黃曉芹 卿大雙 彭易蘭

成都中醫(yī)藥大學(xué)民族醫(yī)藥學(xué)院，四川 成都 611137

巴桑母酥油丸為藏醫(yī)傳統(tǒng)滋補(bǔ)方，由清熱的三果 (余甘子、訶子、毛訶子)藥酥和治療寒癥的五根 (天冬、黃精、西藏棱子芹、喜馬拉雅紫茉莉、蒺藜)藥酥合成[1]。因藥味較多，有效劑量大、油脂重，口味特殊，服用不便，如能精簡(jiǎn)組方，將有助于其推廣運(yùn)用。故對(duì)其服用后藥物吸收情況進(jìn)行了初步探討，為進(jìn)一步研究其組方中可能的主要成分提供基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥品和試劑 巴桑母酥油丸為青海帝瑪爾藏藥藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批準(zhǔn)文號(hào):國(guó)藥準(zhǔn)字 Z63020163，批號(hào)20120211。乙腈、甲醇、甲酸等均為色譜純。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 8～10周齡雄性昆明種小鼠20只，體質(zhì)量22～28g，購(gòu)于成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。

1.3 儀器設(shè)備 高效液相色譜儀 (安捷倫1200)，色譜柱(Kromasil Etemity-5 C18);離心機(jī) (TDZ5-WS多管架自動(dòng)平衡離心機(jī));注射器;電子天平;小鼠灌胃針頭;移液管;燒杯;試管;抽濾瓶;量筒;0.45μm微孔濾膜。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 色譜條件 色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠填充柱;流動(dòng)相:乙腈 (A)-0.25%甲酸 (B)梯度洗脫 (0～20min，3% →12%A;20～40min，12% →16%A;40～60min，16%→22%A);流速:0.8ml/min;柱溫30℃;檢測(cè)波長(zhǎng)297nm。

將乙腈 (流動(dòng)相:A)和0.25%甲酸水 (流動(dòng)相:B)分別經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾3次，將過濾好的流動(dòng)相分別超聲30min。

2.2 巴桑母酥油丸溶液制備 石油醚脫脂后制成甲醇溶液:巴桑母酥油丸置于索式提取器中，石油醚回流提取除去脂溶性成分，藥渣揮發(fā)干燥。取1g藥渣用10ml甲醇超聲提取20min×2次，過濾，合并濾液，用甲醇將濾液定容到10ml，過0.45μm微孔濾膜，冷藏備用。

2.3 巴桑母酥油丸含藥血清制備 小鼠禁食一晚(自由飲水)后隨機(jī)分為空白血清提供組和含藥血清提供組，其中含藥血清提供組給予1.5g/kg巴桑母酥油丸灌胃，于灌胃30、60、120min后乙醚麻醉小鼠，去眼球取全血后處死小鼠。將采集的全血靜置30min后，在3000r/min條件下離心10min得到血清。取血清1ml加入4ml的甲醇，渦旋5min，再3000r/min條件下離心30min×2次。取上清液過0.45μm微孔濾膜。冷凍保存?zhèn)溆谩？瞻籽逄峁┙M小鼠除不給予灌胃外，血清分離保存同含藥血清組。

2.4 HPLC圖譜測(cè)定 分別取2.2，2.3中所得的巴桑母酥油丸甲醇溶液和含藥血清、空白血清20μl上樣，記錄分析巴桑母酥油丸甲醇溶液和含藥血清、空白血清含藥血清圖譜。

3 結(jié)果和討論

灌胃巴桑母酥油丸后不同時(shí)間分離的含藥血清HPLC圖譜與空白血清和巴桑母酥油丸體外HPLC圖譜的比較結(jié)果見圖1-3。

從圖中可以看出，灌胃后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)，含藥血清的可見峰均顯著少于巴桑母酥油丸在體外的可見峰，但均顯著多于空白血清的可見峰，提示我們?cè)趯?shí)驗(yàn)條件下，灌胃后巴桑母酥油丸中能被吸收的成分是有限的，灌胃后隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，含藥血清的可見峰逐漸增多，其吸收入血的成分在逐漸增加。在灌胃后60、120min含藥血清的指紋圖譜峰數(shù)和峰值沒有非常顯著的差異，提示灌胃后60～120min間，藥物的吸收較為平穩(wěn)。值得注意的是，灌胃后60min和120min的含藥血清，在進(jìn)樣后30min時(shí)，均出現(xiàn)了一個(gè)較為明顯的空白血清和巴桑母酥油丸體外指紋圖譜中所沒有的峰，提示可能有新的成分在血清中出現(xiàn)。其來源是巴桑母酥油丸在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物或是藥物作用下機(jī)體產(chǎn)生的新的成分，有待進(jìn)一步研究。

[1]毛繼祖，卡洛，毛韶玲.藍(lán)琉璃 [M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2012.