胡穎慧 ，馬春祥, 梁孝莉

(1.黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院牡丹江分院，黑龍江牡丹江157041;2.牡丹江市種子管理處)

松塔景天(SedumnicaeenseAll.)，又名松葉景天，為景天科景天屬多年生常綠肉質(zhì)草本植物，植株基部分蘗能力較強，而成叢狀，株高10～20cm，全株呈灰綠色[1]。葉短針狀，三岀輪生，排列緊密，頂部呈密集的開裂松果狀，花黃色。生長習(xí)性耐旱、極耐寒，喜光，不耐蔭。對土壤要求不嚴，但以排水良好、富含腐殖質(zhì)的砂壤土更為適宜?？捎糜谕ピ鹤鞯乇辉灾玻蜃骰▔傔?，或配置模紋花壇，也可盆栽作觀葉植物置于室內(nèi)，或用于屋頂綠化[2]，在生態(tài)城市建設(shè)中有著極為廣闊的應(yīng)用前景。

松塔景天成活率高、觀賞性狀優(yōu)良，目前其栽培繁殖已逐步進入市場化，繁殖方式以扦插繁殖為主，但此法繁殖率較低，且耗時耗力。通過組織培養(yǎng)，在短時期內(nèi)獲得大量植株，是經(jīng)濟有效的快速繁殖方法，也是工廠化育苗的主要途徑，此外也可以為合理開發(fā)利用和保存野生植物資源提供有價值的參考，因而對松塔景天離體快繁的研究在生產(chǎn)上有重大意義。

目前，對松塔景天的研究主要集中在引種栽培[3]以及抗逆生理響應(yīng)[4-7]等方面，對組織培養(yǎng)的研究鮮有報道，僅有邢苗苗等以莖段為外植體，研究了松塔景天和粗壯景天的組培快繁[8]，而本研究是以幼嫩葉片為外植體，通過器官發(fā)生途徑建立松塔景天的高效快繁體系，相同方法的研究還未見報道。

1 材料方法

1.1 材料

供試植物材料為松塔景天(SedumnicaeenseAll.)，外植體選擇發(fā)育正常的幼嫩葉片。

1.2 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，蔗糖30g/L、瓊脂7.8g/L、pH值為5.8、培養(yǎng)溫度(25±2)℃、光照強度1500～2000 lx。

1.3 方法

1.3.1 外植體處理。取松塔景天植株幼嫩葉片作為外植體，經(jīng)清水沖洗10min后，用75%的酒精浸泡10～15s表面消毒；再浸入10%次氯酸鈉溶液3～5min；隨后，用滅菌蒸餾水淋洗3次。將其平放在高壓滅菌過的濾紙上，用滅菌刀將葉片切成0.5cm長的小塊。

1.3.2 愈傷組織誘導(dǎo)。將外植體接種于含基本培養(yǎng)基附加不同濃度的6-BA(0、0.1、0.5、1.0mg/L)和NAA(0、0.05、0.1、0.15 mg/L)的培養(yǎng)瓶中，每處理接種30個外植體，重復(fù)3次，置于培養(yǎng)室內(nèi)先進行暗培養(yǎng)14d后再進行光照培養(yǎng)，觀察不同激素配比培養(yǎng)基中愈傷組織的生長狀態(tài)，統(tǒng)計愈傷組織誘導(dǎo)率。

1.3.3 芽分化及再生。將誘導(dǎo)出的松塔景天愈傷組織，切分后分別繼代培養(yǎng)于附加不同濃度6-BA(0.1、0.5、1.0mg/L)和NAA(0.05、0.1、0.15mg/L)的培養(yǎng)瓶中進行光照培養(yǎng)，每處理接種30個愈傷組織，重復(fù)3次，30 d后比較不同濃度植物生長調(diào)節(jié)劑組合下愈傷組織芽分化情況、統(tǒng)計芽分化率。

1.3.4 生根培養(yǎng)。將誘導(dǎo)的不定芽切下接種于附加不同濃度IBA的生根培養(yǎng)基上。生根培養(yǎng)基以1/2MS為基本培養(yǎng)基，附加4種濃度梯度的IBA(0.1、0.3、0.5、1.0mg/L)，每處理接種50個不定芽，重復(fù)3次，30d后觀察生根情況，統(tǒng)計不定芽生根率。

1.3.5 馴化移栽。待組培苗的根長達到3～5cm時即可進行馴化移栽，首先松動培養(yǎng)基的瓶蓋1～2d，然后將瓶蓋完全打開，倒入少量無菌水，在培養(yǎng)室中煉苗6～7天后輕輕夾出小苗，洗凈培養(yǎng)基，并避免根部損傷。移栽到混合基質(zhì)(草炭土∶蛭石∶珍珠巖= 2∶1∶1)中，噴霧或澆水加蓋塑料薄膜以保持水分平衡，提高小苗周圍空氣濕度(90%～100%)，減少葉面蒸騰。

1.3.6 數(shù)據(jù)處理。所有試驗數(shù)據(jù)采用SPSS數(shù)據(jù)統(tǒng)計軟件進行方差分析，0.05檢測水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑配比對愈傷組織誘導(dǎo)的影響

將松塔景天外植體接種于不同植物生長調(diào)節(jié)劑配比培養(yǎng)基中，培養(yǎng)7～10d，切口處開始膨大(圖1-A)，經(jīng)過30d培養(yǎng)，會有不同程度的愈傷組織長出，但在不同濃度梯度下，愈傷組織的誘導(dǎo)率明顯不同，愈傷組織的色澤、松散程度及生長狀態(tài)也有所差別(見表1)。

試驗結(jié)果表明，在不添加任何植物生長調(diào)節(jié)劑及只添加一種植物生長調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基中，愈傷組織的誘導(dǎo)率顯著低于2種激素不同濃度配比的培養(yǎng)基(表1)，說明6-BA及NAA對松塔景天誘導(dǎo)愈傷組織都起著至關(guān)重要的作用。

由表1可以看出，在MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L培養(yǎng)基上誘導(dǎo)培養(yǎng)的愈傷組織不僅誘導(dǎo)率高達87.78%，顯著高于其他幾種濃度配比的培養(yǎng)基，且生長速度快，質(zhì)量最好，外觀呈淺綠色的顆粒狀(圖1-B)，質(zhì)地較為疏松，生長速度快。一般認為，這種愈傷組織為具有分化能力的愈傷組織[9]。

表1 不同濃度植物生長調(diào)節(jié)劑對松塔景天愈傷組織誘導(dǎo)的影響

2.2 不同濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑配比對愈傷組織芽分化的影響

將長勢良好的愈傷組織切割后，接種于不同植物生長調(diào)節(jié)劑配比培養(yǎng)基中誘導(dǎo)芽分化，培養(yǎng)30d后，統(tǒng)計芽誘導(dǎo)率見表2，試驗結(jié)果表明，在不同植物生長調(diào)節(jié)劑濃度配比中，MS+6-BA 1.0mg/L +NAA0.1mg/L 培養(yǎng)基中愈傷組織芽分化率顯著高于其他培養(yǎng)基，為88.89%，14 d時愈傷組織表面開始出現(xiàn)的綠色芽點(圖1-C)，隨后淡綠色芽點漸漸密集(圖1-D)，30d后迅速誘導(dǎo)產(chǎn)生叢生芽(圖1-E)，將叢生芽切分后進行繼代培養(yǎng)，14d后形成不定芽(圖1-F)。

表2 不同濃度植物生長調(diào)節(jié)劑對松塔景天愈傷組織芽分化的影響

2.3 不同濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑對組培苗生根的影響

圖1 松塔景天組培快繁過程

選擇在最適芽分化培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)的松塔景天組培苗，接種到1/2MS培養(yǎng)基，附加不同濃度的IBA，30d后統(tǒng)計生根情況(見表3)。

表3 不同濃度IBA對松塔景天組培苗生根的影響

由表3可以看出，松塔景天組培苗在幾個不同處理培養(yǎng)基中均能生根，但生根率及根部長勢有所不同，在添加0.3 mg/L IBA的培養(yǎng)基中生根率達91.33%，顯著高于其他濃度處理，且根部長勢粗壯，主側(cè)根能夠明顯區(qū)分(圖1-G)，因此1/2MS+0.3 mg/L IBA為松塔景天組培苗最適生根培養(yǎng)基。組培苗生根后獲得完整的再生植株，待根部長至3～5cm后，進行馴化移栽，30 d后松塔景天組培苗成活率達84%(圖1-H)。

3 討論與結(jié)論

由于植物細胞在離體狀態(tài)下缺乏合成生長素和分裂素的能力，因此，在組織培養(yǎng)過程中往往需要添加適當?shù)耐庠粗参锷L調(diào)節(jié)劑(PGRs)以促進細胞的生長和分化[10]。PGRs又稱植物激素，包括細胞分裂素、生長素等。細胞分裂素和生長素搭配使用可誘導(dǎo)植物脫分化形成愈傷組織，被廣泛應(yīng)用于植物組織培養(yǎng)。但不同的植物對植物生長調(diào)節(jié)劑的種類和濃度的反應(yīng)不盡相同[11]。

本試驗以松塔景天幼嫩葉片為外植體，通過器官發(fā)生途徑，即誘導(dǎo)愈傷組織、愈傷組織芽分化、生根培養(yǎng)的途徑研究松塔景天的高頻再生體系，試驗結(jié)果表明松塔景天最適愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5mg/L+NAA0.05mg/L，愈傷組織誘導(dǎo)率達87.78%，愈傷組織顏色淡綠色，生長較快，質(zhì)地疏松。關(guān)于芽分化培養(yǎng)有研究結(jié)果表明，6-BA/NAA的比值高時有利于不定芽的分化[12-13]，本試驗篩選出的最適芽分化培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0mg/L+NAA0.1mg/L，其6-BA/NAA的比值為10，這與前人研究結(jié)果相一致。關(guān)于植物組織生根培養(yǎng)，大多數(shù)試驗已得出結(jié)論，以1/2MS作為生根培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基效果較好[14]，因此本試驗也使用這種配方，邢苗苗[8]認為NAA抑制根的生長，而IBA適合景天類植物生根，并發(fā)現(xiàn)1/2 MS附加IBA 0.5 mg/L為最佳的生根培養(yǎng)基，而本試驗篩選出的最適生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 0.3 mg/L，這可能是由于不同外植體自身的生理結(jié)構(gòu)、分化狀態(tài)以及脫分化能力存在的差異造成的。長勢良好的組培苗經(jīng)馴化移栽后成活率達84%。

本試驗建立了松塔景天快速繁殖體系，可大量提供優(yōu)質(zhì)松塔景天組培苗，此外還可為松塔景天的種植資源保存、品種改良等提供一定的指導(dǎo)意義。

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