郭海峰，李華洋，李鐵炅

（牡丹江紅旗醫(yī)院 內(nèi)一科，黑龍江 牡丹江 157011）

p38 MAPK在重癥胰腺炎炎癥反應(yīng)中的作用研究

郭海峰，李華洋，李鐵炅

（牡丹江紅旗醫(yī)院 內(nèi)一科，黑龍江 牡丹江 157011）

目的研究重癥胰腺炎患者p38 MAPK基因和蛋白的表達量，探討p38 MAPK在重癥胰腺炎炎癥反應(yīng)的作用。方法選取2012年1月～2013年12月牡丹江紅旗醫(yī)院收治的48例重癥胰腺炎患者作為實驗組，同期在本院進行體檢的48例健康人為對照組。采用熒光實時定量PCR檢測2組受試者p38 MAPK的mRNA表達；Western Blot檢測p38 MAPK蛋白及P-p38 MAPK蛋白的表達。結(jié)果RT-PCR結(jié)果顯示實驗組重癥胰腺炎患者的p38 MAPK基因的表達量明顯高于對照組48例健康體檢者的p38 MAPK基因表達量，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；Western結(jié)果表明實驗組重癥胰腺炎患者的p38 MAPK和P-p38 MAPK蛋白表達量均明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論重癥胰腺炎患者p38 MAPK基因和蛋白表達量均明顯升高，表明p38 MAPK在重癥胰腺炎炎癥反應(yīng)可能扮演重要角色。

p38絲裂原活化蛋白激酶；重癥胰腺炎；炎癥反應(yīng)

1.2 實驗材料 肝素鈉購自成都市海通藥業(yè)有限公司；胎牛血清購自上海偉進生物科技有限公司；Trizol試劑購自杭州新景生物試劑開發(fā)有限公司；p38 MAPK多克隆抗體和兔抗人P-p38 MAPK多克隆抗體均購自上海榮圣生物科技有限公司。主要儀器為Mx3005P熒光實時定量PCR儀（卡尤迪生物科技有限公司）。

1.3 實驗方法 實驗組和對照組受試者均在空腹狀態(tài)下采集靜脈血5mL，肝素抗凝，并在采集的靜脈血液中加入含胎牛血清的 PBS溶液，2000 r／min離心 20 min后取核細胞層得PBMC。采用Trizol試劑提取分離得到的PBMC中的總mRNA，利用熒光實時定量PCR逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，通過計算增殖的cDNA含量測定p38 MAPK mRNA表達的量。

采用蛋白質(zhì)印跡（Western Blot）檢測p38 MAPK蛋白表達的量及P-p38 MAPK蛋白表達的量。用細胞裂解液將分離得到的PBMC充分裂解，將裂解產(chǎn)物在12000 r／min離心，收集上清液，應(yīng)用BCA法測定蛋白總量。取適量蛋白樣品，用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測蛋白表達，利用灰度比值進行計算。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 計數(shù)資料的檢驗采用率表示，行χ2檢驗，正態(tài)計量資料的檢驗采用“x±s”表示，行 t檢驗，以 P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組受試者p38 MAPK基因表達對比 2組受試者p38 MAPK基因的表達結(jié)果見圖1。實驗組重癥胰腺炎患者的p38 MAPK基因的表達量明顯高于對照組，2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，見表2）。

圖1 熒光實時定量PCR檢測2組p38 MAPK基因的表達Fig.1 The determination of p38 MAPK gene by RT-PCR

2.2 2組受試者p38 MAPK蛋白表達對比 2組受試者p38 MAPK和P-p38 MAPK蛋白表達結(jié)果見圖2。實驗組重癥胰腺炎患者的p38 MAPK和P-p38 MAPK蛋白的表達量均明顯高于對照組，2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）

圖2 Western Blot檢測2組p38 MAPK和P-p38 MAPK蛋白表達的量Fig.2 The determination of p38 MAPK and P-p38 MAPK by Western Blot

3 討論

絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路能夠傳遞細胞內(nèi)外的信號，該信號通路廣泛存在于真核細胞。研究表明MAPK能夠參與細胞增殖、分化及炎癥反應(yīng)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及調(diào)控，在重癥胰腺炎炎癥反應(yīng)起著重要的作用［10-11］。p38 MAPK是細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要樞紐，參與各種生理機能的調(diào)控，有研究表明p38 MAPK能夠調(diào)節(jié)炎癥因子的轉(zhuǎn)導(dǎo)及調(diào)控；在重癥胰腺炎炎癥反應(yīng)起到重要作用［12］。本研究通過比較重癥胰腺炎患者和健康體檢者p38MAPK基因和蛋白表達的量，研究p38MAPK在重癥胰腺炎炎癥反應(yīng)的作用。

本研究結(jié)果表明2組受試者性別、年齡等一般資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義。實驗組48例重癥胰腺炎患者p38 MAPK基因的表達量平均為0.42±0.10，明顯高于對照組的0.31±0.06，2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），這與文獻報道的重癥胰腺炎患者的p38 MAPK基因表達升高結(jié)果相符［13］；實驗組48例重癥胰腺炎患者p38 MAPK蛋白的表達量平均為0.59±0.15，明顯高于對照組的0.44±0.11，2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；實驗組48例重癥胰腺炎患者P-p38 MAPK蛋白的表達量平均為0.48±0.12，明顯高于對照組的0.11±0.03，2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），這與文獻報道重癥胰腺炎大鼠模型p38 MAPK蛋白及磷酸化P-p38 MAPK蛋白表達量升高等結(jié)果相符［14-15］。以上結(jié)果表明，p38 MAPK在重癥胰腺炎炎癥反應(yīng)中起到重要作用。重癥胰腺炎患者的p38 MAPK基因表達量、p38 MAPK蛋白表達量以及磷酸化P-p38 MAPK蛋白的表達量較健康人明顯升高，因此抑制p38 MAPK的活性，至少能夠在一定程度上抑制不斷放大的胰腺炎炎癥反應(yīng)，減少促炎因子的釋放，是早期發(fā)現(xiàn)和控制胰腺炎的重要途徑。

綜上所述，重癥胰腺炎患者p38 MAPK基因和蛋白的表達量均明顯升高，表明p38 MAPK在重癥胰腺炎炎癥反應(yīng)可能起重要作用。

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（編校：吳茜）

Effects of p38 MAPK in inflammation reaction of severe acute pancreatitis

GUO Hai-feng，LIHua-yang，LITie-ling
（First Department of Medical，Mudanjiang Red Flag Hospital，Mudanjiang 157011，China）

ObjectiveTo investigate the expression of p38 MAPK gene and p38 MAPK protein，and explore the effect of p38 MAPK in inflammation reaction of severe acute pancreatitis.Methods48 cases with severe acute pancreatitis were chosen as research group，and another 48 healthy cases as control group.The expression of p38 MAPK gene were investigated by RT-PCR，and the expression of p38 MAPK and P-p38 MAPK protein were investigated by western blot.ResultsThe expression of p38 MAPKmRNA，p38 MAPK protein and P-p38 MAPK protein in research group were higher than that in control group，the differenceswere all statistically significant（P＜0.05）.ConclusionThe expression of p38 MAPK gene and p38 MAPK protein were significantly increased in patients with severe acute pancreatitis，which showed that p38 MAPK played an important role in inflammation reaction.

p38 MAPK；severe acute pancreatitis；inflammation reaction

R446.1

A

1005－1678（2014）03－0019－03

臨床重癥胰腺炎具有發(fā)病迅速，病情急等特點，且重癥胰腺炎早期合并有肺水腫等，表現(xiàn)為急性肺損傷［1-4］。其主要原因為急性胰腺炎時炎癥介質(zhì)和炎癥反應(yīng)相關(guān)的細胞因子過量釋放，損壞了肺組織毛細血管的屏障，從而引起全身炎癥反應(yīng)［5-6］。p38絲裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase，p38 MAPK）是重癥胰腺炎炎癥反應(yīng)時相關(guān)炎癥介質(zhì)和細胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的主要通路，近年來在臨床上受到廣泛關(guān)注［7-9］。本研究通過對比重癥胰腺炎患者和健康體檢者之間的p-38MAPK基因和相關(guān)蛋白的表達量，探索p38MAPK在重癥胰腺炎炎癥反應(yīng)的作用。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月～2013年12月間牡丹江紅旗醫(yī)院收治的重癥胰腺炎患者48例，年齡26～55歲，平均（42.1±10.1）歲，其中男性患者26例，女性患者22例；選取同期在本院進行體檢的健康人48例，年齡25～55歲，平均（41.8±10.2）歲，其中男性25例，女性23例。2組受試者均不合并慢性疾病，在性別、年齡等一般資料上比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。所有受試者均簽署知情同意書配合實驗。本實驗得到醫(yī)院倫理委員批準。

黑龍江省自然科學(xué)基金項目（D2007-103）

郭海峰，男，博士，副主任醫(yī)師，研究方向：重癥胰腺炎，E-mail：13555006398＠163.com。