鄭 巖 王紅霞 陳隨清

河南中醫(yī)學(xué)院，河南 鄭州 450008

無(wú)花果為桑科榕屬植物無(wú)花果 (Ficus carica L.)，為藥食兼優(yōu)的植物。原產(chǎn)地中海及西南亞，現(xiàn)我國(guó)各地均有栽培[1]，主要分布于新疆、江蘇、浙江、福建、山東、上海、四川、陜西、甘肅、江西、廣東、河南等省，有悠久的栽培歷史，是開發(fā)應(yīng)用較廣的經(jīng)濟(jì)植物。其果實(shí)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，富含糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素和礦物元素，除食果外，其葉、根又俱含藥用成份，為藥食同源果品樹種[2]。我國(guó)應(yīng)用其葉、根入藥，治療腸炎，腹瀉;外用治癰腫?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，無(wú)花果葉中含有多種化學(xué)成分，包括香豆素、黃酮、揮發(fā)油、多糖、微量元素、氨基酸、維生素等[3]，其藥理作用包括抗菌、抗病毒、抗腫瘤、降血脂、降血糖、治療白癜風(fēng)、痔瘡等，藥效顯著[4]。無(wú)花果葉中所含的補(bǔ)骨脂素經(jīng)體外抑瘤率活性測(cè)試，表明對(duì)表皮癌、膀朧癌、肝癌均有顯著療效，并有較好的抗菌活性和降低血糖、血脂的作用。

為進(jìn)一步開發(fā)利用無(wú)花果葉，采用高效液相色譜法對(duì)無(wú)花果葉中補(bǔ)骨脂素的含量進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)不同提取方法進(jìn)行了初步探索，為建立無(wú)花果葉中有效成分的含量測(cè)定方法提供了科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 高效液相色譜儀 (LC-20AT，日本島津公司)，紫外檢測(cè)器 (SPD-20A，日本島津公司)，色譜工作站 (CBM-102，日本島津公司);無(wú)油真空泵 (HP-01，天津市恒奧科技發(fā)展有限公司);溶劑過(guò)濾器 (HL，天津市恒奧科技發(fā)展有限公司);數(shù)控超聲波清洗器 (KQ-500DV，昆山市超聲儀器有限公司);十萬(wàn)分之一天平(梅特勒，MettlerToledoAB 135-S);分析天平(BS2242S，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司);自動(dòng)雙重純水蒸餾器 (SZ-93，上海亞榮生化儀器廠);電子天平(JJ5000，常熟市雙杰測(cè)試儀器廠);粉碎機(jī) (FW200，北京中興偉業(yè)儀器有限公司);循環(huán)水式多用真空泵 (SHZ-95B，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)。

1.2 試劑 乙腈 (色譜純，天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司);甲醇 (分析純，北京化工廠);雙蒸水為自制。

1.3 對(duì)照品 補(bǔ)骨脂素為中國(guó)生物制品檢定所提供，批號(hào)110739-200814，經(jīng)HPLC檢測(cè)含量＞99%。

1.4 樣品 樣品均采于河南中醫(yī)學(xué)院，由河南中醫(yī)學(xué)院陳隨清教授鑒定為?？崎艑僦参餆o(wú)花果 (Ficus carica L.)的干燥葉。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取補(bǔ)骨脂素5.0mg置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(0.5mg/ml)。

2.2 供試品溶液的制備 取無(wú)花果葉適量研細(xì)。精密稱取0.5g置50ml量瓶中，加50%甲醇約50ml超聲提取30min。放置至室溫，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品。

2.3 色譜條件 色譜柱:phenomenex hydro ODS C18(250mm ×4.6mm，4μm)色譜柱，流動(dòng)相:乙腈 -水(55:45)，流速:1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng):290 nm，進(jìn)樣量:10μl，柱溫:32℃。在上述色譜條件下，補(bǔ)骨脂素與其他成分分離良好，見(jiàn)圖1。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察 取補(bǔ)骨脂素對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣4、6、8、10、15、20μl，以補(bǔ)骨脂素的進(jìn)樣量 (μg)為橫坐標(biāo)，峰面積 (×106)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為:y=0.9297x+0.0671，R2=0.9996，表明補(bǔ)骨脂素的進(jìn)樣量2～10μg時(shí)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.4.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取無(wú)花果葉粉末0.5g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備，按同樣的色譜條件進(jìn)行HPLC分析，進(jìn)樣6次，時(shí)間間隔為0、2、4、8、12、24小時(shí)，分別測(cè)定補(bǔ)骨脂素峰面積，計(jì)算RSD=1.00%。表明補(bǔ)骨脂素在本實(shí)驗(yàn)條件下至少48小時(shí)內(nèi)較穩(wěn)定。

2.4.3 精密度試驗(yàn) 取補(bǔ)骨脂素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按同樣的色譜條件進(jìn)行HPLC分析，連續(xù)進(jìn)樣6次，分別測(cè)定補(bǔ)骨脂素峰面積，計(jì)算RSD=0.76%。表明此方法精密度良好。

2.4.4 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取無(wú)花果葉粉末6份，各0.5g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備，按同樣的色譜條件進(jìn)行HPLC分析，分別測(cè)定補(bǔ)骨脂素峰面積，計(jì)算RSD=0.34%，表明此方法重現(xiàn)性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗(yàn) 取無(wú)花果葉粉末6份，各0.5g，精密稱定，于每份樣品中加入適量補(bǔ)骨脂素對(duì)照品溶液，按供試品溶液制備方法制備供試液，進(jìn)樣分析，計(jì)算回收率，平均回收率為102.2%，RSD=1.80%，表明本試驗(yàn)方法回收良好。

2.4.6 樣品含量測(cè)定 取六份無(wú)花果葉粉末各0.5g，分別精密稱定后，按上述制備方法制備，精密吸取供試品溶液，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算補(bǔ)骨脂素的含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 無(wú)花果葉含量測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)果與討論

3.1 提取溶劑的考察 分別用50%甲醇、75%甲醇、及甲醇超聲提取無(wú)花果葉，結(jié)果表明，用50%的甲醇提取補(bǔ)骨脂素效率最高。

3.2 提取時(shí)間的考察 用50%的甲醇作為溶劑提取無(wú)花果葉，分別超聲提取10、20、30min，結(jié)果表明，超聲提取30min的補(bǔ)骨脂素峰面積最大。

3.3 流動(dòng)相的考察 考察甲醇-水及乙腈-水作為流動(dòng)相，結(jié)果表明用乙腈-水=55:45做流動(dòng)相時(shí)，補(bǔ)骨脂素吸收峰能與其他成分有效分離，且基線較平穩(wěn)，雜質(zhì)峰較少，峰形好，因此選用乙腈-水=55:45作為流動(dòng)相進(jìn)行含量測(cè)定。

3.4 測(cè)定結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)建立的高效液相色譜法測(cè)定無(wú)花果葉中補(bǔ)骨脂素的含量方法，方法準(zhǔn)確、靈敏、簡(jiǎn)便、快速、重現(xiàn)性好，可作為其補(bǔ)骨脂素的含量測(cè)定的主要方法，并為今后無(wú)花果葉的質(zhì)量控制研究提供一定科學(xué)依據(jù)。

[1]中國(guó)藥材公司.中國(guó)中藥資源志要[M].北京:科學(xué)出版社，1994:186.

[2]車久玲.無(wú)花果的栽培歷史生態(tài)特性及藥用價(jià)值[J].山東林業(yè)科技，1995，26(5):19.

[3]劉弘，趙麗婭.無(wú)花果葉的化學(xué)及藥理研究進(jìn)展 [J].華夏醫(yī)學(xué)，2006，19(5):1049-1051.

[4]葉華，謝紹詩(shī)，張文清.無(wú)花果葉、根的藥用研究進(jìn)展[J].海峽藥學(xué)，2006，18(6):3-7.