質(zhì)譜儀可測(cè)定目標(biāo)和非目標(biāo)的分析物。飛行時(shí)間質(zhì)譜儀可以采集全部譜圖信息，因此可用于重新分析那些存在的“非目標(biāo)”的化合物。建立一種生菜葉中農(nóng)殘分析的方法，生菜葉使用QuEChERS法進(jìn)行提?。焖?、簡(jiǎn)單、便宜、高效、耐用和安全）。生菜葉的提取液中加入了130種不同濃度的農(nóng)藥，利用PerkinElmer AxION？2 TOF MS作為檢測(cè)器的超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（UHPLC-MS）進(jìn)行分析，能夠很好的測(cè)定大多數(shù)的農(nóng)藥，且滿足EU指令10ppb的檢測(cè)限（LOD）要求。利用AxIONSoloTM高通量的軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行進(jìn)一步的分析，當(dāng)存在的化合物濃度超過(guò)10ppb的閾值時(shí)，會(huì)被標(biāo)記為特定的顏色，這將有助于快速篩查樣品中是否存在加入的130種分析物。與時(shí)間短及強(qiáng)大的篩選軟件相結(jié)合，有助于簡(jiǎn)化分析，從而減少分析時(shí)間。

試驗(yàn)條件

樣品制備

有機(jī)生產(chǎn)的生菜樣品采用QuEChERS法進(jìn)行制備，10g生菜葉均質(zhì)加入農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品（不同濃度）和10mL乙腈后，加入鹽（1g氯化鈉，4g硫酸鎂，1g檸檬酸納和0.5g檸檬酸氫二鈉），振搖并離心（3700rpm）。取上清液1mL轉(zhuǎn)移至含有伯胺及仲胺（PSA，50mg）和硫酸鎂（150mg）的SPE微離心管中，混合物振搖（30S），離心（3700rpm，1min），取上清液（1mL）通過(guò)加入含有5%甲酸（10μL）的乙腈進(jìn)行酸化，進(jìn)樣前過(guò)濾（0.2mmPTFE濾膜）。

LC條件

泵：PerkinElmer FlexarTM FX-15泵；

流動(dòng)相A：含有0.1%甲酸的水；

流動(dòng)相B：含有0.1%甲酸的乙腈；

梯度條件：開始梯度B泵比例為5%，5min內(nèi)B泵比例從5%升至90%并維持2min；

使用色譜柱：PerkinElmer B r o w n l e eT M SPP C-18，2 x 5 0 m m ， 2.7μm；

流速：0.4mL/min；

進(jìn)樣體積：4μL，局部進(jìn)樣模式。質(zhì)譜條件

質(zhì)譜儀：PerkinElmer AxION2 TOF；

離子源：PerkinElmer UltrasprayTM 2（雙ESI源）；

離子化模式：陽(yáng)離子；毛細(xì)管出口電壓：100V；

脈沖捕集模式：100～1000m/z D7：65，D8：92），內(nèi)標(biāo)使用m/z118.08625和922.00979作為質(zhì)量鎖定離子。

結(jié)果與討論

130種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品在7min之內(nèi)分離完成（圖1），AxION 2 TOF使用其自身的TrapPulseTM模式，增加TOF的工作周期，從而顯著提高信號(hào)強(qiáng)度。

AxION Solo軟件能夠快速的鑒定130種農(nóng)藥是否存在于通過(guò)QuEChERS法處理的生菜葉提取液中。AxION Solo可以精確地從分析物中自動(dòng)提取目標(biāo)化合物的離子色譜。該軟件可以輕易的從Excel表格導(dǎo)入目標(biāo)化合物信息，包括化合物名稱和元素組成（圖2）。該軟件可以針對(duì)該目標(biāo)列表中存在的[M+H]+離子或者任何加和離子（Na+，K+等）在幾百個(gè)分析物中進(jìn)行檢索。除了譜圖檢索外，該軟件還可以根據(jù)用戶定義的保留時(shí)間窗口進(jìn)行搜索，從而進(jìn)一步提高了目標(biāo)分析物的特異性檢測(cè)。即使在低至10ppb的濃度條件，生菜提取液中的目標(biāo)化合物質(zhì)量準(zhǔn)確度誤差也小于5ppm，滿足規(guī)范的要求。根據(jù)所有同位素的精確的質(zhì)量和準(zhǔn)確豐度比，AxION Solo軟件對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行確證。AxION Solo軟件可以快速目測(cè)樣品中是否存在分析物（圖3）。單個(gè)存在的農(nóng)藥會(huì)被標(biāo)記為不同的顏色以便于識(shí)別。除了“目標(biāo)視圖”外，還允許個(gè)別目標(biāo)農(nóng)藥在一組設(shè)定的樣品中快速被顯現(xiàn)，同時(shí)，可以獲得一個(gè)選定樣品中所有目標(biāo)化合物存在或不存在的信息，見圖3所示。

由于歐盟限定食品中農(nóng)藥額含量不超過(guò)10ppb，數(shù)百批次的樣品進(jìn)行數(shù)百個(gè)農(nóng)藥的篩查非常耗時(shí)。AxION Solo軟件可以在存在農(nóng)藥濃度超過(guò)10ppb時(shí)快速的實(shí)現(xiàn)可視化。利用軟件提供的非常豐富的匹配列表信息，給定的農(nóng)藥峰面積閾值可根據(jù)10ppb標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行設(shè)置或自定義設(shè)定，此外峰面積的閾值也可以設(shè)定為其與內(nèi)標(biāo)峰面積的比。利用可視化的軟件，樣品峰面積超過(guò)設(shè)定的閾值，將被標(biāo)記為另外一種顏色（圖4A和4B）。采用這種易于閱讀的彩色編碼視圖，可以非常迅速的鑒定那些含有超過(guò)法規(guī)限定含量農(nóng)藥的樣品，單個(gè)或批量樣品可以通過(guò)軟件快速生成報(bào)告。批量的報(bào)告可以被導(dǎo)入Excel表格，以便進(jìn)一步分析。

結(jié)論

AxION 2 TOF MS能夠非常容易的測(cè)定濃度低于或等于10ppb的法規(guī)常規(guī)限定的農(nóng)藥。精確的質(zhì)量和保留時(shí)間均可用于鑒定樣品中的農(nóng)藥。利用強(qiáng)大的高通量AxION Solo軟件，采用一種易于閱讀的彩色編碼方案，可以快速鑒定大批量樣品中數(shù)百種農(nóng)藥是否存在。再者，該軟件允許用戶自定義每個(gè)分析物積分的峰面積閾值，從而可以快速的將含有或超過(guò)法規(guī)規(guī)定10ppb濃度的樣品分析顯示出來(lái)。endprint