歐陽可漢 沈先榮, 何 穎

1（海軍工程大學(xué)核能科學(xué)與工程系 武漢 430033）

2（海軍醫(yī)學(xué)研究所 上海 200433）

低劑量率電離輻射對(duì)健康的影響是學(xué)術(shù)界和公眾十分關(guān)注的問題。而在一些存在放射性的工作場所中，如核電站，存在中子-γ射線混合照射。研究低劑量率中子-γ射線混合照射對(duì)機(jī)體的影響對(duì)維護(hù)職業(yè)受照人群的健康具有重大意義。Wong等[1]研究發(fā)現(xiàn)原子彈爆炸幸存者的血清膽固醇水平相對(duì)較高，認(rèn)為其與電離輻射水平相關(guān)。膽固醇代謝異常將導(dǎo)致一些疾病的產(chǎn)生，比如動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病，阿爾茨海默病等神經(jīng)系統(tǒng)疾病[2-3]。肝臟作為唯一能夠?qū)Ⅲw內(nèi)過多的膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸的器官，對(duì)膽固醇代謝起著至關(guān)重要的作用。肝臟的膽固醇代謝異常將導(dǎo)致一些疾病的發(fā)生，比如膽汁淤積、黃疸病、膽結(jié)石，使肝功能出現(xiàn)大范圍異常[4-5]。同時(shí)膽固醇代謝和其他一些物質(zhì)（葡萄糖、脂肪酸）的代謝途徑還存在相互交叉。因此，當(dāng)一個(gè)代謝系統(tǒng)被擾亂，將會(huì)出現(xiàn)更大范圍的異常。故低劑量率電離輻射對(duì)機(jī)體膽固醇代謝的作用及其機(jī)制值得深入研究。

膽固醇 7α-羥化酶(CYP7A1)是膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸經(jīng)典途徑的主要限速酶，它在膽固醇代謝中起著重要的作用[6]。本研究采用低劑量率中子-γ射線混合照射大鼠，在照射14 d(γ射線累積照射劑量為 0.4676 Gy、中子累積照射劑量為 7.84 mGy)和31 d(γ-射線累積照射劑量為1.0354 Gy、中子累積照射劑量為17.36 mGy)后采集樣本，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法對(duì)肝臟細(xì)胞CYP7A1基因及調(diào)控其表達(dá)的核轉(zhuǎn)錄因子的mRNA水平進(jìn)行檢測。旨在研究低劑量率中子-γ射線混合照射對(duì)大鼠膽固醇分解代謝關(guān)鍵分子膽固醇 7α-羥化酶(CYP7A1)基因表達(dá)的影響，并初步探討其可能機(jī)制，為闡明低劑量率中子-γ射線混合照射對(duì)膽固醇代謝影響的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

BIO RAD Chromo 4實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀、Trizol reagent (Invitrogen 公司)、SYBR Green Premix Ex TapTM(TaKaBa,寶生物工程大連有限公司)、微量紫外分光光度計(jì) NanoDrop 1000(Thermo 公司)、DL2000 Marker、瓊脂糖。

1.2 動(dòng)物分組及處理

購買雄性Wistar大鼠60只（上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司），動(dòng)物飼養(yǎng)于海軍醫(yī)學(xué)研究所。編號(hào)后按隨機(jī)數(shù)字表法分為4組：(1)14 d后處死的空白對(duì)照組10只；(2)14 d后處死的混合照射組20只；(3)31 d后處死的空白對(duì)照組10只；(4)31 d后處死的混合照射組20只。照射組在海軍醫(yī)學(xué)研究所輻照室進(jìn)行照射，照射條件為：與60Co源距離為4.38 m，γ射線照射劑量率為0.0167 Gy·h-1，每天照射2 h，同時(shí)與252Cf源距離為0.75 m，中子劑量率0.028 mGy·h-1，每天照射20 h。期間動(dòng)物自由飲食飲水。在照射14 d (γ射線累積照射劑量0.4676 Gy、中子累積照射劑量7.84 mGy)、31 d (γ射線累積照射劑量1.0354 Gy、中子累積照射劑量17.36 mGy)后，馬上處死空白對(duì)照組大鼠10只、混合照射組大鼠 20只。迅速取出肝臟，制成單細(xì)胞懸液，PPS洗2次后備用。

1.3 肝臟總RNA的提取及cDNA合成

采用Trizol法提取總RNA，紫外分光光度計(jì)測定 260nm與 280nm處吸光度(A)的比值，即A260/A280，然后進(jìn)行總 RNA定量，-80℃下冷凍備用。cDNA合成是按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說明書進(jìn)行，取5000 ng的總RNA，加20 μL的試劑，再加雙蒸水至總體積為100 μL。

1.4 實(shí)時(shí)定量 PCR引物的設(shè)計(jì)合成

根據(jù)GenBank中基因信息，應(yīng)用Primer Primer 5軟件設(shè)計(jì)用于實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)檢測的目的基因和內(nèi)參基因引物序列。引物由上海生工生物技術(shù)有限公司合成，并且純化質(zhì)檢合格，具體信息見表 1。

表1 用于實(shí)時(shí)定量PCR測定的基因引物序列Table 1 Primers of genes used for RT-PCR

1.5 實(shí)時(shí)定量PCR檢測基因表達(dá)

先分別對(duì)14 d和31 d樣品進(jìn)行混裝：10只空白對(duì)照組大鼠的cDNA等量混裝成為3管，其中2管是由隨機(jī)選取的等量的3只大鼠的cDNA樣本混合，1管是由等量的4只大鼠的cDNA樣本混合；20只混合照射組大鼠的cDNA等量混裝成為6管，其中4管是由隨機(jī)選取的等量的3只大鼠的cDNA樣本混合，2管是由隨機(jī)選取的等量的4只大鼠的cDNA樣本混合。PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)每個(gè)樣品設(shè)立3個(gè)平行孔。用實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒，以不同濃度梯度的cDNA樣本，分別建立目的基因和內(nèi)參基因(β-actin)擴(kuò)增的標(biāo)準(zhǔn)曲線，判斷實(shí)時(shí)定量 PCR的擴(kuò)增效率。采用優(yōu)化條件中達(dá)到最佳擴(kuò)增效率的cDNA樣本和引物量進(jìn)行檢測[7]。20 μL反應(yīng)體系中包括：SYBR 10 μL,雙蒸水 8 μL，上下游引物各 0.5 μL，cDNA樣本 1 μL。PCR 擴(kuò)增條件為 95 ℃ 預(yù)變性 3 s；95 ℃變性10 s，60 ℃退火延伸30 s的條件下循環(huán) 41次，每次循環(huán)結(jié)束后進(jìn)行熒光檢測。擴(kuò)增結(jié)束后于1 ℃的梯度逐步升溫至 95 ℃進(jìn)行熔解曲線分析，確定擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性。

1.6 實(shí)時(shí)定量PCR數(shù)據(jù)分析

分別測定每個(gè)樣本的目的基因和內(nèi)參基因(βactin)擴(kuò)增的 Ct值，然后采用相對(duì)定量方法分析每個(gè)樣本目的基因的 ΔCt值(ΔCt值=目的基因 Ct值-內(nèi)參基因Ct值)，再依據(jù)ΔΔCt(實(shí)驗(yàn)組ΔCt-對(duì)照組ΔCt)計(jì)算出 2-ΔΔCt。當(dāng)目的基因與內(nèi)參基因的擴(kuò)增效率接近時(shí)，2-ΔΔCt的值就表示實(shí)驗(yàn)組樣本中的目的基因相對(duì)于對(duì)照組樣本中的目的基因轉(zhuǎn)錄水平變化倍數(shù)[7]。以靶基因相對(duì)表達(dá)變化2倍以上為有差異。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 肝臟總RNA質(zhì)量

各樣本的總 RNA 其 A260/A280都在 1.8-2.0之間，純度較好。隨機(jī)挑選的6個(gè)樣品的總RNA的瓊脂糖凝膠電泳圖（圖 1）有清晰的三條帶。故提取的各樣本總RNA質(zhì)量合格。

圖1 樣品總RNA的瓊脂糖凝膠電泳Fig.1 Gel images of the total RNA of liver samples

2.2 實(shí)時(shí)定量 PCR擴(kuò)增的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)和產(chǎn)物的確定分析

β-actin、CYP7A1、PXR、LXR、PPARα、FXR、HNF4α基因擴(kuò)增曲線正常(R2為 0.995-0.999)擴(kuò)增效率為95%-105%。結(jié)果說明，實(shí)時(shí)定量PCR檢測系統(tǒng)建立成功且準(zhǔn)確可靠，完全滿足實(shí)時(shí)定量PCR檢測優(yōu)化條件，可以應(yīng)用相對(duì)定量 2-ΔΔCt方法進(jìn)行分析計(jì)算。熔解曲線分析顯示基因的熔解曲線峰形均單一銳利，說明擴(kuò)增產(chǎn)物無非特異信號(hào)干擾，擴(kuò)增反應(yīng)具有較好的特異性（圖2）。瓊脂凝膠電泳顯示所得擴(kuò)增產(chǎn)物均為目的條帶(圖3)。

圖2 基因的熔解曲線：上排從左到右依次為β-actin、CYP7A1、PXR和FXR，下排從左到右為LXRα、HNF4α和PPARαFig.2 Dissociation curves of genes. From the left to the right are β -actin, CYP7A1, PXR, FXR in the upper row and LXRα, HNF4α, and PPARα in the bottom row

圖3 基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳M: DNA marker DL2000；1: β-actin(受照 14 d 后的樣品)；2: β-actin(受照 31 d 后的樣品)；3: CYP7A1(受照 14 d 后的樣品)；4: CYP7A1(受照31 d后的樣品)；5: PXR(受照14 d后的樣品)；6: PXR(受照31 d后的樣品)；7: FXR(受照 14 d 后的樣品)；8: FXR (受照 31 d 后的樣品)；9: LXRα(受照14 d后的樣品)；10: LXRα (受照31 d后的樣品)；11: HNF4 α (受照 14 d 后的樣品)；12: HNF4α (受照 31 d后的樣品)；13: PPARα (受照14 d后的樣品)；14:PPARα (受照31 d后的樣品)Fig.3 Gel images of the PCR products of genes. M: DNA marker DL2000; 1: β-actin(sample was irradiated for 14 d);2: β-actin(sample was irradiated for 31 d);3:CYP7A1(sample was irradiated for 14 d); 4: CYP7A1(sample was irradiated 31 d); 5: PXR(sample was irradiated for 14 d); 6: PXR(sample was irradiated for 31 d); 7:FXR(sample was irradiated for 14 d); 8: FXR(sample was irradiated for 31 d); 9: LXRα (sample was irradiated for 14 d); 10: LXRα (sample was irradiated for 31 d); 11: HNF4α(sample was irradiated for 14 d); 12: HNF4 α (sample was irradiated for 31 d); 13: PPARα (sample was irradiated for 14 d); 14: PPARα (sample was irradiated for 31 d);

2.3 低劑量率中子-γ射線混合照射后大鼠肝細(xì)胞CYP7A1基因mRNA表達(dá)的變化

圖4 顯示各基因表達(dá)的檢測結(jié)果，表明大鼠肝臟于全身混合照射14 d和31 d后基因擴(kuò)增曲線良好。將空白對(duì)照組肝細(xì)胞CYP7A1基因mRNA表達(dá)水平設(shè)為 1，并據(jù)此確定混合照射組肝細(xì)胞CYP7A1基因mRNA的相對(duì)表達(dá)量。表2所列為用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)檢測得到的各基因的Ct值、ΔCt值(ΔCt值=目的基因 Ct值一內(nèi)參基因Ct值)，再依據(jù)ΔΔCt(實(shí)驗(yàn)組ΔCt-對(duì)照組ΔCt)計(jì)算出相對(duì)表達(dá)倍數(shù)2-ΔΔCt。圖5顯示，在受照14 d后(γ射線累積照射劑量為0.4676 Gy、中子累積照射劑量為 7.84 mGy)，混合照射組大鼠肝細(xì)胞CYP7A1基因 mRNA表達(dá)下調(diào)至空白對(duì)照組的44% (p<0.01)，有非常顯著差異；在受照31 d后(γ射線累積照射劑量為1.0354 Gy、中子累積照射劑量為 17.36 mGy)，混合照射組大鼠肝細(xì)胞CYP7A1基因 mRNA表達(dá)下調(diào)至空白對(duì)照組的22% (p<0.01)，有非常顯著差異。在一定時(shí)期內(nèi)，大鼠肝細(xì)胞CYP7A1基因mRNA表達(dá)隨著受照劑量的增加而顯著下降。

圖4 照射14 d和31 d后大鼠肝臟基因表達(dá)實(shí)時(shí)定量PCR檢測的擴(kuò)增曲：左邊為照射14 d后的樣本，右邊為照射31 d后的樣本：從上至下依次為CYP7A1+ β-actin、PPARα+ β-actin、FXR+ β-actin、PXR+ β-actin、LXRα+ β-actin、HNF4α+ β -actinFig.4 Amplification curves of genes in liver assayed with RT-qPCR after radiated for 14 d and 31 d, respectively.Samples radiated for 14 d on the left side and samples radiated for 31 d on the right side. From up to down are CYP7A1+ β-actin, PPARα+ β-actin, FXR+ β-actin,PXR+ β-actin, LXRα+ β-actin, and HNF4α+ β-actin.

表2 照射后各基因mRNA表達(dá)水平Table 2 The mRNA level of the genes after radiated

圖5 CYP7A1基因mRNA相對(duì)于內(nèi)參β-actin基因mRNA的表達(dá)水平，將空白對(duì)照組肝細(xì)胞CYP7A1基因mRNA表達(dá)水平設(shè)為1，**, p<0.01Fig.5 CYP7A1 mRNA gene expression in the liver. Results are expressed as a ratio to β-actin mRNA level. The mRNA levels of control rats were arbitrarily set at 1, **, p < 0.01

2.4 低劑量率中子-γ射線混合照射后大鼠肝細(xì)胞中調(diào)控CYP7A1基因的核受體mRNA表達(dá)的變化

如圖6所示，在照射14 d (γ射線累積照射劑量為0.4676 Gy、中子累積照射劑量為7.84 mGy)后，PPARα基因mRNA表達(dá)上調(diào)至空白對(duì)照組的1.45倍，F(xiàn)XR基因mRNA表達(dá)上調(diào)至空白對(duì)照組的1.14倍，LXRα基因 mRNA表達(dá)下調(diào)至空白對(duì)照組的89%，HNF4α基因mRNA表達(dá)下調(diào)至空白對(duì)照組的95%，PXR基因 mRNA表達(dá)上調(diào)至空白對(duì)照組的1.69倍。在照射31 d (γ射線累積照射劑量1.0354 Gy、中子累積照射劑量為17.36 mGy)后，與空白對(duì)照組比較，PPARα基因 mRNA表達(dá)上調(diào)至空白對(duì)照組的1.32倍；FXR基因mRNA表達(dá)下調(diào)至空白對(duì)照組的68%；LXRα基因mRNA表達(dá)分別上調(diào)至空白對(duì)照組的1.40倍；HNF4α基因mRNA表達(dá)下調(diào)至空白對(duì)照組的87%；PXR基因mRNA表達(dá)上調(diào)至空白對(duì)照組的 2.34倍(p<0.01)。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)合實(shí)時(shí)定量PCR方法，以相對(duì)表達(dá)變化2倍以上認(rèn)為有差異，數(shù)據(jù)表明，受照14 d和31 d后，與空白對(duì)照組比較，LXRα、PPARα、HNF4α及FXR基因mRNA相對(duì)表達(dá)量無明顯變化。但是在受照31 d后，與相應(yīng)的空白對(duì)照組比較，混合照射組大鼠肝細(xì)胞PXR基因mRNA表達(dá)上調(diào)非常顯著(p<0.01)。

圖6 肝臟中調(diào)控CYP7A1 基因mRNA 表達(dá)的核受體mRNA 相對(duì)于內(nèi)β-actin 參基因mRNA 的表達(dá)水平，將空白對(duì)照組的各基因mRNA 表達(dá)水平設(shè)為1, **, p<0.01Fig.6 The mRNA level of the nuclear receptors that could regulate the transcription of CYP7A1 gene in the liver.Results are expressed as a ratio to β-actin mRNA level. The mRNA levels of control rats were arbitrarily set at 1, **, p < 0.01

3 討論

小劑量低劑量率電離輻射所致的人體效應(yīng)越來越受到人們的關(guān)注。膽固醇代謝作為健康的一部分，它的異常將會(huì)導(dǎo)致疾病的發(fā)生，比如膽石病[8]。對(duì)于小劑量電離輻射對(duì)膽固醇代謝造成的影響，國內(nèi)外進(jìn)行的研究相對(duì)較少，尤其是低劑量率中子-γ射線混合照射研究。本文主要研究了在低劑量率中子-γ射線混合照射下肝臟膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸的主要限速酶CYP7A1基因mRNA表達(dá)的變化。研究發(fā)現(xiàn)：在照射14 d (γ射線累積照射劑量為0.4676 Gy、中子累積照射劑量為7.84 mGy)和31 d (γ射線累積照射劑量為1.0354 Gy、中子累積劑量為17.36 mGy)后，混合照射組大鼠肝細(xì)胞 CYP7A1基因 mRNA表達(dá)分別下調(diào)至空白對(duì)照組的44% (p<0.01)和22%(p<0.01)。說明低劑量率γ和中子混合照射在照射一段時(shí)期內(nèi)對(duì)大鼠肝細(xì)胞 CYP7A1 mRNA相對(duì)表達(dá)水平有著顯著的影響。

肝臟膽固醇 7α-羥化酶(CYP7A1)基因 mRNA的表達(dá)受各種核受體和轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控。肝X受體α(LXRα)、過氧化物酶體增值物激活受體α(PPARα)、肝細(xì)胞核因子 4α(HNF4 α)都能夠刺激上調(diào) CYP7A1基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，而法尼醇 X受體(FXR)、孕烷受體(PXR)能夠抑制CYP7A1基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。肝 X 受體(LXRα)能被配體氧化型固醇激活，并且它能夠和維甲酸受體α (RXRα)結(jié)合后形成異源二聚體，異源二聚體 LXRα-RXRα將與CYP7A1基因啟動(dòng)子區(qū)的siteI位點(diǎn)結(jié)合，進(jìn)而調(diào)控CYP7A1基因的轉(zhuǎn)錄[9]。Zhang等[10]給野生型和LXRα基因敲除的 C57BL/6J老鼠喂食 LXRα激活劑，發(fā)現(xiàn)野生型老鼠CYP7A1基因mRNA表達(dá)顯著增加，但LXRα基因敲除老鼠觀察不到明顯變化。研究表明HNF4α是CYP7A1基因的重要調(diào)控因子，它能夠與位于CYP7A1基因啟動(dòng)子區(qū)膽汁酸響應(yīng)元件II(BAREII)的DR-1序列結(jié)合，進(jìn)而促進(jìn)CYP7A1基因的轉(zhuǎn)錄。另外，如果HNF4α結(jié)合位點(diǎn)發(fā)生突變，CYP7A1基因啟動(dòng)子活性將會(huì)顯著下降，表明HNF4α對(duì)于 CYP7A1基因轉(zhuǎn)錄的基本水平至關(guān)重要[11]。Cheema等研究發(fā)現(xiàn)，PPARα被配體激活后，能夠與 RXRα結(jié)合形成 PPARα-RXRα二聚體，PPARα-RXRα能夠與CYP7A1啟動(dòng)子區(qū)siteI位點(diǎn)結(jié)合，進(jìn)而調(diào)控CYP7A1基因的轉(zhuǎn)錄[12]。石如玲等[13]通過鄰苯二甲酸二異辛酯激活大鼠PPARα的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)肝臟中CYP7A1基因表達(dá)加強(qiáng)。Cao等[14]研究發(fā)現(xiàn)黃連生物堿提取物能夠通過上調(diào)CYP7A1基因正向調(diào)控因子PPAR α表達(dá)，而使CYP7A1基因表達(dá)上調(diào)，最終導(dǎo)致高脂質(zhì)膳食的大鼠肝臟中膽固醇濃度降低。FXR能夠通過 FXR-SHP、FXR-FGF15途徑來抑制 CYP7A1基因的轉(zhuǎn)錄。肝同系物受體1(LRH-1) 是促進(jìn) LXRα激活 CYP7A1基因轉(zhuǎn)錄的輔助因子[15]。在肝臟中，膽汁酸能夠激活FXR，而后 FXR調(diào)控異源二聚體小分子伴侶(small heterodimer partner，SHP)轉(zhuǎn)錄，SHP會(huì)和LRH-1結(jié)合成異源二聚體，導(dǎo)致CYP7A1基因啟動(dòng)子募集的輔助激活因子減少，CYP7A1基因轉(zhuǎn)錄下降。另外，F(xiàn)XR被激活后，大鼠纖維母細(xì)胞生長因子FGF15的分泌和表達(dá)將增加，而FGF15將與FGFR4結(jié)合，從而激活JNK途徑，使CYP7A1基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)受到抑制[16]。與正常小鼠相比，PXR基因敲除的小鼠CYP7A1基因的表達(dá)減少近2倍。另外，對(duì)小鼠喂食 PCN后，發(fā)現(xiàn)它能夠顯著抑制 CYP7A1基因mRNA的水平[17]。但是PXR基因敲除的小鼠，PCN對(duì)其CYP7A1基因表達(dá)的抑制作用將失效。故PXR能夠通過減少其基礎(chǔ)表達(dá)和抑制其表達(dá)兩方面使CYP7A1基因表達(dá)失調(diào)[18]。Jonker等[19]研究發(fā)現(xiàn)PXR能夠抑制CYP7A1基因的轉(zhuǎn)錄，使PXR能夠成為治療膽固醇代謝異常疾病的靶標(biāo)。

為了研究實(shí)驗(yàn)對(duì)照組 CYP7A1 mRNA變化可能機(jī)制，我們同樣運(yùn)用了實(shí)時(shí)定量 PCR法檢測了LXRα、PPARα、HNF4α、FXR、PXR基因mRNA的相對(duì)表達(dá)水平，通過數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)混合照射組LXRα、PPARα、HNF4 α、FXR 基因 mRNA 的表達(dá)水平相對(duì)于空白對(duì)照組無明顯變化。但是在照射14 d后，混合照射組大鼠肝細(xì)胞PXR基因mRNA表達(dá)上調(diào)至相應(yīng)空白對(duì)照組的1.69倍。在照射31 d后，混合照射組大鼠肝細(xì)胞PXR基因mRNA表達(dá)上調(diào)至相應(yīng)空白對(duì)照組的 2.34倍(p<0.01)，有非常顯著差異。故CYP7A1 mRNA表達(dá)下調(diào)可能機(jī)制是混合照射在一段時(shí)期內(nèi)上調(diào)了其負(fù)調(diào)控基因 PXR mRNA的表達(dá)。

另外，除了各種核受體和轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控，CYP7A1 mRNA表達(dá)水平還受到其它因素的影響。Park等[20]發(fā)現(xiàn)對(duì)C57BL/6鼠注射胰島素后，肝細(xì)胞SHP基因mRNA表達(dá)上升，且胰島素誘導(dǎo)級(jí)聯(lián)信號(hào)通路使胰島素β細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子(FOXO1)失活，進(jìn)而使CYP7A1基因的表達(dá)受到抑制。Kim等[21]研究發(fā)現(xiàn)在正常和受壓狀態(tài)下，抑癌因子P53都能通過增加SHP量來降低 CYP7A1水平。Henkel等研究發(fā)現(xiàn)持續(xù)喂食FVB/NJ小鼠膽固醇膳食12周能夠誘導(dǎo)肝細(xì)胞腫瘤壞死因子α (TNF α)和白介素 1β(IL-1β)表達(dá)，而該 2種因子能夠通過各自的途徑對(duì)CYP7A1的表達(dá)進(jìn)行負(fù)向調(diào)控[22]。對(duì)于小劑量的低劑量率中子-γ射線混合照射對(duì)CYP7A1基因mRNA表達(dá)造成的影響可能是多因素共同作用的，為了更加深入、全面的解釋其機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

總之，本研究發(fā)現(xiàn)低劑量率中子-γ射線混合照射一段時(shí)期后，大鼠肝細(xì)胞 CYP7A1基因 mRNA表達(dá)顯著下調(diào)，而它的負(fù)調(diào)控基因PXR基因mRNA表達(dá)明顯上升。故一定時(shí)期內(nèi)低劑量率中子-γ射線混合照射可能通過顯著上調(diào)大鼠肝細(xì)胞 PXR基因mRNA表達(dá)而使肝細(xì)胞CYP7A1基因mRNA表達(dá)下降。但是肝細(xì)胞CYP7A1基因mRNA表達(dá)顯著下降可能不是單一因素造成的，還有其他因素的共同作用，這一點(diǎn)尚需進(jìn)一步研究。

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