洪爾雨

根據(jù)最近一次歐盟的立法規(guī)定（第1223/2009號法規(guī)），進(jìn)口到歐盟并在歐盟出售的產(chǎn)品不再允許用動物做測試。于是，在研制新型活性劑及配方時，活體外皮膚模型為減少動物測試做出了意義重大的貢獻(xiàn)。

皮膚模型

一件表皮模型具有與按照人類皮膚細(xì)胞組成制作的活體外皮膚模型有相同的功效。在一件完整的皮膚模型中，這件模型相當(dāng)于覆蓋在表皮上的真皮。不過，在某些皮膚模型的基底細(xì)胞層里還存在著黑色素。

為了在不使用動物的情況下能夠?qū)ξ镔|(zhì)進(jìn)行檢測，比如說那些影響曬黑程度的物質(zhì)，這類皮膚模型正是恰當(dāng)?shù)倪x擇?；铙w外皮膚模型對活性劑的反應(yīng)與人類皮膚相同。因此，在做美容及護(hù)膚產(chǎn)品的功效測試時，該模型正是你理解的工具。

表皮模型是經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織（OECD）批準(zhǔn)的可用于刺激性及腐蝕性測試的動物模型替代品：

OECD測試第439號：活體外皮膚刺激——重新構(gòu)建的人類表皮測試方法

OECD測試第431號：活體外皮膚腐蝕——重新構(gòu)建的人類表皮測試方法

皮膚斷面法

為了分析皮膚細(xì)胞、皮膚模型及細(xì)胞培養(yǎng)在使用美容產(chǎn)品時的變化，我們需要使用現(xiàn)代斷面技術(shù)。

現(xiàn)代斷面技術(shù)要使用工具，進(jìn)而可以分析出使用面霜及其他美容產(chǎn)品時復(fù)雜的分子變化。基因組、轉(zhuǎn)錄組及蛋白質(zhì)組測試都是補(bǔ)充測試。

在過去，解決某些問題的辦法只能是取得足夠數(shù)量的皮膚，進(jìn)而取得足夠的RNA以供分析。使用皮膚模型測試活性劑的一大優(yōu)點(diǎn)是：一件皮膚模型中五微克優(yōu)質(zhì)RNA，通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RTPCR）就可用于單個基因的芯片分析或基因表達(dá)分析。此外，人類皮膚模型可按需獲得。某些針對皮膚模型的芯片及陣列技術(shù)已經(jīng)得到公布，并將進(jìn)行更深入的研究。

研究人員針對某些單個分析過的基因或基因族皮膚模型做出了大量研究。其他研究小組也做過些觀察，比如使用過小核測試來觀察皮膚模型中一些物質(zhì)引發(fā)的基因行為。

目標(biāo)基因分析

國際人類基因組測序團(tuán)隊(duì)已經(jīng)將人類基因組中蛋白質(zhì)編碼基因的數(shù)量更正為20.000～25.000個。過去十年來DNA陣列及寡核苷酸芯片（oligochip）技術(shù)的發(fā)展首次實(shí)現(xiàn)了同時分析數(shù)千組基因的表達(dá)水平?，F(xiàn)代斷面法的使用也實(shí)現(xiàn)了在單獨(dú)一次實(shí)驗(yàn)里分析所有已知的基因。

陣列及芯片技術(shù)

雖然實(shí)驗(yàn)室里廣泛地用到了芯片技術(shù)，RNA斷面的三維模型的應(yīng)用卻比較少。按理說，與皮膚模型共同使用的話，基因表達(dá)式斷面的應(yīng)用要容易一些。

陣列分析的基本原則依據(jù)核酸的互補(bǔ)堿基對的雜交情況而定。RNA樣本中標(biāo)記的待分析互補(bǔ)DNA分子，在一組液相中與處于固相中正在分析的基因片斷組合在一起（芯片或陣列中的點(diǎn)）。

芯片雜交的基本原則包括兩段RNA樣本的逆轉(zhuǎn)錄。借助逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)合成的互補(bǔ)DNA都被打上了熒光色分子的標(biāo)記。依據(jù)互補(bǔ)堿基配對的原則，在雜交過程中互補(bǔ)DNA分子都被組合到一些點(diǎn)上，而在這些點(diǎn)上重點(diǎn)基因的補(bǔ)足DNA的順序都做了標(biāo)記。一件樣本中指定的RNA數(shù)量越大，雜交的信號就越強(qiáng)烈。如果我們同時分析上千個基因的表達(dá)，我們可以使用一款特殊的軟件，它有復(fù)雜的算法，可分析巨量數(shù)據(jù)。在陣列實(shí)驗(yàn)的分析及呈現(xiàn)過程中，將芯片數(shù)據(jù)集中是很受關(guān)注且很受歡迎的一個步驟。這樣，基因便按照它們的規(guī)則排序并著色。例如，可以從一塊腫瘤中分離出一些細(xì)胞，然后按不同數(shù)量的細(xì)胞培養(yǎng)傳代來培養(yǎng)，以便接下來細(xì)胞分析工作的開展，弄清不同培養(yǎng)條件下基因表達(dá)斷面的不同變化，于是就可以看出在與生成這些細(xì)胞系的腫瘤相對比下這些細(xì)胞系基因表達(dá)的不同點(diǎn)。

在各自的實(shí)驗(yàn)中有些基因表現(xiàn)出類似的規(guī)則，把他們集中起來，也就是分組。有共同規(guī)則的細(xì)胞系出現(xiàn)得越少，他們的分類就越細(xì)。于是，我們可以看到，隨著細(xì)胞傳代數(shù)量的不斷增加，在更改后的基因表達(dá)樣本中細(xì)胞系都被分離出來了。

各類傳代數(shù)量（早期、中期、晚期）可以展示出分等級集中細(xì)胞系（1C6，1H11）中587組基因表達(dá)的不同。他們是作為一個集合中的基本腫瘤而制成的。

基因組學(xué)

遺傳病通常是由基因的擴(kuò)增與刪除造成的。描述出惡性組織中基因復(fù)制的特性，這將有助于得出對這類疾病更詳細(xì)的診斷及預(yù)后結(jié)果。

因此，在遺傳病預(yù)診的臨床醫(yī)學(xué)方面，染色體組型分析方法已成功創(chuàng)建，并已成為一種惡性腫瘤的診斷手段。在腫瘤病例中會特別用到基因突變分析。在皮膚模型中小核鑒定用于衡量基因中毒性物質(zhì)的嚴(yán)重程度。

蛋白質(zhì)組學(xué)

蛋白質(zhì)組學(xué)方法有助于分析個基因組中一件樣本的蛋白質(zhì)與其修改情況。因?yàn)榉治龌蚪M及轉(zhuǎn)錄組無法提供任何有關(guān)編碼蛋白質(zhì)活動等級的信息，所以蛋白質(zhì)組分析有助于理解多種疾病的分子基礎(chǔ)。蛋白質(zhì)組遠(yuǎn)比轉(zhuǎn)錄組復(fù)雜，因?yàn)樗€處于幼兒期，所以其技術(shù)平臺更加狹窄。

在皮膚模型中也可以見到皮膚中非常復(fù)雜的活動，利用恰當(dāng)?shù)姆椒ㄒ材軌虮鎰e出這些活動。與基于活體檢查的方法正相反，皮膚模型的優(yōu)勢在于可生成足夠分析的材料。此外，這種物質(zhì)可在無單獨(dú)變化的條件下復(fù)制。在一次實(shí)驗(yàn)中，基因表達(dá)能夠概括皮膚模型中表達(dá)出的幾乎所有基因的活動。

*可上網(wǎng)查找該領(lǐng)域中已發(fā)表的研究與例圖（見因特網(wǎng)信息框）。endprint