吳 凡，董昌武，周雪梅

（安徽中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)臨床學(xué)院，合肥 230038）

呼吸及消化系統(tǒng)疾病黃膩苔微生態(tài)學(xué)與舌苔脫落細(xì)胞凋亡指數(shù)的比較

吳 凡，董昌武*，周雪梅

（安徽中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)臨床學(xué)院，合肥 230038）

目的 觀察呼吸系統(tǒng)和消化系統(tǒng)疾病患者的黃膩苔，并比較這兩種系統(tǒng)疾病的黃膩苔在微生態(tài)學(xué)和細(xì)胞凋亡指數(shù)上的異同。方法 根據(jù)中醫(yī)舌診診斷標(biāo)準(zhǔn)選擇呼吸系統(tǒng)和消化系統(tǒng)疾病具有黃膩苔舌象的患者各20例為實(shí)驗(yàn)組，15例健康者正常舌象為對(duì)照組，均刮取舌苔，觀察舌苔的微生態(tài)指標(biāo)及舌上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組細(xì)菌總數(shù)高于對(duì)照組，細(xì)胞凋亡指數(shù)低于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論黃膩苔是濕熱證疾病在舌面上病位病機(jī)直觀的病理反應(yīng)，其與疾病的種類無必然性聯(lián)系，黃膩苔的形成可能與舌的微生態(tài)和舌苔脫落細(xì)胞凋亡有關(guān)。

呼吸系統(tǒng);消化系統(tǒng);黃膩苔;微生態(tài)學(xué);細(xì)胞凋亡

舌象的觀察是中醫(yī)診斷疾病的重要手段，其中黃膩苔是濕熱證的主要表現(xiàn)，也是中醫(yī)臨床辨證的重要依據(jù)之一。有文獻(xiàn)報(bào)道［1-2］濕熱證患者存在舌上皮細(xì)胞凋亡和舌苔微生態(tài)的改變。筆者以呼吸系統(tǒng)與消化系統(tǒng)疾病患者所致的黃膩苔為研究對(duì)象，檢測(cè)分析黃膩苔的微生態(tài)學(xué)和舌苔脫落細(xì)胞凋亡指數(shù)，并與正常人舌苔進(jìn)行比較，分析其相關(guān)性和可能的機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇40例來自安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科和呼吸內(nèi)科舌苔為黃膩苔的患者，消化內(nèi)科男8例，女12例，呼吸內(nèi)科男11例，女9例，年齡25～62歲;15例正常健康人的舌苔為對(duì)照組，男8例，女7例，年齡20～55歲，3組在年齡、性別等方面比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。所有研究對(duì)象近期均無口腔疾患和吸煙史。

1.2 觀察舌象 由3位有經(jīng)驗(yàn)的老中醫(yī)根據(jù)中醫(yī)舌診診斷標(biāo)準(zhǔn)觀察舌象，黃膩苔為實(shí)驗(yàn)組，消化系統(tǒng)組和呼吸系統(tǒng)組各20例，淡紅舌，薄白苔為正常組，共15例。

1.3 標(biāo)本采集 標(biāo)本采集在上午9:00—11:00時(shí)進(jìn)行，讓受檢者使用涼開水漱口1～2次，后用生理鹽水漱口2次，用消毒紗布固定好受檢者舌尖，以中等力度用塑料小勺刮取舌中部舌苔2～3次，刮取物用消毒棉簽蘸取部分，涂抹于玻片上行微生態(tài)檢測(cè)，剩余部分用生理鹽水沖洗收集成約30 mL的懸液進(jìn)行細(xì)胞凋亡指數(shù)檢測(cè)。

1.4 檢測(cè)方法

1.4.1 舌苔微生態(tài)檢測(cè) 玻片經(jīng)革蘭氏染色后，光學(xué)顯微鏡下觀察，查找大于50個(gè)油鏡視野，細(xì)菌總數(shù)按每視野 10，102，103，104，105，106記錄，取平均值。

1.4.2 舌苔上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)檢測(cè) 舌苔懸液低溫離心（4℃，3 000 r/min），取沉淀做細(xì)胞涂片，晾干后4%多聚甲醛固定1 h，1%曲拉通破膜（4℃，10 min）;加入TUNEL液（37℃，1 h），以上各步驟間均用PBS沖洗3次，然后POD 37℃作用30 min，顯色（DAB），蘇木精輕度復(fù)染，封片，鏡檢。光鏡下（×200）觀察正常及凋亡陽(yáng)性細(xì)胞，4個(gè)視野下觀察500個(gè)細(xì)胞，計(jì)算每100個(gè)細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，即為凋亡指數(shù)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 11.0軟件，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)和正態(tài)性檢驗(yàn)，組間比較用方差分析和t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組舌上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)的變化比較 消化組、呼吸組與正常組比較，舌苔脫落細(xì)胞凋亡指數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 各組舌上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)的變化比較（±s）

表1 各組舌上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)的變化比較（±s）

注:與正常組比較，#P＜0.05

組 別 例數(shù) 細(xì)胞凋亡指數(shù)消化組 20 6.936 5±5.339 7#呼吸組 20 6.038 2±5.276 6#正常組 15 12.668 9±11.334 3

2.2 各組舌苔細(xì)菌總數(shù)的變化比較 消化組、呼吸組與正常組比較，舌苔細(xì)菌總數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。3 討論

表2 各組舌苔細(xì)菌總數(shù)的變化比較（±s）

表2 各組舌苔細(xì)菌總數(shù)的變化比較（±s）

注:與正常組比較，#P＜0.05

組 別 例數(shù) 細(xì)菌總數(shù)lg（10n±s）消化組 20 4.84±1.06#呼吸組 20 4.62±1.04#正常組 15 3.87±1.23

舌背黏膜表面上絲狀乳頭的角化樹、外形、排列、增生或萎縮等決定了舌苔類型和變化［3］。實(shí)驗(yàn)研究表明，黃膩苔形成主要是由于發(fā)熱、感染等原因致機(jī)體脫水，絲狀乳頭延長(zhǎng)，舌自潔作用減弱，局部的炎癥滲出等作用所導(dǎo)致。舌苔厚度與舌苔脫落細(xì)胞的增殖、分化及凋亡之間的平衡密切相關(guān)［4］。舌苔脫落細(xì)胞的理化指標(biāo)也與舌苔的形成有一定聯(lián)系，陳宇等［5］通過研究表明，舌苔脫落細(xì)胞中的乳酸脫氫酶（LDH）、酸性磷酸酶（ACP）、琥珀酸脫氫酶（SDH）的活性與不同舌象的形成存在一定的聯(lián)系。舌表面菌群失調(diào)也是影響舌苔變化的重要因素，口腔內(nèi)溫暖潮濕而營(yíng)養(yǎng)豐富的環(huán)境有利于微生物的定植和生長(zhǎng)，微生物群的競(jìng)爭(zhēng)和拮抗也影響舌苔的變化。梁文娜等［6］研究表明，舌表面微生態(tài)熵變是調(diào)控舌象變化的關(guān)鍵因素。朱蓮娜等［7］通過微生態(tài)學(xué)涂片檢查方法發(fā)現(xiàn)濕熱證黃膩苔細(xì)菌總數(shù)及種類明顯多于薄白苔正常組。舌苔脫落細(xì)胞與微生態(tài)在證候形成過程中也存在聯(lián)系，李燦東等［8］通過研究表明，慢性胃炎脾胃虛實(shí)證候舌苔脫落細(xì)胞與胃幽門螺旋桿菌感染具有相關(guān)性。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，舌苔為脾胃蒸騰水谷之氣聚于舌面之上而形成。脾胃功能強(qiáng)健，水谷代謝正常，氣血調(diào)和，病邪難以滋生，則口腔內(nèi)的微生態(tài)環(huán)境穩(wěn)定;脾胃功能正常，舌上皮不斷更新代謝，絲狀乳頭角化層更新及時(shí)，即可形成薄白苔; 濕熱之邪侵襲脾胃，脾胃功能降低，水谷不能運(yùn)化，氣血不能上榮于舌，舌上皮細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)汲取障礙，細(xì)胞異常凋亡，絲狀乳頭不能正常角化脫屑，附著于舌面形成黃膩苔。本研究發(fā)現(xiàn):黃膩苔與薄白苔比較，凋亡程度明顯降低，細(xì)菌數(shù)目明顯增多，不同病種之間黃膩苔的細(xì)菌總數(shù)及凋亡指數(shù)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。可以認(rèn)為，黃膩苔是濕熱證病理變化的重要體現(xiàn)，與舌上皮細(xì)胞的凋亡及細(xì)菌的滋生關(guān)系密切，與疾病的種類并無確切關(guān)系。而舌苔上皮細(xì)胞凋亡減少和舌苔上細(xì)菌增生可能是黃膩苔舌象形成的重要基礎(chǔ)。

:

［1］呂軍影，黃李平，闕鐵生，等.濕熱證患者舌苔微生態(tài)的研究［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2008，35（4）:487-488.

［2］呂軍影，黃李平，闕鐵生，等.濕熱證患者舌苔舌上皮細(xì)胞凋亡的研究［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2007，34（12）:1677-1678.

［3］陳群，徐志偉，武哲麗，等.舌苔脫落細(xì)胞學(xué)在中醫(yī)辨證分型中的應(yīng)用規(guī)律探討［J］.中醫(yī)雜志，2005，46（5）:377-379.

［4］吳正治，李明，張?jiān)伱?，?常見舌苔舌上皮細(xì)胞凋亡及其相關(guān)基因表達(dá)研究［J］.中國(guó)醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2004，19（2）:98-100.

［5］陳宇，任健，劉家義.120例慢性胃炎患者舌苔脫落細(xì)胞理化指標(biāo)與中醫(yī)辨證相關(guān)性研究［J］.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，24（3）:273-274.

［6］梁文娜，李燦東，甘慧娟，等.舌表面微生態(tài)熵變影響舌苔變化的機(jī)制探討［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2013，28（2）:477-479.

［7］朱蓮娜，黃李平，呂軍影，等.微生態(tài)學(xué)方法在濕熱證舌苔微生物群研究中的應(yīng)用［J］.廣西醫(yī)學(xué)，2009，31（4）:480-482.

［8］李燦東，蘭啟防，趙永洲，等.慢性胃炎舌印片與證候及幽門螺桿菌的相關(guān)性研究［J］.福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，12（4）:8-10.

Comparative study on micro-ecology and tongue epithelial cell apoptosis index of yellow greasy tongue fur induced by respiratory and digestive system diseases

WU Fan，DONG Changwu*，ZHOU Xuemei
（Clinical College，Anhui University of Chinese Medicine，Hefei 200038，China）

ObjectiveTo observe the yellow greasy tongue fur of patients with respiratory disease and digestive disease，and compare the micro-ecology and epithelial cell apoptosis index of yellow greasy tongue fur between patients with respiratory disease and those with digestive disease.MethodsAccording to the diagnostic criteria of TCM tongue inspection，40 patients with yellow greasy tongue fur induced by respiratory disease and digestive disease were divided equally into two experimental groups，with 15 healthy volunteers in the control group.Tongue furs of patients in these three groups were scraped and micro-ecology and tongue epithelial cell apoptosis index of tongue fur were observed and studied.ResultsThe total bacterial count of tongue fur in the experimental groups was higher than that in the control group，The tongue epithelial cellapoptosis index in the experimental groups was lower than that in the control group，with significant differences between the experimental groups and the control group（P ＜0.05）.Conclusions Yellow greasy tongue fur is an intuitive pathological reaction of the damp-heat syndrome on the surface of the tongue，but there is no necessary connection between yellow greasy tongue fur and the category of diseases.The formation of yellow greasy tongue fur may be related to micro-ecology of the tongue and apoptosis of tongue epithelial cell.

respiratory system;digestive system;yellow greasy tongue fur;micro-ecology;apoptosis

R241.25

A

2095－6258（2014）05－0874－02

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.05.043

安徽中醫(yī)藥大學(xué)青年基金（2013qn001）。

吳 凡（1987－），碩士，實(shí)驗(yàn)員。研究方向:中醫(yī)診法研究。

董昌武，碩士研究生導(dǎo)師，電話:0551-65119271。

2014－04－09）