董海鵬 李 軍 姜 華 陳麗娜 路西明

1.國家知識產(chǎn)權(quán)局專利局，北京 100088;2.河南科技大學(xué)化工與制藥學(xué)院，河南 洛陽 471023;3.河南科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院，河南 洛陽 471003

《中華人民共和國藥典》[1]2010年版規(guī)定山茱萸為山茱萸科植物山茱萸的干燥成熟果肉”。但山茱萸市場需求量大，供需矛盾尖銳，加工去核的勞動量大，加之部分的學(xué)者認為山茱萸可以與核同用[2]，造成市售山茱萸摻有15～85%的果核。究竟摻核山茱萸能否在臨床使用，是否造成不良反應(yīng)，臨床病例報道不一，爭論頗大[3]。為了進一步指導(dǎo)山茱萸的合理使用，本文采用HPLC-PDA技術(shù)對山茱萸果核果肉的中所含化學(xué)成分的異同進行初步研究?，F(xiàn)報道如下:

1 儀器與試藥

Waters 600高效液相色譜儀，PDA檢測器，Empower色譜工作站，KQ-50DB超聲波清洗器 (昆山超聲波儀器有限公司)，METTLER-AE 240型電子分析天平 (瑞士梅特勒公司)。山茱萸果核果肉采自河南省洛陽市嵩縣羅莊村、河南省洛陽市欒川縣十里坪和河南省南陽市西峽，經(jīng)河南科技大學(xué)路西明教授鑒定為山茱萸科植物山茱萸的果核及其果肉。甲醇 (色譜純)，屈臣氏蒸餾水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

2.1.1 山茱萸果肉 取干燥的山茱萸果肉5g，精密稱定，用50%乙醇回流提取3次，每次1h，溶劑用量50mL，趁熱過濾，合并濾液，減壓濃縮，將其定量轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶，并用50%乙醇定容置至刻度，搖勻，待用。取上述溶液1.0mL，稀釋至50mL，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.1.2 山茱萸果核 取適當(dāng)粉碎的山茱萸果核5g，其余操作同“2.1.1”項下山茱萸果肉樣品的制備方法。

2.2 色譜條件 YWG C18色譜柱 (250 mm × 4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇 (A)-0.1%磷酸水溶液 (B)，梯度洗脫[0～60 min，A-B(15:85)→ (50:50)];流速:1.0 mL·min-1;柱溫:30℃;檢測波長:270nm;進樣量:20μL。

2.3 穩(wěn)定性實驗 取洛陽嵩縣羅莊村山茱萸果核果肉適量，按照“2.1”項下方法制備各供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10 h進樣，記錄指紋圖譜。結(jié)果表明，山茱萸果核果肉成分的各主要色譜峰相對保留時間和相對峰面積比值無明顯變化，RSD 分別為 1.10～2.07%、1.05～1.89%。說明供試品溶液在10小時之內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 精密度實驗 取洛陽嵩縣羅莊村山茱萸果核果肉適量，按照“2.1”項下方法制備各供試品溶液，重復(fù)進樣6次，記錄指紋圖譜。結(jié)果表明，山茱萸果核果肉成分的各主要色譜峰相對保留時間和相對峰面積比值無明顯變化，RSD分別為0.50～1.21%、0.22～0.87%。說明儀器精密度良好。

2.5 重復(fù)性實驗 取洛陽嵩縣羅莊村山茱萸果核果肉適量，按照“2.1”項下方法制備各供試品溶液6份，記錄色譜圖。結(jié)果表明，山茱萸果核果肉成分的各主要色譜峰相對保留時間和相對峰面積比值的 RSD為1.55～2.14%、1.30～1.98%。說明重復(fù)性良好。

2.6 樣品測定 取不同產(chǎn)地的山茱萸果核果肉 (河南省洛陽市嵩縣羅莊村、河南省洛陽市欒川縣十里坪和河南省南陽市西峽)，參照“2.1”項下方法制備山茱萸果核果肉供試品溶液，并按照“2.2”項下色譜方法記錄指紋圖譜。樣品典型的HPLC指紋圖譜見圖1。

2.7 果核、果肉成分比較 對比不同產(chǎn)地的山茱萸果核果肉HPLC指紋圖譜，并結(jié)合相應(yīng)色譜峰的紫外光譜，發(fā)現(xiàn)果核果肉中的成分存在較大的差異，具體結(jié)果見表1。

表1 山茱萸果核果肉成分比較

3 討論

3.1 通過比較山茱萸果核果肉在225、270、300、330nm波長下各樣品的HPLC指紋圖譜，結(jié)果顯示270nm波長下各供試品圖譜中色譜峰的數(shù)目較多，基線漂移較小，故確定色譜條件的檢測波長為270nm。

3.2 建立HPLC指紋圖譜時考察的洗脫條件有:A[0～30 min，甲醇 -0.1%磷酸水溶液 (50∶50)→ (100∶0)]、B[0～30～50 min，甲醇-0.1%磷酸水溶液 (10∶90)→ (50∶50)→ (100∶0)]、C [0～50～55 min，甲醇 -0.1%磷酸水溶液 (15∶85)→ (60∶40)→ (100∶0)]、D [0～60 min，甲醇-0.1%磷酸水溶液 (15:85)→ (50:50)]。通過比較上述條件下各樣品的HPLC圖譜，發(fā)現(xiàn)在洗脫條件D下，樣品中各色譜峰的分離度較好。

3.3 根據(jù)各色譜峰的PDA光譜可知:果核特有的成分可分為兩類，即保留時間在20.202、22.385min的成分，其最大吸收波長在 220、260nm，和保留時間在4.950、6.210、8.190、 11.262、 12.000、 13.911、 16.842、 19.002、20.202、 22.385、 23.215、 24.285、 29.001、 30.192、30.999、33.211、45.322、46.680min 的成分，其最大吸收波長在220、275nm，其典型的紫外吸收光譜圖分別為圖2中的A和B。果肉中特有的成分可分為兩類，即保留時間在24.258、30.999min的成分，其最大吸收波長在240nm，和保留時間在3.988、20.000、53.951min的成分，其典型的紫外吸收光譜圖分別為圖2中的C和B。果核果肉共有的成分的典型的紫外吸收光譜圖分別為圖2中的B。據(jù)文獻[4、5]推測紫外光譜A、B代表沒食子酸類相關(guān)化合物，C代表馬錢苷、莫諾苷等環(huán)烯醚萜類化合物。

3.4 研究結(jié)果表明山茱萸果核果肉中的成分存在較大的差異，果核中所含的成分遠多于果肉中的成分，且其中的成分以沒食子酸類相關(guān)化合物為主?；诖耍疚恼J為山茱萸一定要去核使用。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 (一部) [M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2]彭勃，季玉榮.山茱萸果核與果肉化學(xué)成份的對比分[J].河南中醫(yī)藥學(xué)刊，1999，14(2):13-14.

[3]張振凌，趙建穎，李娟山，等.茱萸去核的作用和方法研究[J].中藥材，2006，29(1):60-63.

[4]李小娜，霍長虹，殷瑋，等.山茱萸中馬錢苷和莫諾苷對照品的制備[J].中草藥，2006，37(8):1168-1170.

[5]帕麗達·阿不力孜，張麗靜，熱娜·卡斯木，等.高效液相色譜法測定新疆石榴皮中沒食子酸的含量[J].時珍國醫(yī)國藥，2007，18(10):2455-2456.