余元華，王永慧，熊曉紅，黃玉

（1.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬十堰市太和醫(yī)院 防保感控處，湖北 十堰 442000；2.浙江省疾病預(yù)防控制中心防保感控處，浙江 杭州 650011）

γ干擾素釋放試驗(yàn)在幼兒隱性結(jié)核感染診斷中的臨床價值分析

余元華1，王永慧1，熊曉紅1，黃玉2

（1.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬十堰市太和醫(yī)院 防保感控處，湖北 十堰 442000；2.浙江省疾病預(yù)防控制中心防保感控處，浙江 杭州 650011）

目的探討γ干擾素試驗(yàn)在幼兒隱性結(jié)核感染診斷中的臨床價值。方法選取2012年1月～2013年3月來十堰市太和醫(yī)院診治的疑似隱性結(jié)核感染的患者33例和活動性結(jié)核感染患者35例作為觀擦組，另外選取同一時期來十堰市太和醫(yī)院體檢的30名健康兒童作為對照組，分別對以上3組進(jìn)行痰涂片分析、結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)（tuberculin skin test，TST）和γ干擾素釋放試驗(yàn)（interferon gamma release assay，IGRA），比較不同方法陽性率。結(jié)果在疑似隱性結(jié)核感組中，IGRA的檢測結(jié)果顯著高于TST和痰涂片分析（P＜0.05）；在活動性結(jié)核感染組中，IGRA的檢測結(jié)果顯著高于TST和痰涂片分析（P＜0.05）；在健康對照組中，TST的檢測結(jié)果高于IGRA，這與研究對象曾接種過卡介苗有關(guān)。IGRA在疑似隱性結(jié)核感組和活動性結(jié)核感染組檢測陽性率分析，P＞0.05。結(jié)論γ干擾素釋放試驗(yàn)可作為隱性結(jié)核感染診斷的方法之一。

γ干擾素釋放試驗(yàn)；隱性結(jié)核感染；結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)

1 一般資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月～2013年3月來十堰市太和醫(yī)院診治的疑似隱性結(jié)核感染的患者33例和活動性結(jié)核感染患者35例作為觀察組，另外選取同一時期來十堰市太和醫(yī)院體檢的30名健康兒童作為對照組。隱性結(jié)核感染診斷標(biāo)準(zhǔn)：結(jié)核素試驗(yàn)陽性反應(yīng)，肺內(nèi)原發(fā)病灶小，相應(yīng)引流淋巴結(jié)未增大，胸部X片不顯異常陰影，也無任何臨床癥狀和體征，無伴發(fā)其他異常征象。活動性肺結(jié)核診斷參照《肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)》（WS288—2008）執(zhí)行。疑似隱性結(jié)核感染患者中男18例，女15例，年齡（6.2±3.9）歲；活動性結(jié)核感染患者中男性19例，女性16例，年齡（5.1±3.3）；健康組中男15例，女15例，年齡（7.4±1.4）歲，所有研究對象HIV抗體檢測均為陰性，以上所有研究對象在年齡、性別等一般資料上無顯著性差異，組間具有可比性。本研究經(jīng)我院倫理委員會批準(zhǔn)，并向患者說明研究僅限于“科學(xué)研究使用”，患者簽署知情同意書。

1.2 方法 對所有研究對象進(jìn)行痰涂片分析、TST和IGRA。γ干擾素試驗(yàn)使用TB-IGRA試劑盒檢測（北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號20120425），按照試劑說明書所述方法進(jìn)行操作，陽性判定標(biāo)準(zhǔn)為［6］：①空白對照孔的斑點(diǎn)數(shù)小于5個，而檢測孔的斑點(diǎn)數(shù)減去空白孔的斑點(diǎn)數(shù)不小于6個；②空白對照孔的斑點(diǎn)數(shù)不小于6個，而檢測孔的斑點(diǎn)數(shù)是空白對照孔斑點(diǎn)數(shù)的2倍之多。結(jié)核素皮膚試驗(yàn)給研究對象前臂皮內(nèi)注射0.1mL的標(biāo)注結(jié)核純蛋白衍生物（purified protein derivative，PPD），72 h后檢查反應(yīng)結(jié)果，并記錄硬結(jié)直徑，當(dāng)硬結(jié)直徑大于10mm時為陽性。痰涂片分析是取研究對象的痰液、胸水等進(jìn)行離心處理，然后去沉淀制成涂片，干燥固定后使用抗酸染色，若觀察到抗酸桿菌則為陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 對所得數(shù)據(jù)使用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，組間比較使用秩和檢驗(yàn)，P＜0.05說明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

在活動性結(jié)核感染組中，IGRA的檢測結(jié)果顯著高于TST和痰涂片分析（P＜0.05），在疑似隱性結(jié)核感染組中，IGRA的檢測結(jié)果顯著高于TST和痰涂片分析，（P＜0.05，見表1）。

表1 不同檢測方法陽性檢測結(jié)果分析［n（%）］Tab.1 Analysis of positive test results of different detection methods［n（%）］

3 討論

隱性結(jié)核感染是指患者已經(jīng)感染結(jié)核桿菌，但無結(jié)核中毒癥狀，其胸部檢查沒有異常者，因此是一種難以進(jìn)行病原學(xué)診斷的疾病，有研究表明，在隱性結(jié)核感染的人群中大約有5%～10%可轉(zhuǎn)化成活動性結(jié)核?。?］。結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的慢性傳染病，它嚴(yán)重危害人們健康，是全球常見的傳染病之一，據(jù)調(diào)查顯示，其發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢。目前結(jié)核病的診斷方法主要有痰涂片分析、TST、結(jié)核抗體檢測等，因其操作簡便而廣泛使用，但在卡介苗接種者和非結(jié)核分枝桿菌感染者的測試中會出現(xiàn)假陽性，免疫力低下者和嬰幼兒在測試中會出現(xiàn)假陰性，這說明在此年齡段TST的靈敏度低，因此需要尋找更敏感、不受卡介苗接種影響的診斷方法，最近出現(xiàn)的干擾素釋放試驗(yàn)斷隱性結(jié)核感染是一種較為理想的診斷技術(shù)，因其不受卡介苗接種的影響而被醫(yī)學(xué)研究者關(guān)注。

干擾素釋放試驗(yàn)是利用結(jié)核分枝桿菌的特異性抗原，體外刺激受檢者的全血或外周血單個細(xì)胞，致使T淋巴細(xì)胞釋放大量細(xì)胞因子γ干擾素（INF-γ），再通過酶聯(lián)免疫吸附法或酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)等方法定量檢測INF-γ的釋放水平，根據(jù)INF-γ的釋放水平判斷機(jī)體是否存在隱性結(jié)核感染［7］。隨人們研究發(fā)現(xiàn)：分泌靶抗原-6和培養(yǎng)濾過蛋白存在一段RD1區(qū)編碼，該區(qū)只存在于結(jié)核分枝桿菌和少數(shù)致病性分枝桿菌基因中，而卡介苗菌株和非致病性分枝桿菌的基因中無此區(qū)域［8］，由此產(chǎn)生了2種較為成熟的商業(yè)化血液免疫檢測技術(shù)：英國牛津公司的T-SPOT.TB（T-SPOT）和澳大利亞診斷公司的QuantiFERON-TB Gold（QFT）。T-SPOT是在體外將結(jié)核分枝桿菌特有抗原CFP-10和ESAT-6與血液中的T淋巴細(xì)胞反應(yīng)，釋放INF-γ，通過體外酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法檢測釋放INF-γ的T細(xì)胞數(shù)；QFT原理與T-SPOT檢測技術(shù)相同，但檢測INF-γ水平是通過體外酶聯(lián)免疫分析技術(shù)，也就是說，T-SPOT的側(cè)重點(diǎn)在于檢測分泌抗原特異性細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)，QFT側(cè)重檢驗(yàn)T細(xì)胞釋放到上清液中INF-γ的量。干擾素釋放試驗(yàn)已在國外臨床檢測得到了一定的應(yīng)用，經(jīng)臨床驗(yàn)證其特異性達(dá)到了99.9%，靈敏度為96.3%［9］，可見干擾素釋放試驗(yàn)的特異性和靈敏度都是十分高的，能夠有效的診斷隱性結(jié)核感染。

本試驗(yàn)分別以隱性結(jié)核感染患者、活動性結(jié)核感染患者及健康體檢者為研究對象，對其進(jìn)行痰涂片分析、TST及IGRA檢測，并對檢測結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，健康對照組中使用IGRA法檢測出2例陽性病例，調(diào)查發(fā)現(xiàn)，他們均暴露在高危環(huán)境下而感染；使用TST法檢測出6例陽性病例，這與受檢者接種過卡介苗及暴露在高危環(huán)境有關(guān)。在活動性結(jié)核感染組中，IGRA、TST、痰涂片的敏感度分別為：91.43%、85.71%、54.29%，IGRA的檢測結(jié)果顯著高于TST和痰涂片分析，P＜0.05，這與孫琳［10］等人的研究結(jié)果一致。在疑似隱性結(jié)核感染組中IGRA、TST、痰涂片的敏感度分別為：84.85%、60.61%、21.21%，IGRA的檢測結(jié)果顯著高于TST和痰涂片分析（P＜0.05）說明IGRA具有高度敏感性，對隱性結(jié)核感染的確診有著重要的臨床意義。我國是一個結(jié)核病高發(fā)國家，卡介苗接種率也居高不下，用傳統(tǒng)的TST試驗(yàn)對幼兒隱形結(jié)核感染容易產(chǎn)生假陰性，γ干擾素釋放試驗(yàn)還不能完全取代TST，但在臨床上不能判斷卡介苗接種的陽性結(jié)果時，可用γ干擾素釋放試驗(yàn)作為輔助檢查。

綜上所述，IGRA可作為結(jié)核病診斷的手段之一，可以輔助診斷結(jié)核病。

［1］沈洪波，王洪海.治療性結(jié)核疫苗研究進(jìn)展［J］.微生物與感染，2010，5（2）：111-116.

［2］Mason CM，Ali J.Immunity against mycobacteria［J］.Se minRespir Care Med，2004，25（1）：53-61.

［3］辛田田，黎有倫.結(jié)核潛伏感染診斷方法新進(jìn)展與臨床應(yīng)用［J］.中國人獸共患病學(xué)報，2013，29（4）：403-406.

［4］全國結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查技術(shù)指導(dǎo)組.2000年全國結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查報告［J］.中國防癆雜志，2002，24（2）：65，108.

［5］Larzt BW，Narvarte HJ，Holt D，et al.Congenital tuberculosis and management of exposures in a neonatal intensive care unit［J］.Infect Control Hosp Epidemiol，2002，23（10）：573-579.

［6］蔣英，張勝男，黃小玲，等.γ干擾素釋放試驗(yàn)用于結(jié)核病診斷的臨床應(yīng)用價值［J］.中國藥業(yè)，2012，21（13）：87-89.

［7］文霞，柳愛華，寶福凱，等.γ-干擾素釋放試驗(yàn)應(yīng)用于結(jié)核病診斷的研究進(jìn)展［J］.中國病原生物學(xué)雜志，2011，6（7）：542-545.

［8］Behr MA，Wilson MA，Gill WP，et al.Comparative genomics of BCG vaccines by whole-genome DNA microarray［J］.Science，1999，284（5419）：1520-1523.

［9］Sedgwick JD.ELISPOT assay：a personal retrospective［J］.Methods Mol Biol，2005，302：3-14.

［10］孫琳，焦偉偉，趙順英，等.ELISPOT檢測技術(shù)在兒童結(jié)核病診斷中的應(yīng)用［J］.標(biāo)記免疫分析與臨床，2008，15（6）：349-353.

［11］蔣克珉，柯明文，戴君祿，等.人胎胸腺素對結(jié)核患者T細(xì)胞亞群分布的影響［J］.中國生化藥物雜志，1996，17（1）：30-31.

［12］馬君，宋滇文，邵將，等.一期前后路聯(lián)合手術(shù)治療下腰椎結(jié)核［J］.中國矯形外科雜志，2010，18（1）：13-16.

［13］高翠南，譚青云，許卓衛(wèi)，等.涂陽肺結(jié)核患者密切接觸者的結(jié)核病檢出情況分析［J］.中國防癆雜志，2011，33（6）：328-330.

［14］樸文.脊柱結(jié)核的MRI表現(xiàn)［J］.中國當(dāng)代醫(yī)藥，2010，17（34）：104-130.

［15］肖志輝.脊柱結(jié)核的MRI和CT診斷價值［J］.臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2010，9（5）：358-359.

（編校：李璐璐）

Clinical application of interferon gamma release assays for diagnosis of latent tuberculosis infection in children

YU Yuan-hua1，WANG Yong-hui1，XIONG Xiao-hong1，HUANG Yu2

（1.Preventive Control Department，The Affiliated Shiyan Taihe Hospital of HubeiMedical College，Shiyan 442000，China；2.Preventive Control Department，Center for Disease Control and Prevention of Zhejiang Province，Hangzhou 650011，China）

ObjectiveTo explore the clinical value of interferon gamma release assays in early childhood diagnosis of latent tuberculosis infection.Methods33 patientswith suspected latent tuberculosis infection and 35 patientswith active tuberculosis infection in our hospital from January 2012 to March 2013 were selected.During the same period selected 30 healthy children as a control group.Respectively were given sputum smear analysis，tuberculin skin test（TST）and vinterferon release assay（IGRA）.Compare the positive rate of differentmethods.ResultsIn suspected latent tuberculosis group，IGRA test results were significantly higher than TST and sputum smearmethod（P＜0.05）；in active tuberculosis infection group，IGRA test resultswere significantly higher than TST and sputum smear（P＜0.05）；in healthy control group，TST test results were higher than the IGRA，it is because of patients had been vaccinated with BCG.ConclusionIGRA can be used as one way to diagnosis the latent tuberculosis infection.

interferon gamma release assays；latent tuberculosis infection；tuberculin skin test

R446.19

A

1005－1678（2014）03－0103－03

隱性結(jié)核感染是指患者已經(jīng)感染結(jié)核桿菌，但無結(jié)核中毒癥狀，其胸部檢查沒有異常者。有研究表明，在隱性結(jié)核感染的人群中大約有5%～10%可轉(zhuǎn)化成活動性結(jié)核?。?］。結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的慢性傳染病，它嚴(yán)重危害人們健康，是全球常見的傳染病之一。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，感染結(jié)核桿菌的人數(shù)占世界人口的1／3，每年約有800萬人因感染結(jié)核而發(fā)病［2］，我國每年約有130萬人發(fā)病，居世界第2位，成為全球22個流行結(jié)核病的國家之一［3］。據(jù)調(diào)查，小于14歲的兒童結(jié)核病感染率為9.0%［4］，由于兒童的自身免疫力較弱，感染結(jié)核桿菌后極易轉(zhuǎn)為活動性結(jié)核病，另外未經(jīng)診治的隱性結(jié)核感染的患兒將是其成人后患結(jié)核病的巨大隱患。因此，要控制兒童結(jié)核病的感染必須加強(qiáng)結(jié)核病的診斷，并能及時給予有效的治療。目前預(yù)防結(jié)核病的重要措施是接種卡介苗（bacillus calmette guerin vaccine，BCG），但這只能減輕感染后的發(fā)病，并不能有效的預(yù)防感染，因此，對隱性結(jié)核感染進(jìn)行及時診斷和治療是預(yù)防結(jié)核病最好的預(yù)防措施。目前對隱性結(jié)核感染的主要診斷是通過結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)來確定的，但在卡介苗接種者和非結(jié)核分枝桿菌感染者的測試中會出現(xiàn)假陽性，免疫力低下者和嬰幼兒在測試中會出現(xiàn)假陰性，北美對2635例暴露于結(jié)核感染的新生兒做TST后并未出現(xiàn)陽性［5］，這說明在此年齡段TST的靈敏度低，因此需要尋找更敏感、不受卡介苗接種影響的診斷方法，最近出現(xiàn)的γ干擾素釋放試驗(yàn)診斷隱性結(jié)核感染是一種較為理想的診斷技術(shù)，我院使用γ干擾素釋放試驗(yàn)在診斷隱性結(jié)核感染方面取得了良好的效果，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

2011年醫(yī)藥衛(wèi)生一般研究計(jì)劃B類（2011KYB027）

余元華，男，大專，主治醫(yī)師，研究方向：疾病控制，E-mail：a15911541871＠163.com。